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公开(公告)号：CN104630229B
公开(公告)日：2018-10-30
申请号：CN201510074949.0
申请日：2015-02-11
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种具有启动子功能的DNA片段与应用，所述DNA片段为如下任一序列：(a)如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO:1相同的作为启动子功能的核苷酸序列或者其互补序列；(c)对SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列添加一个或多个核糖体结合位点的序列。该DNA具有启动子功能，具有很强的表达活性，在不需要添加诱导物的条件下即能实现外源基因的高表达，将其运用于耐热β‑半乳糖苷酶和转谷氨酰胺酶的表达。特别为解淀粉芽孢杆菌外源基因的表达提供了有效的工具。
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公开(公告)号：CN107936096A
公开(公告)日：2018-04-20
申请号：CN201710990073.3
申请日：2017-10-23
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种能有效提高蛋白分泌效率的信号肽及其应用。该信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码该信号肽的核苷酸序列选自如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列相同的作为信号肽功能的核苷酸序列或者其互补序列。本发明通过从枯草芽孢杆菌同源蛋白信号肽库中，构建该信号肽与β-半乳糖苷酶编码基因/转谷氨酰胺酶酶原编码基因相结合的表达载体，筛选出能提高β-半乳糖苷酶分泌的信号肽，实现转谷氨酰胺酶酶原的分泌表达。
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公开(公告)号：CN107857801A
公开(公告)日：2018-03-30
申请号：CN201710990135.0
申请日：2017-10-23
Applicant: 华南理工大学
CPC classification number: C07K14/32 , C12N9/1044 , C12N9/2471 , C12N15/75 , C12Y203/02013 , C12Y302/01023
Abstract: 本发明公开了一种可用于提高分泌效率的信号肽及其应用。该信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码该信号肽的核苷酸序列选自如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列相同的作为信号肽功能的核苷酸序列或者其互补序列。本发明提供了一种具有很强的分泌表达活性的信号肽，能实现外源基因的高表达，为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的元件。
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公开(公告)号：CN1844384A
公开(公告)日：2006-10-11
申请号：CN200610035370.4
申请日：2006-05-08
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明涉及微生物菌种改良领域，具体涉及一种利用片段化基因改组筛选性状优良菌株的方法。本发明通过诱变育种获得目的性状提高的多株菌株，构成转化育种的候选亲株文库；在该文库中选出具有优良目的性状的菌株作为母本，也就是受体菌；再选出若干株优良性状的菌株作为多父本，即多供体菌；提取所选的多供体菌的总DNA，用DNase I酶切；然后将混合DNA片断转化受体菌，再生，筛选性状优良的再生菌株。利用本发明筛选方法所得的菌株的重组效率高，重组体筛选程序简单，所得菌株多样性高。
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公开(公告)号：CN119614536A
公开(公告)日：2025-03-14
申请号：CN202411542179.3
申请日：2024-10-31
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开一种南极假丝酵母脂肪酶B突变体及其制备方法，属于生物技术领域。本发明共获得了11个酶活力提高的突变体，包括6个单位点突变体及5个组合突变体；相较于野生型，突变体Q11L，F71N，F118Y，V149T，L219N，T244D，S31T/F71N，F71N/F118Y，F71N/L219N，S31T/F71N/F118Y和F71N/F118Y/L219N的酶活力均有所提高，分别提升了18.45％～240.88％；本发明获得了高酶活性的CALB突变体，具有较大的工业应用潜力和经济价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN119506108A
公开(公告)日：2025-02-25
申请号：CN202311073066.9
申请日：2023-08-24
Applicant: 华南理工大学
