大丽轮枝菌稳定表达的内参基因及其引物和应用

    公开(公告)号:CN116479166A

    公开(公告)日:2023-07-25

    申请号:CN202310651295.8

    申请日:2023-06-02

    Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域,具体涉及大丽轮枝菌稳定表达的内参基因及其引物和应用。本发明以大丽轮枝菌H3基因、Tubulin基因、EF1a基因和GAPDH基因为候选基因,采用实时荧光定量PCR进行扩增,利用geNorm和NormFinder算法程序进行稳定性分析,并通过RefFinder在线分析工具进行综合分析,最后发现在大丽轮枝菌中Tubulin基因表达最为稳定。以Tubulin基因作为大丽轮枝菌荧光定量PCR检测中的内参基因能够达到校准的目的,准确定量检测大丽轮枝菌相关基因表达。

    一种人工设计质粒pM5500及其在DNA marker制备中的应用

    公开(公告)号:CN111705071B

    公开(公告)日:2023-03-10

    申请号:CN202010547528.6

    申请日:2020-06-16

    Abstract: 本发明公开了一种人工设计质粒pM5500及其在DNA marker制备中的应用,所述质粒的长度为5500bp,序列为:SEQ ID NO:1,包含高拷贝复制起始点序列和氨苄青霉素抗性基因编码序列,以及各种人工设计组合的DNA片段。该质粒在有限长度内包含了12个同种限制性内切酶识别位点,通过单酶切可产生1500、1000、750、500、250和100bp六种适用于中等分子量DNA marker制备的DNA片段,且各种片段的质量比为3:2:3:1:1:1。该质粒结构紧凑稳定,拷贝数高,易于大规模制备,以其为基础开发的DNA maker可广泛应用于生物学研究及生物技术领域。

    一种小麦白粉病预报方法及其装置

    公开(公告)号:CN106248146B

    公开(公告)日:2018-10-02

    申请号:CN201610793126.8

    申请日:2016-08-31

    Inventor: 周益林 胡小平

    Abstract: 本发明公开了一种小麦白粉病预报方法及其装置,包括采用公式(一)对小麦白粉病发生程度进行预测:Y=‑25.699+4.219QW‑0.0776YL公式(一);Y为当年初春期小麦白粉病病情指数,QW为当年3月上旬至3月中旬的日平均气温,YL为上一年的12月下旬至当年2月中旬的累计降雨量。装置包括数据收集模块、数据处理模块和数据发射模块,数据收集模块用于收集当年3月上旬至3月中旬的日平均气温的信息和上一年的12月下旬至当年2月中旬的累计降雨量,数据处理模块中利用公式(一)对数据收集模块收集的数据进行处理,然后再由数据发射模块将数据处理模块处理后的数据发送到接收端。

    一种快速高效的小麦条锈菌RNA提取方法

    公开(公告)号:CN103589714B

    公开(公告)日:2018-07-13

    申请号:CN201310548719.4

    申请日:2013-11-08

    Inventor: 胡小平 马丽杰

    Abstract: RNA(Ribonucleic acid)在活体生物细胞内普遍存在,是生物的遗传信息中间载体,参与DNA的转录和蛋白质的合成。随着环境因子发生改变,RNA会在第一时间作出反应,离体RNA或者死亡细胞的RNA极易降解。因此,RNA被作为检测当前有活性微生物状态的第一指标。提取完整的、高质量的小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritici)夏孢子RNA是进一步开展转录组学、条锈菌存活数量监测等研究的基础。建立的小麦条锈菌RNA提取方法涉及的关键技术包括试验材料完全转移、防止氧化等。保障小麦条锈菌完全转移及提高研磨效果的关键预处理溶液是pH为8.0的0.01M Tris‑HCl;涉及的防止氧化的主要成分有1%SDS(W∶V)、1%∶‑巯基乙醇(V∶V)和16%PVP(W∶V)。

    小麦条锈菌17号生理小种的分子检测方法

    公开(公告)号:CN103555824B

    公开(公告)日:2015-05-20

    申请号:CN201310416116.9

    申请日:2013-09-08

    Abstract: 本发明公开了一种小麦条锈菌17号生理小种的分子检测方法。采用RAPD分子标记转化为SCAR分子标记的方法,获得了17号生理小种的特异性引物(上游引物5’-TTCCCCCGCTGTCT,下游引物5’-GTTGAGCGGGGGAA),经过PCR扩增反应(反应条件:94℃,5min,1循环;94℃,30s,60℃,1min,72℃,90s,35循环;72℃7min1循环)、2%琼脂糖凝胶电泳,可获得约1000bp的特异性条带。因此,本发明可用于从分子水平快速鉴别和区分小麦条锈菌17号生理小种,为开展小麦条锈病分子流行学研究奠定了基础。

    一种快速高效的小麦条锈菌RNA提取方法

    公开(公告)号:CN103589714A

    公开(公告)日:2014-02-19

    申请号:CN201310548719.4

    申请日:2013-11-08

    Inventor: 胡小平 马丽杰

    Abstract: RNA(Ribonucleic acid)在活体生物细胞内普遍存在,是生物的遗传信息中间载体,参与DNA的转录和蛋白质的合成。随着环境因子发生改变,RNA会在第一时间作出反应,离体RNA或者死亡细胞的RNA极易降解。因此,RNA被作为检测当前有活性微生物状态的第一指标。提取完整的、高质量的小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritici)夏孢子RNA是进一步开展转录组学、条锈菌存活数量监测等研究的基础。建立的小麦条锈菌RNA提取方法涉及的关键技术包括试验材料完全转移、防止氧化等。保障小麦条锈菌完全转移及提高研磨效果的关键预处理溶液是pH为8.0的0.01M Tris-HCl;涉及的防止氧化的主要成分有1%SDS(W∶V)、1%β-巯基乙醇(V∶V)和16%PVP(W∶V)。

    基于棉花根部表皮细胞检测病原菌效应蛋白定位的方法

    公开(公告)号:CN119492720A

    公开(公告)日:2025-02-21

    申请号:CN202510072181.7

    申请日:2025-01-17

    Abstract: 本发明涉及生物学技术领域,尤其涉及基于棉花根部表皮细胞检测病原菌效应蛋白定位的方法。所述方法包括以下步骤:构建携带病原菌效应蛋白编码基因和核定位信号的重组载体,将重组载体转入农杆菌菌株中,获得重组农杆菌;将重组农杆菌与病原菌共培养,筛选得到侵染菌株;用侵染菌株侵染棉花幼苗根部表皮,然后培养2~3天;将棉花幼苗根部表皮用DAPI溶液染色,制片后在激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光信号,根据绿色荧光信号对效应蛋白进行定位。本发明的方法可快速高效地检测病原菌效应蛋白在棉花根部表皮中的定位,明确效应蛋白为质外体效应蛋白或细胞质效应蛋白,为棉花病原菌效应蛋白功能的研究提供技术支撑。

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