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公开(公告)号：CN116426489A
公开(公告)日：2023-07-14
申请号：CN202310320468.8
申请日：2023-03-27
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/861 , C12N15/40 , C12N15/65 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达新型鹅星状病毒ORF2蛋白C端的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，所述新型鹅星状病毒GD毒株ORF2蛋白C端，其序列如SEQ ID NO.1所示。重组血清4型禽腺病毒，其中使用新型鹅星状病毒GD毒株ORF2蛋白C端替换FAdV‑4的Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2基因序列如SEQ ID NO.2所示。通过本发明，利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入新型鹅星状病毒ORF2蛋白C端，成功获得表达新型鹅星状病毒ORF2蛋白C端的重组血清4型禽腺病毒，为同时免疫防控血清4型禽腺病毒和新型鹅星状病毒提供了技术支撑与二联弱毒疫苗候选。
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公开(公告)号：CN115840044A
公开(公告)日：2023-03-24
申请号：CN202211251264.5
申请日：2022-10-13
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/68 , G01N33/58 , G01N33/543
Abstract: 本发明涉一种检测新型鹅星状病毒ORF2蛋白抗体的特异性多肽‑ELISA试剂盒及其方法，所述试剂盒包含包被GAstV独有特异性多肽的酶标板、阳性阴性对照、HRP标记的兔抗鸡二抗、样品稀释液、洗涤液、显色液以及终止液；所述包被的GAstV独有特异性多肽是根据GAstV线性B细胞抗原表位序列设计合成，具体的序列如下：CQTLTDPEEDDDPLSDVTSLFD。通过本发明，可以实现快速特异检测GAstV抗体。此试剂盒能用于大规模血清学检测和流行病学调查，在GAstV感染以及免疫检测中具有良好的应用和推广价值。
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公开(公告)号：CN115786282A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202211600743.3
申请日：2022-12-12
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/34 , C12N15/861 , C12N15/65 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种表达鸭3型腺病毒Fiber‑2蛋白的重组血清4型禽腺病毒的构建，构建方法包括以下步骤：设计针对血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的sgRNA；通过PCR和同源重组的方法构建携带鸭3型腺病毒Fiber‑2基因和RFP表达盒的供体质粒，其中的RFP表达盒两端分别带有LoxP位点；将生长良好的LMH细胞经胰酶消化后接种六孔板培养，第二天转染sgRNA和供体质粒各3μg，转染6h后换成细胞生长液；转染48h后感染血清4型禽腺病毒，感染2h后换成细胞维持液；感染血清4型禽腺病毒后观察RFP红色荧光，进行红色荧光重组病毒的纯化，获得带有RFP表达盒的表达鸭3型腺病毒Fiber‑2蛋白的重组血清4型禽腺病毒。通过本发明，为构建鸭3型腺病毒和血清4型禽腺病毒的二价疫苗提供了技术支撑。
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公开(公告)号：CN113354717A
公开(公告)日：2021-09-07
申请号：CN202110631147.0
申请日：2021-06-07
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/165 , C07K19/00 , C12N15/50 , C12N15/70 , C07K16/10 , G01N33/569 , A61K39/42 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供了一种新冠病毒SARS‑CoV‑2广谱多肽抗原及其特异性中和抗体和应用，属于病毒免疫检测技术领域。一种新冠病毒SARS‑CoV‑2广谱多肽抗原，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，与SARS‑CoV‑2人阳性血清的反应，能够特异性与新冠病毒抗体结合。基于本发明的多肽序列，利用PCR、原核表达及蛋白纯化技术，制备了三重SARS‑CoV‑2广谱多肽串联融合蛋白，模拟SARS‑CoV‑2S蛋白自然状态下三聚体模式，以该融合蛋白作为抗原免疫小鼠，可以产生抗SARS‑CoV‑2特异性中和抗体，所述中和抗体在SARS‑CoV‑2抗感染治疗、疫苗研发和检测试剂盒研制中将具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN112877303A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110332462.3
申请日：2021-03-29
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/861 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N15/62 , C12N15/90 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种EGFP与Fiber‑2融合表达的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，本发明的原理和最核心的关键技术是选择合适插入位点以及sgRNA。插入RFP后进行病毒的纯化，获得可以稳定扩增的重组禽腺病毒。利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入外源基因RFP，成功获得了表达RFP的重组FAdV‑4病毒，由此可见，RFP的插入位置可以作为插入其他病原的保护性抗原插入位点，为构建FAdV‑4重组多价苗提供了夯实的理论基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112710832A