IPC: C12N1/15 , C12N15/53 , C12N15/80 , C12N15/90 , C12N15/113 , C12N15/55 , C12N9/02 , C12N9/26 , C12R1/685
Abstract: 本发明公开一种谷胱甘肽还原酶基因在提高黑曲霉蛋白分泌中的应用，涉及基因工程技术领域。本发明通过过表达谷氧还蛋白系统基因(如谷胱甘肽还原酶基因)或者为谷氧还蛋白系统提供能量的相关基因，使黑曲霉胞内的ROS降低，并且可以通过SDS‑PAGE可以观察到分泌的总蛋白量增加。获得的重组菌株可以高产淀粉酶，比如葡萄糖淀粉酶，通过摇瓶发酵最高可以使葡萄糖淀粉酶的酶活为wt的3.43倍，表达葡萄糖淀粉酶的酶活增强，表达量显著提高，同时酸性淀粉酶和中性淀粉酶等其他蛋白表达量均有所提高，使重组菌株可以直接应用于工业发酵领域，为黑曲霉在工业酶制剂领域的广泛应用提供了研究思路。
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公开(公告)号：CN115820746B
公开(公告)日：2023-08-18
申请号：CN202211388724.9
申请日：2022-11-08
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了激酶基因在调控丝状真菌菌丝形态中的应用。本发明首次在丝状真菌中构建RNP基因编辑体系，构建的RNP体系可以编辑黑曲霉的基因，该方法免去构建重组载体的繁琐程序，操作简单，可以用于黑曲霉的基因编辑。结合RNP体系进行基因编辑发现，敲除MpkA基因时，黑曲霉菌落较小，生长缓慢，菌丝呈现短杆状，基本无分支。同时，黑曲霉MpkA基因被敲除时，可以促进其蛋白的分泌量。本发明在丝状真菌的遗传操作以及高通量技术的应用提供了良好的材料以及理论依据，为丝状真菌在工业酶制剂领域的发展提供了研究思路。
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公开(公告)号：CN115976082A
公开(公告)日：2023-04-18
申请号：CN202210816750.0
申请日：2022-07-12
Applicant: 华南理工大学
IPC: C12N15/66 , C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/70 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N9/10 , C12N15/54 , C12R1/125
Abstract: 本发明提供了一种无抗性标记基因枯草表达重组质粒及其构建方法与应用。本发明利用枯草芽孢杆菌SCK6超级感受态直接构建不含大肠杆菌复制起始位点Ori及氨苄抗性基因的Bsggt重组表达质粒，能够获得更小的游离质粒表达系统，为异源蛋白在生产应用过程中提供了更小质粒的稳定表达工具。本发明使用Cas9n‑AID碱基编辑技术进行无抗性标记表达质粒的构建对于菌株的筛选过程简单，所构建的无抗性标记表达质粒相对于传统的穿梭质粒更小，且表达过程中不需要添加诱导剂进行蛋白的诱导表达，由于表达质粒无抗性标记，在培养过程中由于没有抗生素的压力生长速度能明显提高，高表达的同时无抗生素的引入更适用于食品安全级别的生产应用。
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公开(公告)号：CN112730388B
公开(公告)日：2022-05-24
申请号：CN202011533189.2
申请日：2020-12-22
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开一种基于明亮发光杆菌快速检测玉米赤霉烯酮生物毒性的方法，涉及玉米赤霉烯酮生物毒性检测领域。该方法使用明亮发光杆菌冻干粉作为检验玉米赤霉烯酮生物毒性的受试生物。本方法中，在室温下，不同浓度玉米赤霉烯酮与明亮发光杆菌接触后，随着玉米赤霉烯酮浓度升高，明亮发光杆菌相对发光强度减弱。表明玉米赤霉烯酮浓度越高，对明亮发光杆菌发光抑制性越强，即玉米赤霉烯酮浓度越高对明亮发光杆菌的生物毒性作用越强。本发明的检测结果完全能够满足对玉米赤霉烯酮残留检测，该方法前处理简单、反应快、检测灵敏、操作简便、成本低，可对玉米赤霉烯酮生物毒性实现快速检测。因此，本发明提供的方法适于规模化工业生产及应用。
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公开(公告)号：CN114410608A
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202210054940.3
申请日：2022-01-18
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开一种高效表达及纯化Cas9蛋白的方法和应用。本发明主要包括Cas9表达载体的构建，大肠杆菌的转化，Cas9蛋白的诱导表达，Cas9蛋白的纯化，以及体内体外的应用。使用GB1作为促溶标签，可增加SpCas9的稳定性及溶解性，初步提高SpCas9的表达量，且GB1不影响SpCas9的功能，后续不需去除，简便可行。再通过使用10×His标记，有助于融合蛋白与Ni‑NTA树脂的高亲和力，并有助于高盐洗去除污染的核酸，提高纯化效果。使用串联T7启动子，明显提高SpCas9的表达量。通过体内外应用，证明了所纯化得到的SpCas9‑GB1蛋白正确折叠，具有切割DNA的能力，且可入核进行基因编辑。
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