一种海藻糖合酶突变体及其制备与应用

    公开(公告)号:CN104877983A

    公开(公告)日:2015-09-02

    申请号:CN201510208489.6

    申请日:2015-04-28

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 吴敬 宿玲恰 张悦

    CPC classification number: C12N9/90 C12P19/12 C12Y504/99016

    Abstract: 本发明公开了一种海藻糖合酶突变体及其制备与应用,属于基因工程和酶工程领域。本发明将Thermobifida fusca YX的海藻糖合酶的海藻糖合酶活性中心附近第271位的Gln密码子变成Met密码子,第220位的Ile密码子变成Val密码子,第228位Val密码子变成Ile密码子,第290位Cys密码子变成Val密码子,第294位Phe密码子变成Tyr密码子,第332位Ile密码子变成Phe密码子,分别得到突变体Q271M、I220V、V228I、C290V、F294Y、I332F。并在I220V基础上进行双突变得到突变体I220V/Q271M、I220V/V228I、I220V/C290V、I220V/F294Y、I220V/I332F。突变体实现了海藻糖合酶制备海藻糖转化率的提高,具有较高的工业价值。

    一种角质酶在造纸工业中的应用

    公开(公告)号:CN103757960A

    公开(公告)日:2014-04-30

    申请号:CN201310749747.2

    申请日:2013-12-31

    Applicant: 江南大学

    CPC classification number: Y02W30/648

    Abstract: 本发明公开了一种角质酶在造纸工业中的应用,包括以下:采用角质酶控制二次胶黏物、脱墨或以聚丙烯酸酯为底物的模拟白水处理,属于造纸废水处理领域。角质酶为来源于Thermobifidafusca,氨基酸序列如Genbank编号AAZ54920.1或AAZ54921.1所示;或氨基酸序列与Thermobifidafusca的角质酶至少有90%同源性且具有角质酶活性的酶,将其添加到各种要处理的水体中,利用角质酶对设备中的二次胶黏物进行处理、脱墨、对循环白水进行处理,相对于原有方法以及脂肪酶法效果好、成本低,提高产品质量和生产效率,降低单位产品的能源消耗,具有广阔的应用前景。

    一种高效分泌表达重组角质酶的基因工程菌及其构建方法

    公开(公告)号:CN101792729A

    公开(公告)日:2010-08-04

    申请号:CN200910260984.6

    申请日:2009-12-18

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 一种高效分泌重组角质酶的基因工程菌及其构建方法,属于生物工程技术领域。该基因工程菌是携带2种重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3),所述重组质粒为携带α-溶血素(α-hlyA)途径中特有基因的质粒pSTV28及含有角质酶-hlyAs基因的质粒pET20b(+)。该基因工程菌的构建:包括构建两个关键重组质粒并分别转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高效分泌重组角质酶的基因工程菌。用所述的基因工程菌生产角质酶包括液体培养和诱导表达两个步骤。以嗜热单胞菌Thermobifida fusca WSH03-11角质酶Tfu_0883作为报告蛋白,摇瓶发酵表明角质酶胞外产量是306U/mL,为本研究室前期工作采用II型分泌途径产量的1.7倍,实现了角质酶的高效分泌表达。

    一种表达几丁质酶的重组菌的构建及高酶活突变体的制备

    公开(公告)号:CN116254249A

    公开(公告)日:2023-06-13

    申请号:CN202310144326.0

    申请日:2023-02-20

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 宿玲恰 吴敬 袁源

    Abstract: 本发明公开了一种表达几丁质酶的重组菌的构建及高酶活突变体的制备,属于基因工程和酶工程技术领域。本发明使用内源性强启动子SpoVG及信号肽YqxI实现了地衣芽孢杆菌来源的几丁质酶BlChiA在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WS9中的分泌表达,并进一步定点突变,提高了几丁质酶的表达量与耐酸性。所得几丁质酶突变体E336K/A472T的发酵酶活达2.67U/mL,同时,该几丁质酶突变体最适反应pH为5.0,且在pH 3.0‑pH 6.0范围内有较好的稳定性,残余酶活达90%以上,具有稳定性好、酸耐受度强等优势,适用于工业化生产中获得高转化率的寡糖产物。

    一种乙酰木聚糖酯酶克隆表达及其在造纸胶黏物控制中的应用

    公开(公告)号:CN114591931A

    公开(公告)日:2022-06-07

    申请号:CN202210232539.4

    申请日:2022-03-09

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种乙酰木聚糖酯酶克隆表达及其在造纸胶黏物控制中的应用,属于基因工程及酶工程领域。本发明使用的乙酰木聚糖酯酶ATAXE来源于嗜热球菌(Acetivibrio thermocellus)。ATAXE在制浆造纸领域中对于胶黏物的去除方面具有优越的性能,对模式底物聚丙烯酸酯(PEA)具有良好的降解效果。含有PEA的溶液经ATAXE处理后,其浊度下降趋势明显,4h后其浊度下降约为50.4%;粒径与商品酶组相比减小了39.8%;PEA溶液经ATAXE处理侧链后其乙醇释放量是商品酶组的2.1倍。因此,将乙酰木聚糖酯酶ATAXE应用于造纸、能源、饲料和食品等工业,对于保护环境及减少能源消耗具有较大优势。

    一种利用角质酶突变体促进重组蛋白胞外表达的方法

    公开(公告)号:CN114410605A

    公开(公告)日:2022-04-29

    申请号:CN202210090842.5

    申请日:2020-11-03

    Applicant: 江南大学

    Inventor: 吴敬 宿玲恰 黄燕

    Abstract: 本发明公开了一种利用角质酶突变体促进重组蛋白胞外表达的方法,属于生物工程、酶工程、微生物工程技术领域。本发明采用角质酶突变体和目标蛋白在枯草芽孢杆菌中共表达,目标蛋白包括木糖异构酶、4,6‑α‑葡萄糖基转移酶、4‑α‑糖基转移酶、海藻糖合酶和分支酶等,可实现胞内定位目标蛋白胞外表达,提高生产效率、简化后提取工艺,具有较高的学术意义和应用价值。

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