提高抗病无核葡萄胚挽救育种效率的双相培养基及制备方法

    公开(公告)号:CN1896227B

    公开(公告)日:2011-07-27

    申请号:CN200610043024.0

    申请日:2006-06-26

    Inventor: 王跃进 田莉莉

    Abstract: 本发明公开了一种提高抗病无核葡萄胚挽救育种效率的双相培养基及制备方法,它是按一定组分及浓度配比制成液相培养基和固相培养基,取液相培养基高压灭菌,倒入固相培养基上层,制成固-液双相培养基。它适用于对抗病无核葡萄授粉后的胚珠进行胚挽救离体培养,以获得大量成苗的杂种后代,使用本发明可使无核葡萄胚发育率达85%,成苗率可达65%,且胚发育充分,成苗整齐健壮,成活率高,极大地提高了抗病无核葡萄胚挽救育种效率,加速了无核葡萄育种的进程,使其达到世界领先地位,本发明将为培育优质、抗病无核葡萄新品种开创极为广阔的前景。

    葡萄芪合成酶基因病原菌诱导型启动子序列的应用

    公开(公告)号:CN102121007A

    公开(公告)日:2011-07-13

    申请号:CN201010582597.7

    申请日:2010-12-03

    Abstract: 本发明涉及中国葡萄属野生种华东葡萄芪合成酶病原菌诱导型启动子序列的应用,在人工接种葡萄白粉菌后,应用半定量RT-PCR法分析中国葡萄属野生种华东葡萄株系白河-35-1芪合成酶基因表达模式,克隆芪合成酶基因的cDNA序列与gDNA序列,设计特异引物,进一步分离获得了芪合成酶基因病原菌诱导型启动子序列1772bp,通过瞬时转化分析确定该启动子具有病原菌诱导表达特性,该启动子与所克隆的芪合成酶基因cDNA与gDNA序列融合,在转化植物中受病原菌诱导表达调控,增强了目标植物对病原菌的抗性,从中国葡萄属野生种这一特异资源中分离克隆芪合成酶基因启动子,对于填补国内空白及进一步应用于植物抗病改良,具有重要的意义。

    植物病原菌诱导型乙烯响应因子基因启动子序列及其应用

    公开(公告)号:CN102121006A

    公开(公告)日:2011-07-13

    申请号:CN201010582586.9

    申请日:2010-12-03

    Abstract: 本发明涉及了一种植物病原菌诱导型乙烯响应因子基因启动子序列,其核酸全长序列为1583bp,将其瞬时转化烟草叶片,烟草赤星病诱导可以激活GUS基因的表达。应用本发明的启动子,构建获得“启动子-目的基因”载体,利用遗传转化技术将其导入到植物中,可以实现对目的基因的定向操作,获得病原菌诱导表达目的基因的转基因植株;这不仅可以实现目的基因在特定逆境情况下的表达,而且为植物抗病基因的应用提供强有力的工具。

    葡萄病程相关蛋白PR10-1水解RNA与抑菌活性的方法

    公开(公告)号:CN102120997A

    公开(公告)日:2011-07-13

    申请号:CN201010582600.5

    申请日:2010-12-03

    Abstract: 本发明公开了一种葡萄病程相关蛋白PR10-1水解RNA与抑菌活性的方法,根据中国野生葡萄病程相关蛋白基因480bp开放阅读框构建突变体K55N、E149G、Y151H,将PR10-1基因,分别插入原核表达载体pGEX-4T-1中,使其与GST标签处于同一读码框,PR10-1及其突变体融合蛋白与烟草赤星病菌的培养结果表明,PR10-1与Y151H对烟草赤星病菌的抑制效果比突变体K55N及E149G融合蛋白显著的多,这也是由于K55N及E149G中RNA酶活性有关的保守氨基酸残基被突变其RNA酶活性被降低所致。本发明所通过对所克隆的葡萄病程相关蛋白PR10-1体外RNA酶活性与抑菌活性的检测,快速验证出此葡萄病程相关基因PR10-1具有很强的抗病功能,这将加速筛选葡萄重要抗病基因资源。

    一种检测葡萄抗黑痘病基因的分子标记方法

    公开(公告)号:CN101691604A

    公开(公告)日:2010-04-07

    申请号:CN200910023714.3

    申请日:2009-08-27

    Inventor: 王跃进 张剑侠

    Abstract: 本发明涉及一种检测葡萄抗黑痘病基因的分子标记方法,是以种间杂交组合白河-35-1×佳利酿的双亲及F1代、F2代为试材,用随机引物OPS03进行扩增,获得约1300对碱基的脱氧核糖核酸片段,对该片段用pGEM-T载体连接,然后转化大肠杆菌DH5α,克隆该片段。经测序,该片段为1365对碱基。按照该序列,人工合成的一个寡聚核苷酸能检测亲本、杂种、欧洲葡萄及野生葡萄抗黑痘病基因的存在与抗黑痘病性状的表达,用作检测葡萄抗黑痘病基因的探针。本发明的分子标记可用作葡萄抗黑痘病育种的早期筛选鉴定;其碱基序列为研究葡萄抗黑痘病基因提供了依据;人工合成的寡聚核苷酸序列具检测葡萄抗黑痘病基因存在与表达的功能。

