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公开(公告)号：CN109486785A
公开(公告)日：2019-03-19
申请号：CN201811450486.3
申请日：2018-11-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的ω-转氨酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过对ω-转氨酶晶体结构中B因子较高的氨基酸进行定点突变，即将ω-转氨酶32位置处的Y突变成L，得到了一种催化效率得到提高的ω-转氨酶突变体。本发明突变体Y32L催化效率Kcat/Km提高了21.84倍，催化(R)-phenethylamine生成acetophenone时，突变体的acetophenone最大转化率比天然酶提高了7.72倍。本发明得到的突变体比天然ω-转氨酶更适用于在工业上的应用。
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公开(公告)号：CN109486784A
公开(公告)日：2019-03-19
申请号：CN201811449438.2
申请日：2018-11-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种能催化西他沙星五元环关键中间体的ω-转氨酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过对ω-转氨酶晶体结构中B因子较高的氨基酸进行定点突变，即将ω-转氨酶32位置处的Y突变成L，190位置处的S突变成A，212位置处的L突变成M，215位置处的I突变成M，得到了一种可以催化西他沙星五元环关键中间体的ω-转氨酶突变体。本发明突变体Y32L/S190A/L212M/I215M催化效率Kcat/Km为0.64min-1·mM-1，催化(S)-5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-amine生成5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-one时，突变体的5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-one最大转化率为79.02％。本发明得到的突变体适用于在工业上手性合成西他沙星五元环关键中间体的应用。
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公开(公告)号：CN105602912B
公开(公告)日：2019-03-19
申请号：CN201510718557.3
申请日：2015-10-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种底物特异性提高的短小芽胞杆菌CotA漆酶突变体及其制备方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明以本实验室前期构建的pColdII‑CotA重组质粒为模板，将野生型CotA漆酶氨基酸序列的第417位Gly突变为Leu，随后以野生型CotA漆酶为对照，发现突变体G417L对底物2,2‑联氮‑二(3‑乙基‑苯并噻唑‑6‑磺酸)二铵盐(ABTS)具有更高的专一性，提升了短小芽胞杆菌CotA漆酶的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN109402188A
公开(公告)日：2019-03-01
申请号：CN201811219769.7
申请日：2018-10-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种来自短小芽孢杆菌的ω-转氨酶及在生物胺化中的应用，属于生物工程技术领域。本发明首次从Bacillus pumilus W3中分离、鉴定了ω-转氨酶基因，并选用大肠杆菌重组表达系统生产密码子优化后的ω-转氨酶能大幅提高其产量，使更易达到工业化应用要求。本发明发现该ω-转氨酶以(R)-α-phenethylamine为底物时，最适作用pH为7.0，最适作用温度为45℃；同时，该R-ω-转氨酶pH稳定性及温度稳定性都非常好，对实验组(以(R)-α-phenethylamine为底物)的催化活性优于对照组(以(S)-α-phenethylamine为底物)，表明该重组ω-转氨酶具有很好选择性合成R-手性胺的功能，具有较大应用潜力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109370998A
公开(公告)日：2019-02-22
申请号：CN201811449478.7
申请日：2018-11-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的ω-转氨酶突变体I215F，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过对ω-转氨酶晶体结构中B因子较高的氨基酸进行定点突变，即将ω-转氨酶215位置处的I突变成F，得到了一种催化效率得到提高的ω-转氨酶突变体。本发明突变体I215F催化效率Kcat/Km提高了1.92倍，催化(R)-phenethylamine生成acetophenone时，突变体的acetophenone最大转化率比天然酶提高了3.79倍。本发明得到的突变体比天然ω-转氨酶更适用于在工业上的应用。
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公开(公告)号：CN108949657A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201810352742.9
申请日：2018-04-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种工程菌及其在丹参素和α‑酮戊二酸联产中的应用，属于生物工程技术领域。本发明构建了一种新型的三酶共表达基因工程菌，该菌可应用于光学纯的3‑(3,4‑二羟基苯基)‑2‑羟基丙酸的生产。本发明选择的(D/L)‑α‑羟基羧酸脱氢酶均具有底物专一性差，光学专一性强的特点，可生产光学纯的D‑丹参素和L‑丹参素，同时联产α‑酮戊二酸。进一步地，通过敲除或强化表达大肠杆菌基因组上的相将关基因促进底物的转运及减少产物的分解，提高了重组菌的生产效率。利用本发明的重组菌转化生产丹参素和α‑酮戊二酸的方法简单且原料易得，杂质少,具有良好的工业化应用前景。
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公开(公告)号：CN108949652A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201810352691.X
申请日：2018-04-19
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/88 , C12N9/0006 , C12N9/0036 , C12P7/42 , C12Y101/01027 , C12Y106/99003 , C12Y401/99002 , C12Y403/01023
Abstract: 本发明公开了一种工程菌及其生产咖啡酸的应用，属于生物工程技术领域。本发明提供能低成本生产咖啡酸的重组菌；所述重组菌同时表达4种酶，分别为酪氨酸酚裂解酶、酪氨酸氨裂解酶、L‑乳酸脱氢酶、NADH氧化酶；进一步地，本发明的重组菌还敲除了酚类物质分解基因，强化表达了乳酸转运基因、邻苯二酚转运基因、辅酶合成相关基因中的任意一种或多种。本发明实现了咖啡酸的高效生产，且方法过程简单、杂质少，具有重要的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN108949651A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201810352685.4
申请日：2018-04-19
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/88 , C12N9/0006 , C12N9/0022 , C12P7/42 , C12Y101/01 , C12Y101/01027 , C12Y104/03002 , C12Y401/99002
Abstract: 本发明公开了一种工程菌及其以廉价底物生产对羟基苯乳酸的应用，属于生物工程技术领域。本发明构建的工程菌同时表达4种酶，分别为酪氨酸酚裂解酶、L‑氨基酸氧化酶、α‑羟基羧酸脱氢酶和L‑乳酸脱氢酶。进一步地，通过敲除或强化表达大肠杆菌基因组上的相将关基因促进底物的转运及减少产物的分解。该方法过程简单、杂质少，具有重要的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN108949650A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201810352680.1
申请日：2018-04-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种丹参素的生产方法及工程菌，属于生物工程技术领域。本发明构建了一种新型的三酶共表达基因工程菌，该菌可应用于光学纯丹参素的生产，并通过进一步敲除或强化表达大肠杆菌基因组上的相将关基因减少产物的分解和提高胞内辅酶的含量，从而提高了目标物的产量。本发明选择的(D/L)‑α‑羟基羧酸脱氢酶均具有底物专一性差，光学专一性强的特点，可生产光学纯的D‑丹参素和L‑丹参素，同时联产丙酮酸。本发明方法简单且原料易得、杂质少，具有重要的工业应用价值。
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