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公开(公告)号：CN113684202B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202110957544.7
申请日：2021-08-17
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种安全无毒的高通量无缝构建质粒的方法，属于遗传工程领域。本发明通过优化组装溶液成分，排除现有方法中存在有毒试剂二硫苏糖醇，以及DNA聚合酶、DNA连接酶、NAD等较昂贵的试剂。由于不需要DNA纯化操作，使得该方法适用于基于96孔PCR板或96孔酶标板等的高通量操作平台。同时，太极组装4个片段构建质粒时，拥有95％以上的阳性率，在高通量构建质粒实验中，可以省略菌落PCR验证步骤，进一步简化高通量质粒构建流程。
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公开(公告)号：CN108441461B
公开(公告)日：2020-11-06
申请号：CN201810239293.7
申请日：2018-03-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用人工双碳源高产N‑乙酰神经氨酸的重组菌，属于遗传工程领域。本发明是通过强启动子P43过表达葡萄糖酸激酶基因gntK和葡萄糖酸透性酶gntP，利用葡萄糖、葡萄糖酸钠人工双碳源发酵，实现N‑乙酰神经氨酸合成途径中磷酸烯醇式丙酮酸的高效供给，以加强合成途径，本发明的重组枯草芽孢杆菌与出发菌株相比，其N‑乙酰神经氨酸产量从1.02g/L提高到1.52g/L，为进一步代谢工程改造枯草芽孢杆菌生产N‑乙酰神经氨酸奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111394292A
公开(公告)日：2020-07-10
申请号：CN202010237125.1
申请日：2020-03-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种多途径复合产神经氨酸枯草芽孢杆菌及其应用，属于遗传工程领域。本发明通过10个不同强度的启动子依次优化三条神经氨酸合成途径中关键酶UDP-N-乙酰氨基葡萄糖-2-差向异构酶、N-乙酰氨基葡萄糖-6-磷酸异构酶，以及氨基葡萄糖-6-磷酸-N-乙酰基转移酶、N-乙酰氨基葡萄糖异构酶和N-乙酰神经氨酸合酶在基因组上的表达水平，降低了酶的表达对细胞造成的蛋白合成压力，并进一步将三条神经氨酸整合到同一株枯草芽孢杆菌工程菌中，获得了N-乙酰神经氨酸产量提高的枯草芽孢杆菌，其在摇瓶水平下的产量达到了10.4g/L，为进一步提高枯草芽孢杆菌NeuAc产量奠定了基础。
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公开(公告)号：CN108424868A
公开(公告)日：2018-08-21
申请号：CN201810239281.4
申请日：2018-03-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用天然双碳源高产N-乙酰神经氨酸的重组菌，属于遗传工程领域。本发明通过强启动子P43过表达磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因PckA，利用葡萄糖、L-苹果酸钠天然双碳源发酵，实现N-乙酰神经氨酸合成途径中磷酸烯醇式丙酮酸的高效供给，以加强合成途径，本发明的重组枯草芽孢杆菌与出发菌株相比，其N-乙酰神经氨酸产量从1.15g/L提高到1.65g/L，为进一步代谢工程改造枯草芽孢杆菌生产N-乙酰神经氨酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN106929462A
公开(公告)日：2017-07-07
申请号：CN201710278055.2
申请日：2017-04-25
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12P19/26 , A23L33/135 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种积累N‑乙酰神经氨酸重组枯草芽孢杆菌及其应用，属于遗传工程领域。本发明是以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168ΔnagP ΔnagP ΔgamP ΔgamA ΔnagA ΔnagB Δ1dh Δpta::lox72)作为表达宿主，通过过量共表达来源于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae S288C)的氨基葡萄糖乙酰化酶编码基因GNA1，来源于念珠藻(Anabaena sp.CH1)的N‑乙酰氨基葡萄糖异构酶(AGE)和来源于大肠杆菌(Escherichia coli K1)的N‑乙酰神经氨酸合酶(NeuB)，得到了积累N‑乙酰神经氨酸枯草芽孢杆菌基因工程菌，N‑乙酰神经氨酸产量达到190mg/L，为进一步代谢工程改造枯草芽孢杆菌生产N‑乙酰神经氨酸奠定了基础。
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公开(公告)号：CN111394292B
公开(公告)日：2022-08-09
申请号：CN202010237125.1
申请日：2020-03-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种多途径复合产神经氨酸枯草芽孢杆菌及其应用，属于遗传工程领域。本发明通过10个不同强度的启动子依次优化三条神经氨酸合成途径中关键酶UDP‑N‑乙酰氨基葡萄糖‑2‑差向异构酶、N‑乙酰氨基葡萄糖‑6‑磷酸异构酶，以及氨基葡萄糖‑6‑磷酸‑N‑乙酰基转移酶、N‑乙酰氨基葡萄糖异构酶和N‑乙酰神经氨酸合酶在基因组上的表达水平，降低了酶的表达对细胞造成的蛋白合成压力，并进一步将三条神经氨酸整合到同一株枯草芽孢杆菌工程菌中，获得了N‑乙酰神经氨酸产量提高的枯草芽孢杆菌，其在摇瓶水平下的产量达到了10.4g/L，为进一步提高枯草芽孢杆菌NeuAc产量奠定了基础。
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公开(公告)号：CN110066801A
公开(公告)日：2019-07-30
申请号：CN201910358649.3
申请日：2019-04-30
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N1/21 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌中唾液酸诱导表达元件及构建方法，属于遗传工程领域。本发明以pHT质粒为载体，在枯草芽孢杆菌中，PydjO启动子表达转录调控蛋白NanR，进一步在强启动子Pveg中整合NanR识别结合序列，并关联绿色荧光蛋白GFP，在发酵培养基中添加唾液酸进行发酵验证，成功构建枯草芽孢杆菌中唾液酸诱导表达元件，使其诱导表达强度达到4000a.u.，在不添加唾液酸的情况下，泄漏量为10％，为进一步优化枯草芽孢杆菌中唾液酸诱导表达元件奠定了基础。
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