公开(公告)号：CN109837259A

公开(公告)日：2019-06-04

申请号：CN201910134759.1

申请日：2019-02-24

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李继喜 ,  胡小健 ,  李正阳 ,  吴敌 ,  季朝能

IPC: C12N9/18 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为来源于海洋细菌的嗜热酯酶晶体三维结构及其表达纯化方法。所述嗜热酯酶AlinE4含190个氨基酸，分子量约为20.5 kDa，等电点约为6.8；在表达菌株Escherichia coli BL21中具有高度可溶性表达，并且表现出良好的耐热、耐碱、耐盐、耐重金属性质；酯酶AlinE4通过X射线衍射的方法获得其三维结构，分辨率达到1.18Å。该结构由5个β折叠、9个α螺和2个310-螺旋组成；其中，第13位丝氨酸、第162位天冬氨酸与第165位组氨酸构成酶学活性中心；第13位丝氨酸、50位甘氨酸及81位天冬酰胺组成氧离子通道。该酯酶AlinE4的三维结构可在手性药物前体筛选、工业酶制剂中底物改造及提高酶活力方面具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN105132393B

公开(公告)日：2018-08-24

申请号：CN201510576928.9

申请日：2015-09-12

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李继喜 ,  黄静

IPC: C12N9/18 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明本发明属于生物技术领域，具体为一种深海耐盐、耐碱蛋白酯酶的表达和纯化、晶体结构及其应用。本发明所述酯酶PE8含219个氨基酸，分子量为23.19kDa，来源于海洋细菌Pelagibacterium halotolerans B2T；酯酶PE8的晶结构由9个β折叠和8个α螺旋组成，其中，9个β折叠位于中心，8个α螺旋围绕在β折叠的周围；第118位丝氨酸、第169位天冬氨酸与第201位组氨酸构成催化三连体组成活性中心。酯酶PE8在表达菌株中高度可溶性表达，并且表现出良好的耐盐、耐碱及手性选择性，能催化3‑(4‑氟苯基)戊二酸二甲酯生产药物中间体(R)‑3‑(4‑氟苯基)戊二酸单甲酯。该酯酶PE8的晶体结构在工业上应用于生产抗抑郁药物中间体、酶学底物改造及提高酶活方面具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN107312080A

公开(公告)日：2017-11-03

申请号：CN201710603544.0

申请日：2017-07-23

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李继喜 ,  匡思运 ,  郑军

IPC: C07K14/47 ,  A61K38/17 ,  A61P31/04

CPC classification number: Y02A50/473 ,  C07K14/4723 ,  A61K38/00

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种来源于GSDMD蛋白的抗菌肽及其应用。本发明提供的抗菌肽，其为人源GSDMD蛋白序列M-N位的多肽,或该多肽序列中除FHFYDAMDGQI序列外的其他氨基酸进行各种取代、添加和/或缺失氨基酸后具有至少90%以上同源性的衍生多肽；其中，M选自60-80间的整数，N选自为90-110间的整数。本发明公开的抗菌肽具有高效的抗菌作用，对各类细菌，包括但不限于革兰氏阴性菌（大肠杆菌、耻垢分枝杆菌）、革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌）具有很强的抗菌活性，且其分子量小，合成简单，具有较好的应用价值。

公开(公告)号：CN106676082A

公开(公告)日：2017-05-17

申请号：CN201611212469.7

申请日：2016-12-25

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李继喜 ,  李正阳 ,  赵玉

IPC: C12N9/18 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种来源于海洋细菌E4A9T的嗜低温蛋白酯酶E10及其表达纯化、晶体结构和应用。所述酯酶E10含205个氨基酸，分子量约为22.36kDa；在表达菌株BL21(DE3)中具有高度可溶性表达，嗜低温，并具有良好的耐盐、耐重金属性质。所述酯酶E10通过X射线衍射方法获得了其三维结构，分辨率达到1.9 Å。该结构由5个β折叠、9个α螺和3个310‑螺旋组成，其中，第29位丝氨酸、第178位天冬氨酸与第181位组氨酸所构成的催化三连体组成酶学活性中心；第29位丝氨酸、66位甘氨酸及97位天冬酰胺共同组成氧离子通道。该酯酶E10的三维结构可在手性药物前体筛选、工业酶制剂中底物改造及提高酶活力方面具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN105132393A

公开(公告)日：2015-12-09

申请号：CN201510576928.9

申请日：2015-09-12

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李继喜 ,  黄静

IPC: C12N9/18 ,  C12N15/70

CPC classification number: C12N9/18 ,  C12Y301/01001

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种深海耐盐、耐碱蛋白酯酶的表达和纯化、晶体结构及其应用。本发明所述酯酶PE8含219个氨基酸，分子量为23.19kDa，来源于海洋细菌Pelagibacterium halotolerans B2T；酯酶PE8的晶结构由9个β折叠和8个α螺旋组成，其中，9个β折叠位于中心，8个α螺旋围绕在β折叠的周围；第118位丝氨酸、第169位天冬氨酸与第201位组氨酸构成催化三连体组成活性中心。酯酶PE8在表达菌株中高度可溶性表达，并且表现出良好的耐盐、耐碱及手性选择性，能催化3-(4-氟苯基)戊二酸二甲酯生产药物中间体(R)-3-(4-氟苯基)戊二酸单甲酯。该酯酶PE8的晶体结构在工业上应用于生产抗抑郁药物中间体、酶学底物改造及提高酶活方面具有广泛的应用前景。