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公开(公告)号：CN104232804B
公开(公告)日：2016-03-23
申请号：CN201410523240.X
申请日：2014-10-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种梯度变温诱导提高透明质酸酶表达量的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过降低重组毕赤酵母菌株在诱导阶段的诱导温度，解决了原重组菌株产量较低的问题，实现了重组透明质酸酶在毕赤酵母中产量的显著提高，为进一步降低水蛭透明质酸酶的生产成本和扩大应用范围奠定了一定的基础，适合于工业化生产。
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公开(公告)号：CN103451163B
公开(公告)日：2015-09-30
申请号：CN201310410789.3
申请日：2013-09-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活及热稳定提高的过氧化氢酶突变体，属于生物工程领域。将来源于枯草芽孢杆菌（B.subtilis WSHDZ-01）的过氧化氢酶进行基因进行定点突变，使其编码的氨基酸序列在第114位由赖氨酸K分别突变为酪氨酸Y、缬氨酸V、蛋氨酸M或异亮氨酸I。本发明所述的过氧化氢酶突变体的表达量分别是突变之前的2.23、2.41、1.46、1.38倍，在温度耐受性方面突变之后的酶的半衰期分别是突变前的2.17、1.5、2、1.67倍。本发明所得过氧化氢酶突变体更加适合工业化的生产需求，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN104818265A
公开(公告)日：2015-08-05
申请号：CN201510218597.1
申请日：2015-04-30
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/80 , C12H1/003 , C12Y305/01005 , C12Y305/01075
Abstract: 本发明公开了本发明涉及一种降解尿素和氨基甲酸乙酯的耐乙醇双功能酶及其应用，属于生物工程技术领域。该酶是来自于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis 9945A)的脲酶，能够耐受高浓度乙醇的同时高效降解氨基甲酸乙酯。本发明利用大肠杆菌表达系统BL21(DE3)/pRSFDuet-1，成功实现了具有EC水解酶活力的脲酶基因的高效表达，以EC为底物时酶活达到2.93U/ml，以尿素为底物时酶活达到5.81U/ml。重组酶在20％的乙醇中37℃保留4h，以EC为底物时仍可保留其50％以上的活性。本发明制备的重组酶为实现黄酒中EC及尿素的消除，实现EC水解酶工业化生产奠定了基础，具有巨大的经济及社会效益。
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公开(公告)号：CN104388372A
公开(公告)日：2015-03-04
申请号：CN201410734915.5
申请日：2014-12-04
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产软骨素的重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明将UDP-GlcNAc C4异构酶KfoA和软骨素合成酶KfoC编码基因整合于枯草芽孢杆菌基因组上完善了其代谢合成软骨素途径，同时，对枯草芽孢杆菌中UDP-GlcA和UDP-GlcNAc合成途径的基因，进行模块化组装表达分析，通过控制不同的UDP-GlcA和UDP-GlcNAc浓度，分析了枯草芽孢杆菌产软骨素合成途径上的关键基因及节点。本发明为食品级微生物高效生产制备软骨素奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN104312935A
公开(公告)日：2015-01-28
申请号：CN201410568277.4
申请日：2014-10-22
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0069 , C12N9/0006 , C12N9/90 , C12P7/58 , C12Y101/01203 , C12Y113/99001 , C12Y505/01004
Abstract: 本发明公开了一种构建重组酵母发酵生产葡萄糖二酸的方法，属于代谢工程领域。本发明通过在酵母中表达肌醇-1-磷酸合成酶基因(Ino1)、肌醇加氧酶基因(MIOX)，实现葡萄糖醛酸的生成途径，同时表达来源于恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)的醛酸脱氢酶(Udh)，成功构建了葡萄糖二酸的合成途径。其中，重组毕赤酵母在YPD发酵培养基中生成葡萄糖二酸40mg/L，在YPD-MI(YPD培养基中加入60mM肌醇)发酵培养基中生成葡萄糖二酸60mg/L。本发明提出的重组酵母发酵生成葡萄糖二酸的方法，具有广阔的发展前景，为生物合成葡萄糖二酸奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104312934A
