公开(公告)号：CN116254249A

公开(公告)日：2023-06-13

申请号：CN202310144326.0

申请日：2023-02-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 宿玲恰 ,  吴敬 ,  袁源

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12P19/14 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种表达几丁质酶的重组菌的构建及高酶活突变体的制备，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明使用内源性强启动子SpoVG及信号肽YqxI实现了地衣芽孢杆菌来源的几丁质酶BlChiA在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WS9中的分泌表达，并进一步定点突变，提高了几丁质酶的表达量与耐酸性。所得几丁质酶突变体E336K/A472T的发酵酶活达2.67U/mL，同时，该几丁质酶突变体最适反应pH为5.0，且在pH 3.0‑pH 6.0范围内有较好的稳定性，残余酶活达90％以上，具有稳定性好、酸耐受度强等优势，适用于工业化生产中获得高转化率的寡糖产物。

公开(公告)号：CN116144635A

公开(公告)日：2023-05-23

申请号：CN202310134275.3

申请日：2023-02-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  袁源

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12P19/14 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种比活和耐酸性提高的几丁质酶BlChiA突变体，属于酶工程领域。本发明以枯草芽孢杆菌作为表达宿主，重组表达来源于地衣芽孢杆菌的几丁质酶基因BlChiA并进行定点突变获得一系列的优势突变体，突变体E469G在pH4.0的条件下有最高酶活力，与野生型相比更适应酸性环境，适合生产应用；突变体E336K/E469G/A472T提高了几丁质酶BlChiA的催化效率，比活较野生型提高1.56倍，有利于降低其生产成本；突变体D26N/E336K/E469G/A472T对酸性条件的耐受能力增强，在pH3.0‑10.0均有较广泛的pH耐受范围，有利于工业生产及几丁质的降解。