一种高分泌纳豆激酶的枯草芽孢杆菌及其应用

    公开(公告)号:CN107099487A

    公开(公告)日:2017-08-29

    申请号:CN201710498622.5

    申请日:2017-06-27

    CPC classification number: C12R1/125 C12N9/54 C12Y304/21062

    Abstract: 本发明公开了一种高分泌纳豆激酶枯草芽孢杆菌及其应用,所述菌株的分类命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)gs‑11061,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,其保藏编号是CGMCC No.13932。本发明还公开了利用上述高产纳豆激酶的枯草芽孢杆菌生产纳豆激酶的方法。本发明方法与其他发酵方法相比,在发酵方面,该菌可以在高温条件下发酵,同时明显地缩短发酵周期;在培养基成分方面,利用木糖母液粗原料降低成本,能耗低,污染小;与原始菌相比,纳豆激酶的分泌量明显提高,且发酵产物易处理,副产物少。

    一种固定化磷脂酶D催化制备磷脂酰丝氨酸的方法

    公开(公告)号:CN103966277A

    公开(公告)日:2014-08-06

    申请号:CN201410218551.5

    申请日:2014-05-22

    CPC classification number: Y02P20/588

    Abstract: 本发明公开了一种固定化磷脂酶D催化制备磷脂酰丝氨酸的方法,该方法包括如下步骤:(1)以甲壳素为载体,以戊二醛为交联试剂,固定游离磷脂酶D得到磷脂酶D的固定化酶;(2)以步骤(1)制备得到的磷脂酶D的固定化酶为催化剂,以醋酸丁酯为有机相溶剂,以pH5.5、50mM的醋酸钠缓冲液为水相溶剂,在温度20~60℃条件下,L-丝氨酸与大豆磷脂按摩尔比10~100:1反应制备磷脂酰丝氨酸,反应结束后过滤回收磷脂酶D重复使用。本发明方法在双相催化体系中转酯率达到78%,固定化酶可以重复利用。方法简单,易于操作,制备成本低廉。

    醇脱氢酶突变体及其应用
    46.
    发明公开

    公开(公告)号:CN103642765A

    公开(公告)日:2014-03-19

    申请号:CN201310727759.5

    申请日:2013-12-25

    Inventor: 严明 许琳 邱晓鸾

    CPC classification number: C12N9/0006 C12P7/62

    Abstract: 本发明公开了一种醇脱氢酶突变体,为野生型醇脱氢酶的氨基酸发生如下任意一种情况的突变:野生型醇脱氢酶的序列中第35位丝氨酸突变为天冬氨酸;野生型醇脱氢酶的序列中第35位丝氨酸突变为天冬氨酸,且第36位精氨酸突变为异亮氨酸;野生型醇脱氢酶的序列中第34位丙氨酸、缬氨酸、或半胱氨酸突变为异亮氨酸,且第35位丝氨酸突变为天冬氨酸,且第36位精氨酸突变为异亮氨酸;野生型醇脱氢酶的序列中第13位丝氨酸突变为丙氨酸,且第34位丙氨酸、缬氨酸、或半胱氨酸突变为异亮氨酸,且第35位丝氨酸突变为天冬氨酸,且第36位精氨酸突变为异亮氨酸;所述的野生型醇脱氢酶的序列如SEQ ID NO:2、4、6或8中的任意一项所示。

    一种基于TTC染色法的高活力酵母细胞定量筛选方法

    公开(公告)号:CN103525896A

    公开(公告)日:2014-01-22

    申请号:CN201310447516.6

    申请日:2013-09-27

    Abstract: 本发明公开了一种基于TTC染色法的高活力酵母细胞定量筛选方法,将待检测酵母细胞菌液涂布于平板,培养待其长出单菌落;然后接种于96孔细胞培养板各孔培养液中,培养至测定得到菌体OD值在1-3之间,离心弃上清;在96孔细胞培养板各孔中加入TTF萃取剂,震荡10-15S后离心;将震荡离心后的上清液吸取到96孔酶标板中,利用酶标仪在486nm波长下测定TTF吸收值,根据TTF标准曲线及测定的细胞OD值,计算每个孔中TTF含量,以此确定细胞活力大小。本方法筛选结果定量可靠地直接反应细胞活力,不仅能明显降低筛选时间,而且能降低操作过程中的视觉判断产生的人为错误。

    一种表达β-半乳糖苷酶的重组菌株及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN102115718A

    公开(公告)日:2011-07-06

    申请号:CN201010591434.5

    申请日:2010-12-16

    Abstract: 本发明公开了一种表达β-半乳糖苷酶的重组菌株及其构建方法和应用。克隆得到Thermus thermophilus HB27半乳糖苷酶基因bgal,并将其插入到真核表达载体pPIC9K上,转化毕赤酵母菌株GS 115内,可得到β-半乳糖苷酶表达量达到14000U/ml。β-半乳糖苷酶基因bgal表达的分子量为58Dk,最适温度为70℃,其最适温度下很稳定。在pH6.5时该乳糖酶水解活力最高,而且稳定性较好。高效表达的β-半乳糖苷酶可直接用于乳制品的巴氏消毒法,可以做到灭菌的同时降解乳糖,避免了灭菌后添加酶所造成的二次污染。在60度,30分钟,HB27半乳糖苷酶可以降解牛奶90%的乳糖。

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