公开(公告)号：CN119120568A

公开(公告)日：2024-12-13

申请号：CN202311459475.2

申请日：2023-11-03

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  徐凯祥 ,  赵恒 ,  王娇祥 ,  角德灵 ,  赵红业 ,  郭建雄 ,  魏太云

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N9/22 ,  C12N15/877 ,  C12N15/90 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及一种四基因编辑异种器官移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在野生型猪胎儿成纤维细胞系中，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1基因，并转入hCD39、hCD55、hTBM三个人源化基因，结合体细胞核移植技术构建GTKO/hCD39/hCD55/hTBM四基因编辑克隆猪，进一步通过基因型鉴定和蛋白功能表型分析，批量获得四基因编辑异种器官移植供体猪。本发明在一定程度上解决了猪‑人异种器官移植过程中存在的抗原抗体介导的免疫排斥反应共性问题，为进一步研究开发适合心脏、肾脏、肝脏、皮肤等器官/组织异种移植供体猪奠定了基础，对开展猪‑非人灵长类异种器官移植临床前研究和猪‑人异种器官移植临床化应用具有重要的前景。

公开(公告)号：CN118956960A

公开(公告)日：2024-11-15

申请号：CN202411426219.8

申请日：2024-10-14

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 赵红业 ,  魏红江 ,  曹攀 ,  角德灵 ,  徐凯祥 ,  郭建雄

IPC: C12N15/85 ,  A01K67/0275 ,  C12N5/077 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明涉及一种通过诱导性表达K‑Ras基因构建小型猪肿瘤模型的方法，通过Tet‑On诱导表达系统与转座子技术结合，构建Tet‑On转座子表达载体PB‑CAG‑Teton3g‑T2A‑mcherry‑TRE3GS‑MCS‑Puro。获得K‑Ras基因编辑阳性细胞细胞系，构建K‑Ras基因编辑克隆胚，并移植至代孕母猪输卵管内，生产K‑Ras基因编辑克隆猪个体，通过饲喂四环素诱导K‑Ras表达，促进克隆猪肿瘤的发生，获得小型猪肿瘤模型。本发明克服了现有模型构建周期长、效率低、表型不明显、基因表达可控性差等技术问题，实现批量K‑Ras基因诱导性表达小型猪肿瘤模型的生产，在肿瘤生物学研究领域具有重要的应用价值和前景。

公开(公告)号：CN113913435A

公开(公告)日：2022-01-11

申请号：CN202111259580.2

申请日：2021-10-28

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 李鸿辉 ,  魏红江 ,  成文敏 ,  赵红业

IPC: C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  C12N15/89 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及基于P53基因获得小型猪肿瘤疾病模型的方法，属于医学动物疾病模型领域。本方法主要包括P53基因BE3 sgRNA的设计与组装，BE3和sgRNA质粒的转染，筛选并获得P53基因关键碱基突变的阳性细胞系，利用体细胞核移植技术构建重构胚，将重构胚移植到代孕母猪体内继续发育后获得P53基因突变仔猪，通过检测克隆仔猪组织中P53基因RNA及蛋白质表达水平来验证P53基因的功能，采用组织病理学及免疫组化法鉴定仔猪组织中的肿瘤；该肿瘤疾病模型可以精准模拟人类P53基因致病突变，对开展人类肿瘤的发生、形成、临床研究以及药物的研发具有重要的意义，为人类肿瘤疾病的研究和治疗提供了可靠的模型。

公开(公告)号：CN110373392A

公开(公告)日：2019-10-25

申请号：CN201910498532.5

申请日：2019-06-10

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  赵恒 ,  赵红业 ,  角德灵 ,  徐凯祥 ,  郭建雄

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及一种适合肾脏异种移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在猪胎儿成纤维细胞的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术同时敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因并定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，再结合体细胞核移植技术构建GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因修饰的异种移植供体基础猪，在此基础猪上再定点插入hCD39、hTBM、REN三个修饰基因，构建多基因修饰的肾脏异种移植供体猪，再对该供体猪进行功能验证，获得适合肾脏异种移植的供体猪。本发明为适合异种肾脏移植供体猪的开发提供了科学的理论基础，为肾脏衰竭患者的移植治疗提供了希望。

公开(公告)号：CN110373391A

公开(公告)日：2019-10-25

申请号：CN201910498531.0

申请日：2019-06-10

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  角德灵 ,  赵红业 ,  赵恒 ,  徐凯祥 ,  李鸿辉

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及一种适合心脏异种移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在猪胎儿成纤维细胞的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因后并定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，再结合体细胞核移植技术构建GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因修饰的异种移植供体基础猪，再在此基础猪的Rosa26位点再定点插入hCD39、hTBM两个心脏功能修饰特异基因，构建出多基因修饰的心脏异种器官移植供体猪再进行功能验证，获得适合心脏异种移植的供体猪。本发明为异种心脏移植提供了可靠的供体猪，为处于终末期的心脏病患者的治疗提供了希望。

