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公开(公告)号：CN105242043B
公开(公告)日：2017-11-07
申请号：CN201510680061.1
申请日：2015-10-19
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/531
Abstract: 本发明公开了一种可鉴别诊断口蹄疫病毒感染的多物种通用AGL‑ELISA试剂盒，包括包被8BF蛋白的酶标板和酶标记的重组蛋白[AGL]n，重组蛋白[AGL]n为将金黄色葡萄球菌A蛋白免疫球蛋白结合结构域中B结构域、链球菌蛋白G蛋白免疫球蛋白结合结构域中C2结构域、大消化链球菌蛋白L蛋白免疫球蛋白结合结构域中B3结构域这三种蛋白结构域进行基因优化和串联，形成的多拷贝重组蛋白，n为1、2或3。本发明重组蛋白[AGL]2进行酶标记，酶标记产物经Western‑blot、ELISA检测，可与多物哺乳动物免疫球蛋白结合，可作为各种哺乳动物血清学检测中通用抗体，可替代物种特异性抗体，进行多物种共患传染病检测。AGL‑ELISA可检测多种动物口蹄疫感染，并能鉴别疫苗免疫和自然感染动物以及持续感染动物。
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公开(公告)号：CN105647875A
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201610136765.7
申请日：2016-03-10
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/28 , G01N33/577 , G01N33/569
CPC classification number: C07K16/2812 , G01N33/56966 , G01N2333/70514
Abstract: 本发明公开了抗鹅CD4胞外区单克隆抗体及其在检测禽类外周血中CD4+T淋巴细胞中的应用。本发明利用携带鹅CD4胞外区的原核表达载体pET-30a-CD4ex，采用大肠杆菌RosettaTM(DE3)pLysS表达鹅CD4胞外区基因，得到重组蛋白rGopET-30a-CD4ex。以重组蛋白rGopET-30a-CD4ex为免疫原，免疫三次BALB/c小鼠，加强免疫后，经重组蛋白rGopET-30a-CD4ex筛选获得1株稳定分泌抗鹅CD4胞外区单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为5A9，保藏号是：CGMCC NO.11192。研究表明，由该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体能与纯化的重组鹅CD4胞外区蛋白rGopET-30a-CD4ex反应，同时也能够与分离的鹅、鸭以及鸡外周血淋巴细胞发生特异性反应。因此，本发明的提出为检测禽类外周血中CD4+T淋巴细胞提供了一种新的、有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN105242043A
公开(公告)日：2016-01-13
申请号：CN201510680061.1
申请日：2015-10-19
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/531
Abstract: 本发明公开了一种可鉴别诊断口蹄疫病毒感染的多物种通用AGL-ELISA试剂盒，包括包被8BF蛋白的酶标板和酶标记的重组蛋白[AGL]n，重组蛋白[AGL]n为将金黄色葡萄球菌A蛋白免疫球蛋白结合结构域中B结构域、链球菌蛋白G蛋白免疫球蛋白结合结构域中C2结构域、大消化链球菌蛋白L蛋白免疫球蛋白结合结构域中B3结构域这三种蛋白结构域进行基因优化和串联，形成的多拷贝重组蛋白，n为1、2或3。本发明重组蛋白[AGL]2进行酶标记，酶标记产物经Western-blot、ELISA检测，可与多物哺乳动物免疫球蛋白结合，可作为各种哺乳动物血清学检测中通用抗体，可替代物种特异性抗体，进行多物种共患传染病检测。AGL-ELISA可检测多种动物口蹄疫感染，并能鉴别疫苗免疫和自然感染动物以及持续感染动物。
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公开(公告)号：CN104231071A
公开(公告)日：2014-12-24
申请号：CN201410317401.X
申请日：2014-07-04
Applicant: 东北农业大学
IPC: C07K14/705 , C12N15/12 , C12N5/20 , C07K16/28 , G01N33/577 , G01N33/569
CPC classification number: C07K14/7051 , C07K16/2809 , G01N33/56966
Abstract: 本发明公开了鹅CD3ε链胞外区单克隆抗体及其在检测鹅CD3+T淋巴细胞中的应用。以鹅胸腺cDNA为模板扩增得到鹅CD3ε基因，根据GoCD3ε胞外区基因特点，设计1对特异性引物扩增得到鹅CD3ε胞外区基因(CD3εex)，采用大肠杆菌表达鹅CD3εex。以含有CD3εex的重组质粒为免疫原，免疫BALB/c小鼠，重组蛋白rGoCD3ε加强免疫，获得1株稳定分泌鹅CD3ε链胞外区单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3C11)。该单克隆抗体能与纯化的重组蛋白rGoCD3反应，同时能够与分离的鹅外周血淋巴细胞发生特异性反应。因此，本发明的提出为检测鹅中CD3+T淋巴细胞提供了一种新的、有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN101696453B
公开(公告)日：2012-01-25
申请号：CN200910073126.0
申请日：2009-11-02
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 检测牛病毒性腹泻病毒的方法逆转录环介导等温扩增反应试剂盒的制备及其使用方法，它涉及反应试剂盒的制备及其使用方法。它解决了现有检测牛病毒性腹泻病毒的方法存在成本昂贵，需要专业设备及专业人员参与检测且不适于现阶段中国畜牧业发展状况的问题。方法：首先设计引物，然后配制逆转录环介导等温扩增反应液，即完成。使用方法：取含牛病毒性腹泻病毒样品的RNA提取物，加入反应液，混合后进行逆转录环介导等温扩增反应，再离心检测；或加入10000×SYBR GREEN I，然后置于紫外灯下检测；或进行电泳检测；或采用Real-time PCR仪进行保温反应检测。本发明反应试剂盒的检测方便，常规检测无需复杂仪器，降低成本。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101603043B
