公开(公告)号：CN117512077A

公开(公告)日：2024-02-06

申请号：CN202311471207.2

申请日：2023-11-07

Applicant: 西北农林科技大学 ,  宁夏回族自治区畜牧工作站

Inventor： 王小龙 ,  吴庭杰 ,  周世卫 ,  王鑫杰 ,  王倩 ,  寇启芳 ,  陈玉林 ,  杨冲

IPC: C12Q1/6858 ,  C12Q1/6806 ,  C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12N9/22

Abstract: 本发明涉及绵羊基因分型技术领域，具体涉及用于绵羊FecB基因分型的crRNA、试剂盒及方法。所述crRNA为SEQ ID NO.1所示的crRNA‑a和SEQ ID NO.2所示的crRNA‑g。所述试剂盒包括RPA引物、crRNA、Cas12a核酸酶和ssDNA荧光探针，所述RPA引物为针对绵羊FecB基因的扩增引物。本发明的crRNA、试剂盒，基于CRISPR/Cas12a系统与RPA扩增技术鉴别绵羊FecB外显子第746位的基因型，在检测过程中不需要大型昂贵的仪器，且检测时间缩至约40min，极大地拓展了适用场景，更适用于现场检测。

公开(公告)号：CN109680011A

公开(公告)日：2019-04-26

申请号：CN201910041440.4

申请日：2019-01-16

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  丁毅 ,  蔡蓓 ,  周世卫 ,  陈玉林 ,  寇启芳

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/907 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/103 ,  A01K2267/02 ,  C07K14/71 ,  C12N15/113 ,  C12N2310/10 ,  C12N2310/20

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统敲除绵羊BMPR1B基因的方法，包括以下步骤：构建特异性靶向BMPR1B的sgRNA的体外转录载体；通过体外转录得到BMPR1B的sgRNA；体外转录Cas9蛋白的体外转录载体，得到Cas9mRNA；设计合成ssODN；将以上步骤的ssODN、sgRNA及Cas9mRNA纯化后测浓度，混合，注射入绵羊受精卵细胞质中，然后经体外培养后移植入同种雌性绵羊输卵管中，用于生产敲除BMPR1B的转基因绵羊。利用此方法可以快速有效的生产基因编辑绵羊，省时省力。

公开(公告)号：CN119432723A

公开(公告)日：2025-02-14

申请号：CN202411476592.4

申请日：2024-10-22

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  金妙函 ,  孙珂珂 ,  沈文文 ,  宋聖姣 ,  寇启芳 ,  周世卫 ,  魏迎辉 ,  陈玉林

IPC: C12N5/0735 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明涉及细胞生物学技术领域，具体公开了一种山羊胚胎干细胞培养体系及建系方法和应用，所述山羊胚胎干细胞培养体系以mTeSRTM Plus为基础培养液，并添加：20ng/mL～25ng/mL的白血病抑制因子、1μM～1.5μM的PD0325901、4μM～5μM的IWR‑1、45μg/mL～50μg/mL的Vc、15ng/mL～20ng/mL的激活素A、1～1.2μM的CGP77675、1.5～2μM的GO6983。本发明通过山羊胚胎干细胞培养体系培养获得形成清晰边缘的细胞克隆，能稳定传代，具备分化为三胚层的潜力。

公开(公告)号：CN117417883A

公开(公告)日：2024-01-19

申请号：CN202311239109.6

申请日：2023-09-25

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  陈玉林 ,  金妙函 ,  沈文文 ,  寇启芳 ,  周世卫

IPC: C12N5/0735 ,  C12N5/077 ,  A01K67/027 ,  A61K49/00

Abstract: 本发明属于细胞生物学技术领域，具体涉及提高绵羊胚胎干细胞多能性相关基因表达的培养体系及培养方法。所述培养体系以小鼠胎儿成纤维细胞作为饲养层细胞，以mTeSRTM Plus为基础培养液，并添加2.5μM的IWR‑1作为ESCs培养液；所述基因包括OCT4、SOX2、NANOG、DPPA3、LIN28和SALL4。所述培养方法包括：饲养层细胞制备；绵羊胚胎干细胞分离；绵羊胚胎干细胞传代培养。所述培养方法得到的绵羊胚胎干细胞在转录组及蛋白水平表达多能性相关基因，并具有向三个胚层分化的能力，可广泛应用于绵羊胚胎发育过程中重要基因的鉴定与筛选，基因编辑动物制备，人类疾病研究，也能够为绵羊干细胞育种提供基础材料等。

公开(公告)号：CN113373237A

公开(公告)日：2021-09-10

申请号：CN202110446733.8

申请日：2021-04-25

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  陈玉林 ,  周世卫 ,  寇启芳

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种利用qPCR技术检测绵羊FecB基因多态性的引物组及其方法。所述的引物组由引物对1和引物对2组成，其中，引物对1的下游引物3’端和++型的基因位点相匹配；引物对2的下游引物的3’端和BB型的基因位点相匹配。将待测样品分别用引物对1和引物对2进行qPCR扩增，扩增结束后根据两个荧光信号达到阈值的顺序即可判断出FecB基因型。该方法与传统的PCR‑Sanger测序及Taqman探针方法检测相比，节省检测成本、缩短检测周期和提高检测精准性。本发明提供的方法能快速有效地检测出绵羊FecB的BB基因型，为从大群体中筛选出产羔率更高的FecB的BB基因型亲本提供了一种简便易行、廉价有效的方法。