公开(公告)号：CN110358766A

公开(公告)日：2019-10-22

申请号：CN201910497797.3

申请日：2019-06-10

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  赵恒 ,  李鸿辉 ,  角德灵 ,  赵红业

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  C12N15/867 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明涉及一种基于全基因组CRISPR/Cas9文库筛选异种移植抗原基因的方法，属动物基因编辑技术领域。基于CRISPR/Cas9基因编辑系统，针对猪基因组范围内的全部基因各设计1-2条靶向sgRNA，构建sgRNA慢病毒载体随机敲除文库并转染至HEK293T细胞中，收集病毒再转染至猪PK15细胞中，将转入病毒的猪PK15细胞包被到灵长类的胸腺或肾包膜下，或用人血清进行体外培养，分别在不同的时间内回收存活的细胞，再对回收的活细胞建立单细胞DNA文库或进行单细胞培养扩增后提取DNA，再用慢病毒载体上的通用引物扩增含有sgRNA的上述DNA片段，对敲除的单细胞基因位点进行定型，最终确定并查找出相关基因的信息。本发明的实施对猪作为异种器官移植过程中猪细胞表面新抗原的挖掘具有重要的指导意义。

公开(公告)号：CN110295194A

公开(公告)日：2019-10-01

申请号：CN201910497796.9

申请日：2019-06-10

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  徐凯祥 ,  赵红业 ,  角德灵 ,  郭建雄 ,  赵恒 ,  李鸿辉 ,  卿玉波

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及一种猪内源性逆转录病毒失活克隆猪的构建方法，属动物生物技术领域。通过ddPCR和全基因组测序比对，确定猪内源性逆转录病毒在猪胎儿成纤维细胞基因组中的拷贝数和其占据染色体的位置，利用CRISPR/Cas9技术构建猪内源性逆转录病毒失活载体转染至猪胎儿成纤维细胞，筛选获得的阳性细胞进行体细胞核移植，待妊娠时取出胎儿鉴定其失活与否，利用ddPCR和全基因组测序比对后，再对该猪胎儿成纤维细胞进行基因打靶，依次循环，直至获得猪内源性逆转录病毒完全失活的细胞后进行体细胞核移植，最终获得猪内源性逆转录病毒完全失活的克隆猪。本发明克服了猪内源性逆转录病毒失活效率低、成功率低的问题，对解决异种器官移植的安全性问题具有重要的意义。

公开(公告)号：CN103343142B

公开(公告)日：2017-07-25

申请号：CN201310295393.9

申请日：2013-07-15

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 魏红江 ,  赵红业 ,  赵鲁

IPC: C12N15/877 ,  A61D19/04 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明涉及一种利用连续克隆技术生产孤雌生殖克隆猪的方法，属于繁殖生物学领域。本发明包括猪卵母细胞的去脂、孤雌激活、成纤维细胞的分离和连续的体细胞核移植；将猪去脂后的成熟卵母细胞进行孤雌激活获得孤雌胚胎，移植到代孕母猪体内并获取25－29日龄成活孤雌胎儿，建立猪孤雌胎儿成纤维细胞系，并将其作为最初供体细胞，利用体细胞核移植技术进行连续克隆获得猪的孤雌生殖个体，此技术克服了猪的孤雌生殖胚胎在体内发育至30天便停止发育的情况，成功延长猪的孤雌胚胎在体内的发育时间，并最终获得成活的孤雌克隆猪。

公开(公告)号：CN205865497U

公开(公告)日：2017-01-11

申请号：CN201620878400.7

申请日：2016-08-15

Applicant: 云南农业大学 ,  魏红江

Inventor： 魏红江 ,  角德灵 ,  赵红业 ,  王跃宁 ,  芮绍辉 ,  何瑞清 ,  钟文庆 ,  余波

IPC: A01K1/00

Abstract: 本实用新型属于畜牧养殖技术领域，具体地说，涉及一种装配式可移动标准化饲养羊舍。所述的装配式可移动标准化饲养羊舍主要包括地形调整平台、羊舍底板、羊舍墙体、羊舍屋顶、羊舍内部设施，其组装式标准化摸块由工厂统一加工而成，本实用新型中整个羊舍房处于悬粪且稳定牢固，建设不受任何地形结构、地貌特征等因素的限制，适用范围较广，不会改变土地的使用性质，可以二次循环使用，装配较简单、方便，可根据不同的需要随时进行组装和拆卸，生态环保，建设周期短、成本低，能够充分地发挥中国西南山区、半山区的山羊等生物资源优势，特别适用于中国西南贫困山区、半山区等地区的养殖户发展山羊养殖业，是使贫困地区农养殖户实现脱贫致富的有效途径。