公开(公告)日：2011-05-04
申请号：CN200910072332.X
申请日：2009-06-19
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/21
Abstract: 一种鹅干扰素-α多肽基因，它涉及一种鹅干扰素-α基因。它解决了目前天然的鹅干扰素-α基因在大肠杆菌内不能表达的问题。本发明鹅干扰素-α多肽基因序列如SEQ ID NO：1所示。本发明木糖还原酶基因序全长505bp，10bp处有起始密码子ATG，496bp处有终止密码子TAA，有489bp完整的开放阅读框。本发明鹅干扰素-α多肽基因能够在大肠杆菌表达系统中高效表达鹅干扰素-α成熟多肽。本发明的鹅干扰素-α多肽基因转录后mRNA的二级结构明显优于天然鹅干扰素-α多肽基因，提高了鹅干扰素-α在大肠杆菌系统中的表达量，实现了高效表达。
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公开(公告)号：CN117069866A
公开(公告)日：2023-11-17
申请号：CN202311333226.9
申请日：2023-10-16
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种鸭甲型肝炎病毒3型（DHAV‑3）重组免疫原及其应用。本发明将DHAV‑3结构蛋白VP1、VP3和VP0的保护性抗原优势区经柔性Linker串联后进行原核表达，以纯化的重组蛋白（rDHAV‑3‑VP）为免疫原，免疫5日龄SPF雏鸭，免疫后第10 d攻击1000 ELD50 DHAV‑3鸭胚匀浆毒，连续观察21 d，同时设置卵黄抗体预防组和PBS对照组，结果表明rDHAV‑3‑VP免疫组和卵黄抗体预防组提供相同的保护率，均为82%；免疫组攻毒后存活雏鸭的血清中和抗体效价为1：48；免疫组肝脏组织病变程度低于卵黄抗体预防组和PBS对照组，且免疫组和卵黄抗体预防组的病毒载量无差异，均显著低于PBS对照组。本发明的提出为制备预防DHAV‑3感染提供了一种新的技术手段。
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公开(公告)号：CN110095607B
公开(公告)日：2021-08-10
申请号：CN201910304998.7
申请日：2019-04-16
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/576 , G01N33/531
Abstract: 本发明公开了一种用于检测1型和3型鸭甲型肝炎病毒血清抗体的通用型间接ELISA试剂盒及其应用。本发明建立了一种基于VP0重组蛋白检测1型和3型DHAV血清抗体的通用型间接ELISA检测方法，该方法是以原核表达的1型DHAV VP0重组蛋白为检测抗原，经Western blotting和间接ELSIA方法证实该VP0重组蛋白即可以与1型DHAV血清抗体发生特异性反应，也能与3型DHAV血清抗体发生特异性反应，因此以1型DHAV VP0重组蛋白为检测抗原进行间接ELISA检测可判断被检鸭血清是否含有1型和3型鸭甲型肝炎病毒的抗体及其抗体水平，本发明的提出为有效防治鸭甲型肝炎提供了新的快速检测手段。
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公开(公告)号：CN108841793A
公开(公告)日：2018-11-20
申请号：CN201810586835.8
申请日：2018-06-08
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/40 , G01N33/577 , G01N33/573 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了抗鸭Mx-A单克隆抗体及其在检测鸭Mx蛋白中的应用。本发明以含有鸭Mx基因的重组质粒为模板，设计1对特异性引物扩增得到编码鸭Mx N端1-100aa的基因片段Mx-A。构建其重组原核表达载体pET-30a-Mx-A和pET-32a-Mx-A，采用大肠杆菌原核表达技术表达鸭Mx-A，得到重组蛋白rDupET-30a-Mx-A和rDupET-32a-Mx-A。以重组蛋白rDupET-30a-Mx-A为免疫原，免疫小鼠，经筛选获得1株稳定分泌抗鸭Mx-A的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为4B6，保藏号是：CGMCC NO.15287。研究表明，该单克隆抗体能与原核表达的重组鸭Mx-A蛋白反应，同时也能够与转染真核表达载体pcDNA3.1-Mx的鸡胚成纤维细胞表达的鸭Mx蛋白及感染DHAV-3后鸭胚不同组织表达的鸭Mx蛋白发生特异性反应。因此，本发明的提出为检测鸭Mx蛋白提供了一种新的、有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN105886474A
公开(公告)日：2016-08-24
申请号：CN201610244264.0
申请日：2016-04-19
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/28 , G01N33/577 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了抗鹅CD8α链胞外区单克隆抗体及其在检测禽类外周血中CD8+T淋巴细胞中的应用。本发明以携带鹅CD8α链胞外区基因的原核表达载体为模板，设计1对特异性引物扩增得到鹅CD8α链胞外区238?480bp基因，构建重组原核表达载体，采用大肠杆菌表达鹅CD8α链胞外区80?160aa，得到重组蛋白rGopET?30a?CD8αex。以重组蛋白rGopET?30a?CD8αex为免疫原，免疫小鼠，经筛选获得1株稳定分泌抗鹅CD8α链胞外区80?160aa单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为9E4，保藏号是：CGMCCNO.11194。研究表明，该单克隆抗体能与纯化的重组鹅CD8α链胞外区80?160aa蛋白反应，同时也能够与分离的鹅、鸭以及鸡的外周血淋巴细胞发生特异性反应。因此，本发明的提出为检测禽类外周血中CD8+T淋巴细胞提供了一种新的、有效的技术手段。
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