一种单增李斯特菌的纳米抗体及其应用

    公开(公告)号:CN119119259B

    公开(公告)日:2025-03-07

    申请号:CN202411630679.2

    申请日:2024-11-15

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明公开了一种单增李斯特菌的纳米抗体及其应用,涉及生物技术领域。该纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明用原核表达的单增李斯特菌的p60蛋白作为免疫原免疫羊驼,提取外周血淋巴细胞总RNA,经反转录和两轮巢式PCR扩增VHH片段,将VHH片段与pComb3Xss载体经过酶切消化,连接后转化至TG1感受态细胞,利用噬菌体展示技术经过三轮淘选,成功筛选出一条抗单增李斯特菌p60蛋白的纳米抗体LMNb2E10。该纳米抗体可以特异性识别单增李斯特菌,利用其建立的双抗夹心ELISA法,特异性强,灵敏度高,检测限低,并且能够大大缩短检测时间。

    一种单增李斯特菌的纳米抗体及其应用

    公开(公告)号:CN119119259A

    公开(公告)日:2024-12-13

    申请号:CN202411630679.2

    申请日:2024-11-15

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明公开了一种单增李斯特菌的纳米抗体及其应用,涉及生物技术领域。该纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明用原核表达的单增李斯特菌的p60蛋白作为免疫原免疫羊驼,提取外周血淋巴细胞总RNA,经反转录和两轮巢式PCR扩增VHH片段,将VHH片段与pComb3Xss载体经过酶切消化,连接后转化至TG1感受态细胞,利用噬菌体展示技术经过三轮淘选,成功筛选出一条抗单增李斯特菌p60蛋白的纳米抗体LMNb2E10。该纳米抗体可以特异性识别单增李斯特菌,利用其建立的双抗夹心ELISA法,特异性强,灵敏度高,检测限低,并且能够大大缩短检测时间。

    一种基于SHERLOCK检测单增李斯特菌的现场可视化试剂盒及应用

    公开(公告)号:CN114075607A

    公开(公告)日:2022-02-22

    申请号:CN202010846569.5

    申请日:2020-08-21

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明公开了一种基于SHERLOCK检测单增李斯特菌的现场可视化试剂盒及应用,所述试剂盒包含用于扩增单增李斯特菌侵袭性相关分泌型内肽酶(invasion associated secreted endopeptidase,iap)基因片段的T7‑RPA引物对,所述的引物对由上游引物和下游引物组成,其中,上游引物、下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示;Cas13a蛋白和crRNA或二者形成的复合体;以及RNA荧光报告分子。此外,本发明还公开了一种使用所述的现场可视化试剂盒检测单增李斯特菌的方法。利用本发明的试剂盒及检测方法进行单增李斯特菌的检测,可以实现37~42℃条件下恒温检测,结果实现可视化。本发明的方法具有操作简单、检测快速、结果可视化等优点。从而为提高食品行业检测单增李斯特菌水平,降低消费者感染风险提供技术手段。

    一种腹泻性贝毒大田软海绵酸荧光检测试纸及其检测方法

    公开(公告)号:CN110018145B

    公开(公告)日:2022-01-25

    申请号:CN201910330343.7

    申请日:2019-04-23

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明属于食品安全免疫学检测技术领域,具体涉及一种腹泻性贝毒大田软海绵酸荧光检测试纸及其检测方法。所述试纸包括底板,所述底板上从左到右依次固接有加样垫、硝酸纤维素膜和吸水垫,所述硝酸纤维素膜上从左到右依次设置有检测带和参照带;所述检测带由大田软海绵酸‑蛋白质偶联复合物喷射在所述硝酸纤维素膜上干燥后形成;所述参照带由抗小鼠二抗喷射在所述硝酸纤维素膜上,干燥后形成。本发明提供的试纸及检测方法能快速、灵敏地检测出海产样品中的大田软海绵酸的含量水平,适用于大量样本毒素的安全筛查,从而为海产品食用安全提供快速检测试剂。

    鉴定致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的特异性引物对、检测试剂盒及其应用

    公开(公告)号:CN113755612A

    公开(公告)日:2021-12-07

    申请号:CN202110397506.0

    申请日:2021-04-14

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明公开了鉴定致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的特异性引物对、检测试剂盒及其应用。所述特异性引物对为Fe和Re,Fe的序列如SEQ ID NO.1所示,Re的序列如SEQ ID NO.2所示。所述检测试剂盒包括特异性引物对、RPA核酸扩增试剂、量子点荧光微球与地高辛抗体的偶联物QDNBs‑McAb、核酸检测试纸条、上样缓冲液。特异性引物对的5’端分别修饰有地高辛和生物素,经过RPA核酸扩增后,阳性产物带有地高辛和生物素标记。本发明成功设计筛选了适用于RPA的特异性引物对,建立了能够鉴定致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的快速检测方法,其最低检测限为9.6×103CFU/mL。所建立的方法无需使用大型仪器,适合于现场检测,并且该方法从基因组提取到肉眼观察结果的过程仅需要10min左右。

    一种基于适配子检测N-羟乙酰神经氨酸含量的方法

    公开(公告)号:CN108709989A

    公开(公告)日:2018-10-26

    申请号:CN201810531160.7

    申请日:2018-05-29

    Applicant: 吉林大学

    CPC classification number: G01N33/5308 G01N2333/435

    Abstract: 本发明属于分子生物检测技术领域,特别涉及一种基于适配子检测N‑羟乙酰神经氨酸含量的方法,采用N‑羟乙酰神经氨酸‑载体蛋白的偶联物为检测抗原,生物素化修饰的适配子为检测探针,利用包被抗原与检测样品中游离的N‑羟乙酰神经氨酸竞争结合特异性检测探针作为反应模式,经HRP标记的链酶亲和素催化底物显色,测得吸光度值,实现检测样品中N‑羟乙酰神经氨酸的定量测定。本发明检测方法成本低廉,可快速、简便、灵敏地测定尿液、血清及动物源性食品牛奶中的N‑羟乙酰神经氨酸的含量,对肿瘤的诊断、预防、风险评估以及动物源性食品污染领域提供研究素材。

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