公开(公告)号：CN101063089B

公开(公告)日：2012-09-05

申请号：CN200710040392.4

申请日：2007-04-30

Applicant: 复旦大学

Inventor： 吕红 ,  李育阳 ,  袁汉英

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/56 ,  C12N9/24

Abstract: 本发明属于遗传工程和发酵工程领域。本发明将菊粉外切酶基因克隆到真核表达载体pUKDS上，并转化鹰嘴豆克鲁维酵母Y179U，形成表达菊粉外切酶的克鲁维酵母基因工程菌株。发酵时，取上述基因工程菌株在常温常压下发酵2-8天，然后去除菌体，即得；发酵液初始菌浓度为OD600＝0.2-1.6；发酵液pH值为5.5-8.0；发酵液中含有0.5-2％的酵母粉和浓度不低于2％的碳源。用本发明的方法生产的菊粉外切酶，活性可达2500u/ml以上，发酵产量高，发酵周期短，发酵成本低，适用于推广至大规模工业化生产。

公开(公告)号：CN101781670A

公开(公告)日：2010-07-21

申请号：CN200910045395.6

申请日：2009-01-15

Applicant: 复旦大学

Inventor： 吕红 ,  乐科易 ,  潘贤 ,  袁汉英

IPC: C12P21/02 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明属于遗传工程和发酵工程领域，是利用含有外源蛋白编码序列的鹰嘴豆孢克鲁维酵母基因工程菌高效制备外源蛋白的发酵工艺。发酵时，取上述基因工程菌株发酵2-6天，然后去除菌体，即得；发酵液初始菌浓度OD值为0.4-0.6，在发酵过程中维持葡萄糖浓度为0.5-1％；在发酵过程的12h-18h连续补加12％酵母粉，补加酵母粉的总量为发酵体积的3-5％(质量体积比)；发酵过程中调节发酵液pH值为5.0-5.5。用本发明方法可以大规模制备外源蛋白，蛋白活性高，发酵产量高，发酵周期短，发酵成本低，适用于推广至大规模工业化生产。

公开(公告)号：CN101157935A

公开(公告)日：2008-04-09

申请号：CN200710046171.8

申请日：2007-09-20

Applicant: 复旦大学

Inventor： 李育阳 ,  袁汉英 ,  蔡显鹏 ,  张晋 ,  文铁桥

IPC: C12N15/81 ,  C12N15/66 ,  C12N1/19

Abstract: 本发明属生物基因工程技术领域，具体为一种表达酶的酵母基因工程系统。具体内容包括：构建由鹰嘴豆克鲁维酵母转录启动子、终止子及带信号肽的菊粉酶基因组成的表达盒，并将其插入载体pUKD－S，建成了高稳定的菊粉酶基因表达质粒；将该表达质粒导入鹰嘴豆克鲁维酵母宿主Y179ura3－，建成能高效分泌表达菊粉酶的基因工程菌；用将建成的鹰嘴豆克鲁维酵母基因工程菌生产菊粉酶。本发明也可以用来表达和生产其他内源的和外源的、天然的和改构的酶。