公开(公告)号：CN105112350B

公开(公告)日：2019-02-01

申请号：CN201510571587.6

申请日：2015-09-06

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈玉林 ,  曹平华 ,  王小龙 ,  杨雨鑫

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/74 ,  C12R1/225

Abstract: 本发明公开了一种罗伊乳酸杆菌无抗性标记基因整合体系的建立方法及其应用，利用点突变技术获得罗伊乳酸杆菌pheS基因的点突变基因pheSM，并将其与红霉素抗性基因构建整合框架LR‑pheSM‑em‑RR，电转化至L.reuteri XNY感受态细胞，红霉素筛选获得pheSM基因重组乳酸杆菌L.reuteri XNYM；然后，构建插入基因整合框架，再将其电转化至pheSM基因重组罗伊乳酸杆菌感受态细胞，利用对‑氯‑苯丙氨酸抗性筛选即可获得无抗性标记的重组乳酸杆菌。本发明不将抗性基因引入宿主菌基因组中，避免抗性基因的生物安全隐患以及对上下游基因的极性作用；利用该体系可对宿主菌进行多次基因定点整合。

公开(公告)号：CN105112350A

公开(公告)日：2015-12-02

申请号：CN201510571587.6

申请日：2015-09-06

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈玉林 ,  曹平华 ,  王小龙 ,  杨雨鑫

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/74 ,  C12R1/225

Abstract: 本发明公开了一种罗伊乳酸杆菌无抗性标记基因整合体系的建立方法及其应用，利用点突变技术获得罗伊乳酸杆菌pheS基因的点突变基因pheSM，并将其与红霉素抗性基因构建整合框架LR-pheSM-em-RR，电转化至L.reuteri XNY感受态细胞，红霉素筛选获得pheSM基因重组乳酸杆菌L.reuteri XNYM；然后，构建插入基因整合框架，再将其电转化至pheSM基因重组罗伊乳酸杆菌感受态细胞，利用对-氯-苯丙氨酸抗性筛选即可获得无抗性标记的重组乳酸杆菌。本发明不将抗性基因引入宿主菌基因组中，避免抗性基因的生物安全隐患以及对上下游基因的极性作用；利用该体系可对宿主菌进行多次基因定点整合。