检测猪圆环病毒3型的实时荧光定量PCR引物、试剂盒和检测方法

    公开(公告)号:CN107338330A

    公开(公告)日:2017-11-10

    申请号:CN201710656101.8

    申请日:2017-08-03

    Abstract: 本发明属于分子生物学技术领域,具体涉及一种检测猪圆环病毒3型的实时荧光定量PCR引物、试剂盒和检测方法。所述的检测猪圆环病毒3型的实时荧光定量PCR引物其核苷酸序列如SEQ ID NO.1~2所示。本发明还提供了一种包含上述引物的试剂盒以及猪圆环病毒3型的检测方法。上述引物、试剂盒以及检测方法特异性强、灵敏性高和重复性稳定,扩增产物的融解曲线波峰单一,无引物二聚体,与猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪蓝耳病毒基因组均无交叉反应;灵敏性为102拷贝/μL,比常规PCR高100倍;组间和组内重复试验的变异系数均小3.0%。为该疫病的分子流行病学和防控研究奠定了基础。

    一种基于自然转化的副猪嗜血杆菌高效遗传重组方法及应用

    公开(公告)号:CN105331601A

    公开(公告)日:2016-02-17

    申请号:CN201510790960.7

    申请日:2015-11-17

    Abstract: 本发明公开了一种基于自然转化的副猪嗜血杆菌高效遗传重组方法及应用,属于细菌遗传改造技术领域。本发明中通过在上游引物中添加USS序列ACCGCTTG,使的PCR产物含有这个USS序列,副猪嗜血杆菌会识别并带入菌体内部进行重组,无需构建突变常用的自杀质粒,本方法把抗性基因直接引入到PCR产物中,直接用PCR产物就能实现筛选,同时在引物中引入USS,细菌就会直接吞噬这个重组模版用于同源重组。本发明的基于自然转化的副猪嗜血杆菌高效遗传重组方法在构建副猪嗜血杆菌双组分系统突变体中应用。

    利用pFastBacDual杆状病毒表达PCV2Cap蛋白的方法

    公开(公告)号:CN102839195A

    公开(公告)日:2012-12-26

    申请号:CN201210248620.8

    申请日:2012-07-18

    Abstract: 本发明公开了一种利用pFast Bac Dual杆状病毒表达PCV2Cap蛋白的方法,该方法包括以下步骤:扩增带有His标签的编码PCV 2 Cap蛋白的基因片段;将上述基因片段连接到pFast Bac Dual质粒上,获得重组转移质粒pFast Bac-p10-ORF2-pH-ORF2;将重组转移质粒转化大肠杆菌DH10Bac,经蓝白斑筛选后得到重组穿梭载体Bac-p10-ORF2-pH-ORF2;将重组穿梭载体转染昆虫细胞,获得重组杆状病毒Ac.Dual-Cap;将重组杆状病毒接毒于昆虫细胞,培养后收集昆虫细胞,将表达产物纯化后得到重组Cap蛋白。本发明方法解决了Cap蛋白在真核细胞中表达量低的难题。本发明方法重组的Cap蛋白设计有His标签,利于其后续的纯化,并且其生物活性优于原核表达系统所表达的Cap蛋白,可以应用于流行病学诊断方法的建立及PCV2亚单位疫苗的研发。

Patent Agency Ranking