公开(公告)日：2021-04-27
申请号：CN202011533179.9
申请日：2020-12-22
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/558 , G01N33/543
Abstract: 本发明提供了一种基于Fiber2蛋白的检测血清4型禽腺病毒的试纸条，涉及禽类疾病诊断技术领域，包括底板和依次搭建于底板上的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸收垫，所述金标垫上喷绘有金标抗体，所述硝酸纤维素膜上喷绘有检测线和质控线；所述金标抗体为杂交瘤细胞株5A3制备小鼠腹水后经Protein G柱进行IgG纯化后得到的金标的特异性识别血清4型禽腺病毒Fiber2蛋白的单克隆抗体5A3；所述检测线上喷绘有检测抗体，所述检测抗体为杂交瘤细胞株1D7制备小鼠腹水后经Protein G柱进行IgG纯化后得到的特异性识别血清4型禽腺病毒Fiber2蛋白的单克隆抗体1D7。采用本发明提供的试纸条能够准确地检测禽类是否感染FAdV‑4，准确率达到100％。
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公开(公告)号：CN112522447A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011574377.X
申请日：2020-12-28
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种鸡传染性贫血病病毒绝对荧光定量PCR检测方法，科学地设计特异扩增鸡传染性贫血病病毒病毒VP1基因片段的引物，然后通过使用TaKaRa公司的TB Green™Premix Ex Taq™II试剂来进行绝对荧光定量PCR方法的建立。根据鸡传染性贫血病病毒VP1基因的高度保守区，科学设计并合成了扩增片段大小为140bp的上下游引物，引物序列如下：上游引物为VP1‑F：5′‑GCCCCGGTACGTATAGTGTG‑3′；下游引物为VP1‑R：5′‑CCCGTACATGTGGTCTGCAT‑3′；本发明可用于企业对鸡传染性贫血病病毒疫苗污染残留及临床样品中低含量鸡传染性贫血病病毒的快速且特异的检测；可通过定量检测鸡传染性贫血病病毒含量情况，从而了解鸡传染性贫血病病毒在体内的变化规律等，为进一步探究鸡传染性贫血病病毒的分子生物学特征及制定有效防控策略提供了有效手段。
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公开(公告)号：CN111304172A
公开(公告)日：2020-06-19
申请号：CN202010098971.X
申请日：2020-02-18
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及到基于CRISPR-Cas9编辑技术的敲除鸡EphA2基因的细胞系的构建方法，本发明的原理和最核心的关键技术是科学合理的构建了靶向鸡EphA2基因的sgRNA，之后转染带有sgRNA和Cas9基因的lentiCRISPR v2质粒，利用CRISPR-Cas9系统达到基因沉默，通过药物筛选杀死阴性细胞，随后通过亚克隆的方法获得单克隆细胞株，从而获得鸡源EphA2敲除的细胞系。通过本发明，构建一种基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡EphA2基因的方法，及其靶向鸡EphA2基因的sgRNA，以期获得鸡源EphA2基因敲除的细胞模型，用于相关疾病的研究。本发明基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡EphA2基因的细胞系构建在相关领域未见报道，本发明将填补国内外相关技术的空白，具有较大的应用研究价值。
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公开(公告)号：CN110951761A
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201911343703.3
申请日：2019-12-24
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种检测鸡OASL启动子活性方法，设计扩增出OASL启动子片段的引物，利用限制性内切酶对OASL启动子部分基因片段和pGL3-basic载体进行双酶切，用T4连接酶连接，转化大肠杆菌，经PCR和测序验证后，获得pGL3-basic-OASL报告基因质粒，并用双荧光素酶报告基因试剂盒验证其功能。此发明可检测鸡OASL启动子活性，其具有快速简便、准确灵敏、便于高通量检测等显著优势，对监控禽源病毒对OASL启动子活性影响，以及OASL在不同类型禽源病毒致病过程所起作用具有重要应用价值，填补国内外空白。
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公开(公告)号：CN109096376A
公开(公告)日：2018-12-28
申请号：CN201811100656.5
申请日：2018-09-20
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一类流感病毒HA多肽及其应用。流感病毒HA多肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1、3、5、7、9。流感病毒HA蛋白KLH偶联多肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2、4、6、8、10。多克隆抗体的制备方法，以SEQ ID NO.2、4、6、8、10中的任意一个作为免疫原，通过免疫小鼠获得抗HA蛋白helix A的C端具有交叉反应的多克隆抗体。本发明可直接提供流感病毒HA蛋白KLH偶联多肽作为免疫原获得抗HA蛋白helix A的C端具有交叉反应的多克隆抗体。本发明将为进一步探究基于C端helix-A多肽能否作为有效抗原表位，刺激机体产生中和抗体，评价其广谱流感多肽疫苗打下基础，提供了材料。
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