    一种新疆沙地葡萄一次性施肥的辅助肥料及施肥方法

    公开(公告)号:CN101538178A

    公开(公告)日:2009-09-23

    申请号:CN200910022233.0

    申请日:2009-04-28

    Abstract: 本发明公开了一种新疆沙地葡萄园全年一次性施肥的辅助肥料及其施肥方法,该方法适用于沙地管理中等或管理偏低的葡萄园的5年以上树龄,施肥距葡萄主干50cm-70cm处,施肥深度为20cm-40cm,制得的该辅助肥料所含有的纯N∶P∶K=1∶0.7∶0.9;由以下原料按重量百分比制成:有机肥颗粒:50%-60%,过磷酸钙:28%-35%,硫酸钾:12%-15%,用牛皮纸包装,每袋280g-290g;在春季葡萄出土后,萌芽前在离葡萄主干50cm-70cm处开沟或挖坑,沟或坑深40cm,然后先按每亩施入15000kg羊粪,再在羊粪上按每平方米施入辅助肥料1袋,并在辅助肥料的袋子上层用铁丝扎梅花型直径3mm小孔8个,埋土后浇水。采用本发明简单易行,能够节约生产成本,效果显著。

    野生葡萄泛素结合酶基因序列

    公开(公告)号:CN101220365A

    公开(公告)日:2008-07-16

    申请号:CN200710019002.5

    申请日:2007-11-06

    Inventor: 王跃进 徐炎

    Abstract: 本发明公开了野生葡萄泛素结合酶基因序列,它是首次采用构建cDNA文库技术进行野生葡萄抗白粉病基因的克隆,获得了蛋白质泛素化途径关键基因-泛素结合酶基因,该基因所编码的氨基酸序列在1-30位氨基酸残基之间有HOTLOOPS结构序列,在32和174位氨基酸残基之间存在一个所有泛素结合蛋白所共有的保守催化区域UBCc结构域;该蛋白氨基酸序列全长为183个氨基酸,分子量20.8KD,等电点8.23,该基因所编码的蛋白质属于泛素结合蛋白酶E2。该序列的构建为进一步研究野生葡萄泛素结合酶基因表达机理提供了分子依据。

    基于梯状回收的基因拷贝数鉴定和各拷贝序列获得的方法

    公开(公告)号:CN101024851A

    公开(公告)日:2007-08-29

    申请号:CN200710017579.2

    申请日:2007-03-29

    Abstract: 本发明公开了一种基于梯状回收的基因拷贝数鉴定和各拷贝序列获得的方法,克服了目前判断基因拷贝数所采用的Southern杂交、竞争性PCR、实时定量PCR均不能确定每个拷贝的核苷酸序列的缺陷。其技术方案是:基因组DNA充分酶切→酶切产物电泳→梯状回收→PCR扩增→判断基因拷贝数→PCR产物克隆测序→获得每个拷贝的核苷酸序列。本发明可成功的判断脱水素基因在无核白葡萄中的拷贝数,结果与Southern杂交结果相同,并且获得了不同拷贝脱水素基因的部分核苷酸序列。可用于判断内源和外源基因的拷贝数,是以较低的成本判断基因拷贝数以及获得每个拷贝的核苷酸序列。其原理及操作简单,成本低廉,具有广阔的开发应用前景。

    一种提高无核葡萄浆果品质的营养液

    公开(公告)号:CN1458132A

    公开(公告)日:2003-11-26

    申请号:CN03134236.1

    申请日:2003-06-03

    Abstract: 本发明公开了一种提高无核葡萄浆果品质的营养液,它是由十几种有机营养、无机营养溶解配制而成,在无核葡萄开花前7-10天喷施本发明到花序上,授粉后10天、20天、30天分别喷施本发明到无核葡萄幼果表面上,喷施本发明后的无核葡萄相对未喷施本发明的无核葡萄其果梗耐拉力由86.5g提高到452.1g;果粒耐压力由672.5g提高到2144.4g;落粒率由44.8%降低为20.1%,果粒由1.55g增大到3.63g。冷库内贮藏10天后耐拉力由61.0g提高到415.0g;耐压力由605.0g提高到2135.0g;落粒率由81.6%降低为45.6%。

    一种葡萄平衡营养叶面肥及其制备方法

    公开(公告)号:CN101717287B

    公开(公告)日:2011-12-14

    申请号:CN200910219175.0

    申请日:2009-11-26

    Abstract: 本发明公开了葡萄平衡营养叶面肥,所述平衡营养液配方包括:10~30%,蔗糖1~3%,赤霉素0.005%~0.02%,柠檬酸0.015%~0.03%,氨基酸0.10%~0.30%,余量为水;所述的水是蒸馏水或无离子水。该叶面肥在葡萄果实发育关键时期(葡萄始果期、果实膨大期及果实始熟期)叶面喷施,能够全面提供葡萄果实与营养生长必需的营养元素,能够满足葡萄生长发育关键时期的营养需求。既具有提供葡萄全面营养的作用,同时具有安全、环保、节约肥水等优点,可以在南疆及与南疆气候、土壤环境相似的地区葡萄栽培中推广应用。

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