公开(公告)号：CN117512077A

公开(公告)日：2024-02-06

申请号：CN202311471207.2

申请日：2023-11-07

Applicant: 西北农林科技大学 ,  宁夏回族自治区畜牧工作站

Inventor： 王小龙 ,  吴庭杰 ,  周世卫 ,  王鑫杰 ,  王倩 ,  寇启芳 ,  陈玉林 ,  杨冲

IPC: C12Q1/6858 ,  C12Q1/6806 ,  C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12N9/22

Abstract: 本发明涉及绵羊基因分型技术领域，具体涉及用于绵羊FecB基因分型的crRNA、试剂盒及方法。所述crRNA为SEQ ID NO.1所示的crRNA‑a和SEQ ID NO.2所示的crRNA‑g。所述试剂盒包括RPA引物、crRNA、Cas12a核酸酶和ssDNA荧光探针，所述RPA引物为针对绵羊FecB基因的扩增引物。本发明的crRNA、试剂盒，基于CRISPR/Cas12a系统与RPA扩增技术鉴别绵羊FecB外显子第746位的基因型，在检测过程中不需要大型昂贵的仪器，且检测时间缩至约40min，极大地拓展了适用场景，更适用于现场检测。

公开(公告)号：CN117392747A

公开(公告)日：2024-01-12

申请号：CN202311285486.3

申请日：2023-10-07

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王美丽 ,  张浩田 ,  何翀 ,  马源 ,  王晓博 ,  毛锐 ,  李梅 ,  李书琴 ,  张宏鸣 ,  李斌 ,  王小龙

IPC: G06V40/20 ,  G06V20/40 ,  G06V10/82 ,  G06N3/0464 ,  G06V10/25

Abstract: 本发明公开了一种基于深度学习的牲畜行为检测方法、系统及计算机设备，涉及计算机视觉技术领域，通过对多牲畜视频数据的采集和抽帧，使用翻转、旋转、裁剪、变形对采集的数据进行数据增强后，将YOLOv7‑tiny网络模型作为行为检测模型的骨干网络，以获取不同分辨率牲畜图像数据的行为信息，利用SPD卷积模块减少池化层对图片信息丢失的影响，利用小目标检测层增加网络对于微小模糊目标的感知能力，并结合CA注意力机制，加强网络对目标位置信息的敏感程度，在不损失精度的前提下将模型压缩到了最小；该方法可以高效地进行牲畜各种行为的检测，从而节省畜牧业从业人员的时间成本和劳工成本。

公开(公告)号：CN116536309A

公开(公告)日：2023-08-04

申请号：CN202210088277.9

申请日：2022-01-25

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种改造后的先导编辑(Prime editing，PE)系统及其应用。所述改造后的先导编辑系统包括改造后的pegRNA、PE蛋白或其编码序列和sgRNA，其中所述的pegRNA由Spacer序列、改造后的scaffold序列、引物结合序列及逆转录序列组成，所述的改造后的scaffold序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提出的改造后的PE系统与现有的PE系统相比，可显著提高PE系统在目标位点定点突变、小片段定点插入和小片段定点缺失的效率。该改造后的PE系统对定点突变的提高率达1.9倍，对小片段定点插入的提高率达1.5倍，对小片段定点缺失的提高率达2.0倍，基因编辑效率显著高于现有技术，且脱靶效率无显著变化，本发明的提出促进了先导编辑系统的推广与应用，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN115984554A

公开(公告)日：2023-04-18

申请号：CN202211564150.6

申请日：2022-12-07

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王美丽 ,  何翀 ,  毛锐 ,  李梅 ,  姚志凤 ,  王小龙

IPC: G06V10/26 ,  G06V10/82 ,  G06N3/0464 ,  G06N3/08 ,  G01G17/08

Abstract: 本发明公开了一种基于深度学习的体重估计方法，涉及计算机视觉技术领域，通过对单个羊只侧视深度图像数据的采集，使用羊只检测和羊体语义分割模型对采集的数据进行数据增强后，将LiteHRNet网络模型作为体重估计模型的骨干网络，以获取羊只深度图像数据不同层次的语义信息，利用类激活映射方法对不同的体重估计头注意力区域进行可视化，最后筛选出体重估计误差小且羊只区域注意力集中的体重估计模型；该方法可以高效地进行羊只体重的估计，从而节省畜牧业从业人员的时间成本和劳工成本，并为其他类似动物的体重估计提供了深度学习方向上的研究思路。

公开(公告)号：CN114262708A

公开(公告)日：2022-04-01

申请号：CN202111586529.2

申请日：2021-12-21

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  周世卫 ,  陈玉林 ,  高亚伟 ,  王倩 ,  蔡蓓

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/10 ,  C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C12N15/89 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/6888 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种生产FecB基因g.A746G定点突变绵羊的试剂盒及其方法。所述的试剂盒中含有FecB‑pegRNA的体外转录模板质粒、FecB‑sgRNA的体外转录模板质粒以及PE2mRNA的体外转录模板质粒，以FecB‑pegRNA的体外转录模板质粒、FecB‑sgRNA的体外转录模板质粒为模板经PCR扩增得到的FecB‑pegRNA体外转录模板序列如SEQ ID No.4所示，FecB‑sgRNA体外转录模板序列如SEQ ID No.5所示。将体外转录获得的pegRNA、sgRNA及PE2mRNA纯化后混合，注射入绵羊受精卵细胞质中，受精卵体外培养后移植入同种雌性绵羊输卵管中，生产的后代经检测后获得FecB基因g.A746G定点突变绵羊。本发明模拟自然界中存在的FecB基因g.A746G绵羊，同时与传统CRISPR/Cas技术相比极大地避免了随机突变、bystander突变、脱靶突变及基因组损伤，因此安全性更高。本发明为绵羊的精确基因编辑提供了重要技术支撑。

