公开(公告)号：CN114196681A

公开(公告)日：2022-03-18

申请号：CN202111086213.7

申请日：2021-09-16

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 聂燕芳 ,  鄢甜甜 ,  赵雅丽 ,  李云锋 ,  李华平

IPC: C12N15/31 ,  A01N57/16 ,  A01P3/00

Abstract: 本发明公开一种FoCupin1基因在调控香蕉枯萎病菌致病力中的应用，属于植物基因工程领域。本发明通过构建基因敲除载体，将其导入香蕉枯萎病菌原生质体，获得敲除突变体ΔFoCupin1。该突变体与野生型相比，菌落生长速率、产孢量、细胞壁完整性、抗高渗透胁迫、抗氧化胁迫、玻璃纸穿透等方面没有显著差异。致病性测定表明，FoCupin1基因的缺失导致香蕉枯萎病菌致病性显著降低；将该基因回补后，其致病性则恢复到野生型水平。qRT‑PCR分析表明，敲除突变体中镰刀菌酸5个关键合成基因中有4个基因表达量与野生型相比显著降低。本发明有助于深入阐明香蕉枯萎病菌的致病分子机制，为开发有效杀菌剂提供了靶标基因。

公开(公告)号：CN110183521B

公开(公告)日：2021-05-28

申请号：CN201910433251.1

申请日：2019-05-23

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 李云锋 ,  聂燕芳 ,  田苗 ,  李华平 ,  王振中

IPC: C07K14/37 ,  C12N15/31 ,  A01N57/16 ,  A01P3/00

Abstract: 本发明公开一种稻瘟菌基因MoRMD1在调控稻瘟菌致病力中的应用，属于植物基因工程领域。本发明通过构建基因敲除载体，将其导入稻瘟菌原生质体；利用同源重组方法将该基因MoRMD1从稻瘟菌中敲除，获得敲除突变体ΔMoRMD1；所得到的稻瘟菌敲除突变体在附着胞形成方面存在缺陷，并且MoRMD1对维持细胞壁的完整性有重要作用。致病性试验表明，MoRMD1的缺失显著降低了稻瘟菌的毒力，在水稻叶片上不能形成明显病斑。本发明证实MoRMD1是稻瘟菌附着胞形成、维持细胞壁完整性和致病性所必需的。我们的研究有助于深入阐明稻瘟菌的致病分子机制，为开发有效杀菌剂提供了靶标基因。

公开(公告)号：CN110184199B

公开(公告)日：2021-04-23

申请号：CN201910433431.X

申请日：2019-05-23

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 聂燕芳 ,  李云锋 ,  颜瑞 ,  蒙姑 ,  何艳秋 ,  李华平 ,  王振中

IPC: C12N1/14 ,  C12N3/00 ,  C12R1/77

Abstract: 本发明公开一种香蕉枯萎病菌1号小种原生质体的制备与再生方法。该方法包括Foc1分生孢子悬浮液的制备、Foc1菌丝体的收集、菌丝体细胞壁的酶解、Foc1原生质体的收集、Foc1原生质体的再生等步骤。本发明通过所述方法酶解菌丝细胞，所获原生质体的制备数最高达到6.0×108个/mL，所得原生质体大小均一，形态饱满，近似圆形。本发明采用含有200g/L葡萄糖的CM固体培养基作为再生培养基，提高了Foc1原生质体的再生率，最高为28.6％，明显高于现有的香蕉枯萎病菌原生质体的再生方法，为后续原生质体转化技术研究香蕉病菌致病分子机制提供了良好的基础。本发明方法制备过程简单、高效，便于操作。

公开(公告)号：CN110669773B

公开(公告)日：2021-03-26

申请号：CN201910986131.4

申请日：2019-10-17

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 李云锋 ,  聂燕芳 ,  蒙姑 ,  李华平 ,  王振中