公开(公告)日：2015-01-28
申请号：CN201410568261.3
申请日：2014-10-22
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0069 , C12P19/02 , C12Y113/99001
Abstract: 本发明公开了一种构建重组酵母生物合成葡萄糖醛酸的方法，属于代谢工程领域。本发明将不同来源的肌醇加氧酶基因(MIOX)在不同酵母宿主中表达，以葡萄糖或肌醇为底物，实现了葡萄糖醛酸的生物合成。其中，重组毕赤酵母菌株在YPD发酵培养基中生成葡萄糖醛酸20mg/L,在YPD-MI(YPD培养基中加入60mM肌醇)发酵培养基中生成葡萄糖醛酸50mg/L。本发明提出的重组酵母合成葡萄糖醛酸的方法，具有广阔的发展前景，为生物法合成葡萄醛酸提供了新的思路。
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公开(公告)号：CN104263666A
公开(公告)日：2015-01-07
申请号：CN201410467076.5
申请日：2014-09-12
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N1/16 , C12N15/815 , C12P19/26 , C12R1/84
Abstract: 本发明公开了一种产小分子透明质酸的重组毕赤酵母及其构建方法，属于生物工程技术领域。本发明采用兽疫链球菌来源的透明质酸合酶hasA和枯草芽孢杆菌来源的UDP-葡萄糖脱氢酶tuaD，重组Pichia pastoris GS115宿主中表达，实现了透明质酸的生产；同时，采用水蛭来源的透明质酸酶整合至毕赤酵母基因组上，分别置于不同强度的组成型启动子下分泌表达，通过控制透明质酸酶的分泌表达量来制备不同分子量大小的小分子透明质酸产物，制备的产物分子量范围有差异，对于微生物直接生产特定范围的小分子透明质酸具有重要的指导借鉴意义。本发明为高效制备小分子透明质酸奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN104212830A
公开(公告)日：2014-12-17
申请号：CN201410447500.X
申请日：2014-09-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌自调控表达系统及其构建方法和应用，属于基因工程领域。本发明的表达系统包括一种木糖诱导表达核酸内切酶基因的枯草芽孢杆菌和一种组成型表达抗核酸内切酶基因的质粒表达载体。在含有诱导剂木糖存在的培养基中，只有含有稳定存在该表达载体的枯草芽孢杆菌才能正常生长。利用本发明表达系统分别表达了荧光蛋白基因(gfp)、透明质酸合成酶基因(hasA)和角蛋白酶基因(ker)，通过发酵培养，荧光强度、透明质酸含量和角蛋白酶活分别比利用抗生素维持的质粒提高21.8％、45％和30.2％。
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公开(公告)号：CN104212732A
公开(公告)日：2014-12-17
申请号：CN201410467077.X
申请日：2014-09-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产透明质酸的重组毕赤酵母及其构建方法，属于生物工程技术领域。本发明采用兽疫链球菌来源的透明质酸合酶hasA和枯草芽孢杆菌来源的UDP-葡萄糖脱氢酶tuaD，分别置于组成型启动子GAP和TEF1下表达，在毕赤酵母GS115中实现了透明质酸的生产。本发明为高效制备透明质酸奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN103614352A
公开(公告)日：2014-03-05
申请号：CN201310597818.1
申请日：2013-11-22
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/2474 , C12Y302/01035
Abstract: 本发明公开了一种高效重组表达透明质酸酶的方法，属于基因工程技术领域。本发明通过在重组透明质酸酶基因N端添加一段编码组氨酸的核苷酸序列，不仅简化了透明质酸酶的纯化步骤，同时实现了重组透明质酸酶的高活性分泌表达，活性达到了21333.33U/mL。本发明所构建的重组毕赤酵母工程菌株，具有非常大的应用前景。本发明所提出的提高透明质酸酶高效表达制备的方法，进一步降低了透明质酸酶的生产成本，为工业化生产奠定了基础。
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