公开(公告)号：CN109929878A

公开(公告)日：2019-06-25

申请号：CN201910234408.8

申请日：2019-03-26

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  李冠纬 ,  周世卫 ,  蔡蓓 ,  陈玉林

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种利用基因组碱基编辑器系统生产FGF5基因编辑山羊的方法，该方法包括以下步骤：构建特异性靶向FGF5第一外显子的sgRNA的体外转录载体；通过体外转录得到靶向FGF5第一外显子的sgRNA；体外转录BE3蛋白的体外转录载体，得到BE3 mRNA；将以上步骤的sgRNA及BE3 mRNA，纯化后混合，注射入山羊受精卵细胞质中，经体外培养后移植入同种雌性山羊输卵管中，用于生产FGF5基因敲除的基因编辑山羊。

公开(公告)号：CN109680011A

公开(公告)日：2019-04-26

申请号：CN201910041440.4

申请日：2019-01-16

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  丁毅 ,  蔡蓓 ,  周世卫 ,  陈玉林 ,  寇启芳

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/907 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/103 ,  A01K2267/02 ,  C07K14/71 ,  C12N15/113 ,  C12N2310/10 ,  C12N2310/20

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统敲除绵羊BMPR1B基因的方法，包括以下步骤：构建特异性靶向BMPR1B的sgRNA的体外转录载体；通过体外转录得到BMPR1B的sgRNA；体外转录Cas9蛋白的体外转录载体，得到Cas9mRNA；设计合成ssODN；将以上步骤的ssODN、sgRNA及Cas9mRNA纯化后测浓度，混合，注射入绵羊受精卵细胞质中，然后经体外培养后移植入同种雌性绵羊输卵管中，用于生产敲除BMPR1B的转基因绵羊。利用此方法可以快速有效的生产基因编辑绵羊，省时省力。

公开(公告)号：CN105112350A

公开(公告)日：2015-12-02

申请号：CN201510571587.6

申请日：2015-09-06

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈玉林 ,  曹平华 ,  王小龙 ,  杨雨鑫

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/74 ,  C12R1/225

Abstract: 本发明公开了一种罗伊乳酸杆菌无抗性标记基因整合体系的建立方法及其应用，利用点突变技术获得罗伊乳酸杆菌pheS基因的点突变基因pheSM，并将其与红霉素抗性基因构建整合框架LR-pheSM-em-RR，电转化至L.reuteri XNY感受态细胞，红霉素筛选获得pheSM基因重组乳酸杆菌L.reuteri XNYM；然后，构建插入基因整合框架，再将其电转化至pheSM基因重组罗伊乳酸杆菌感受态细胞，利用对-氯-苯丙氨酸抗性筛选即可获得无抗性标记的重组乳酸杆菌。本发明不将抗性基因引入宿主菌基因组中，避免抗性基因的生物安全隐患以及对上下游基因的极性作用；利用该体系可对宿主菌进行多次基因定点整合。

公开(公告)号：CN118109479A

公开(公告)日：2024-05-31

申请号：CN202410299220.2

申请日：2024-03-15

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王昕 ,  王妞 ,  王小龙 ,  陈玉林 ,  郭一 ,  钟震宇 ,  王鑫淼

IPC: C12N15/19 ,  C07K14/52 ,  C12Q1/6888

Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及绒山羊毛囊发育关键基因TGIF1及其应用。具体技术方案包括：一种绒山羊基因，所述基因为TGIF1基因，所述TGIF1基因的DNA序列如SEQ ID No：1所示。本发明首次发现TGIF1特异性定位于绒山羊毛囊隆突区HFSC中，并首次发现TGIF1可抑制绒山羊HFSC的增殖，促进绒山羊HFSC凋亡和分化。基于该特性，通过敲除或抑制表达、插入或过表达TGIF1基因，可以针对性调控绒山羊HFSC的增殖、凋亡和分化，选育出提高羊绒产量的绒山羊品种。

公开(公告)号：CN116904457A

公开(公告)日：2023-10-20

申请号：CN202310060492.2

申请日：2023-01-17

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  宋梓虢 ,  黄舒泓 ,  陈炳春 ,  陈玉林

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12N15/63

Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域，具体涉及一种PE‑STOP基因编辑系统及基因敲除方法和应用。所述基因编辑系统包括primeeditor蛋白、靶向目标位点的pegRNA及其配套切割的nickingsgRNA，所述primeeditor蛋白选自PEmax，所述PEmax的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述PE‑STOP基因编辑系统能将目的基因序列进行碱基替换，提前引入终止密码子，从而高效实现目的基因的敲除。本发明提供的基因敲除方法具有更高的编辑产物基因型纯度及更低的脱靶活性，辅以更高的基因组覆盖度，应用前景广阔。