IPC: C12N15/31 ,  C07K14/37 ,  A01N57/16 ,  A01P3/00

Abstract: 本发明公开一种基因FoPDCD5在调控香蕉枯萎病菌致病力中的应用，属于植物基因工程领域。本发明利用同源重组方法将该基因从香蕉枯萎病菌中敲除，获得敲除突变体ΔFopdcd5；通过构建基因回补载体，将其导入ΔFopdcd5原生质体；利用随机插入的方法将该基因回补到敲除突变体中，获得回补突变体ΔFopdcd5‑com。致病性测定表明，敲除突变体ΔFopdcd5的致病性显著降低；回补突变体ΔFopdcd5‑com的致病性则恢复到野生型水平。本发明证实FoPDCD5是香蕉枯萎病菌分生孢子产生、应对氧化胁迫和致病性所必需的。有助于深入阐明香蕉枯萎病菌的致病分子机制，为开发有效杀菌剂提供了靶标基因。

公开(公告)号：CN111560384A

公开(公告)日：2020-08-21

申请号：CN202010322384.4

申请日：2020-04-22

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 聂燕芳 ,  何艳秋 ,  李云锋 ,  李华平

IPC: C12N15/31 ,  C07K14/37 ,  A01N63/60 ,  A01P3/00

Abstract: 本发明公开一种基因FoRnt在调控香蕉枯萎病菌致病力中的应用，属于植物基因工程领域。本发明通过构建基因敲除载体，将其导入香蕉枯萎病菌原生质体；利用同源重组方法将该基因从香蕉枯萎病菌中敲除，获得敲除突变体ΔFoRnt；通过构建基因回补载体，将其导入ΔFoRnt原生质体，获得回补突变体ΔFoRnt-com。试验证明，ΔFoRnt在孢子形态、菌丝形态、抗高渗透、氧化胁迫等方面与野生型相比没有显著性差异；但FoRnt的缺失导致了其致病力的显著降低；本发明证实FoRnt是香蕉枯萎病菌致病性所必需的。我们的研究有助于深入阐明香蕉枯萎病菌的致病分子机制，为开发有效杀菌剂提供了靶标基因。

公开(公告)号：CN111534527A

公开(公告)日：2020-08-14

申请号：CN202010315617.8

申请日：2020-04-21

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 聂燕芳 ,  李云锋 ,  颜瑞 ,  李华平

IPC: C12N15/53 ,  C12N9/06 ,  C12N15/80 ,  C12N15/90 ,  C12Q1/18 ,  C12R1/77

Abstract: 本发明公开一种基因FoPao在调控香蕉枯萎病菌致病力中的应用，属于植物基因工程领域。本发明通过构建基因敲除载体，将其导入香蕉枯萎病菌原生质体；利用同源重组方法将该基因从香蕉枯萎病菌中敲除，获得敲除突变体ΔFoPao；通过构建基因回补载体，将其导入ΔFoPao原生质体；利用随机插入方法，将该基因回补到敲除突变体中，获得回补突变体ΔFoPao-com。致病性试验表明，基因FoPao的缺失显著增加了香蕉枯萎病菌的毒力；将该基因回补后，回补突变体的毒力与香蕉枯萎病菌野生型一致。本发明证实FoPao与香蕉枯萎病菌的致病性有关。我们的研究有助于深入阐明香蕉枯萎病菌的致病分子机制。

公开(公告)号：CN109136166A

公开(公告)日：2019-01-04

申请号：CN201810759252.0

申请日：2018-07-11

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 聂燕芳 ,  李云锋 ,  王振中 ,  叶智坚 ,  邹小桃

IPC: C12N5/04 ,  C07K14/415 ,  C07K1/30

CPC classification number: C12N5/04 ,  C07K14/415

Abstract: 本发明属于蛋白质组学技术领域，具体首次公开了一种适于双向电泳的水稻叶片质膜磷酸化蛋白的提取方法，包括水稻叶片粗质膜的提取、水稻叶片质膜的纯化及水稻叶片质膜磷酸化蛋白质的富集等步骤。本发明所述提取方法操作简单、提取效率高、成本低，所获的水稻叶片质膜纯度可达93%以上，从质膜蛋白质中富集的质膜磷酸化蛋白质得率为3.33～3.89%。该方法适合于质膜磷酸化蛋白提取困难、干扰杂质多的植物材料；同时所得质膜磷酸化蛋白杂质和干扰物较少，可满足双向电泳的要求，所获双向电泳图谱背景清晰、蛋白质点分布均匀、纵向拖尾和水平横纹现象较少，且具有良好的重复性；该方法适用于单子叶植物质膜磷酸化蛋白质组的制备与分析。