公开(公告)号：CN111363757B

公开(公告)日：2022-08-09

申请号：CN202010057144.6

申请日：2020-01-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 王小元 ,  方宇 ,  王建莉 ,  张淑嫣 ,  胡晓清

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/52 ,  C12N1/21 ,  C12P13/08 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种温度开关系统及其在提高氨基酸产量中的应用，具体涉及一种利用温度开关系统调控胞内代谢流分布提高苏氨酸产量的方法，属于基因工程和微生物发酵技术领域。本发明应用温度开关系统将整个发酵过程分为细胞生长和发酵生产两个阶段，以适应工程菌株发酵过程中不同时期的胞内环境变化。该系统通过控制丙酮酸羧化酶异源表达，并结合草酰乙酸温敏易脱羧的化学特性，在丙酮酸和草酰乙酸之间重新平衡代谢流量，动态调节中心代谢途径保证还原型辅因子的供应来促进L‑苏氨酸生产。本发明得到的温控苏氨酸生产菌株TWF106/pFT24rp和TWF113/pFT24rpa1，其苏氨酸摩尔转化率分别为111.78％和124.03％。

公开(公告)号：CN112501102A

公开(公告)日：2021-03-16

申请号：CN202011490461.3

申请日：2020-12-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 王小元 ,  张淑嫣 ,  方宇 ,  朱丽飞 ,  李莹 ,  胡晓清

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12P17/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一株高效生产四氢嘧啶的大肠杆菌重组菌，属于基因工程和发酵工程技术领域。所述重组菌以MG1655为出发菌株，通过引入含有基因簇ectABC、温敏蛋白CI857编码基因和温敏启动子的高拷贝质粒，使其初步具备合成四氢嘧啶的能力。通过敲除crr、iclR、thrA，同时通过在高拷贝质粒上过表达抗反馈抑制的EclysC*；另外，在同一高拷贝质粒载体上过表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PPC和来自铜绿假单胞菌PAO1的天冬氨酸脱氢酶PaeAspDH。构建得到产四氢嘧啶的重组菌MWZ003/pFT28‑ectABC‑EclysC*‑aspDH‑ppc3可较出发菌株的四氢嘧啶的产量提高5.6倍，通过条件优化，在摇瓶补料分批发酵下产量可达到25.34g/L，转化率可以达到0.29g/g葡萄糖。

公开(公告)号：CN111363757A

公开(公告)日：2020-07-03

申请号：CN202010057144.6

申请日：2020-01-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 王小元 ,  方宇 ,  王建莉 ,  张淑嫣 ,  胡晓清

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/52 ,  C12N1/21 ,  C12P13/08 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种温度开关系统及其在提高氨基酸产量中的应用，具体涉及一种利用温度开关系统调控胞内代谢流分布提高苏氨酸产量的方法，属于基因工程和微生物发酵技术领域。本发明应用温度开关系统将整个发酵过程分为细胞生长和发酵生产两个阶段，以适应工程菌株发酵过程中不同时期的胞内环境变化。该系统通过控制丙酮酸羧化酶异源表达，并结合草酰乙酸温敏易脱羧的化学特性，在丙酮酸和草酰乙酸之间重新平衡代谢流量，动态调节中心代谢途径保证还原型辅因子的供应来促进L-苏氨酸生产。本发明得到的温控苏氨酸生产菌株TWF106/pFT24rp和TWF113/pFT24rpa1，其苏氨酸摩尔转化率分别为111.78％和124.03％。

公开(公告)号：CN110373438A

公开(公告)日：2019-10-25

申请号：CN201910703126.8

申请日：2019-07-31

Applicant: 江南大学

Inventor： 王小元 ,  王建莉 ,  马文渐 ,  方宇 ,  李烨

IPC: C12P13/00 ,  C12N15/70 ,  A23K10/12 ,  A23L29/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种提高γ-氨基丁酸产量的方法，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上ADP-L-甘油-D-甘露-庚糖-6-差向异构酶RfaD基因得到重组菌WJW00后，利用WJW00进行发酵生产GABA，GABA产量达到0.6415g/L，是野生菌W3110(0.0135g/L)的47.52倍；且重组菌WJW00发酵产物中，副产物有机酸的含量均降低，如发酵24h时，丙酮酸、乙酸、乳酸的含量相对于野生菌W3110分别降低65.1％、38.9％、56.6％。本发明提供了一种新的提高GABA合成的方法，对于进一步提高GABA的合成具有十分重大的意义。

公开(公告)号：CN110317767A

公开(公告)日：2019-10-11

申请号：CN201910599466.0

申请日：2019-07-04

Applicant: 江南大学

Inventor： 王小元 ,  王建莉 ,  马文渐 ,  方宇 ,  赵磊 ,  董笑飞 ,  詹依

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P13/08 ,  C12P7/62 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高产苏氨酸的基因工程菌及其应用方法，属于基因工程和发酵工程领域。所述基因工程菌为TWF001/pFW01-phaCAB，在三氯生表达质粒pFW01上过表达了phaCAB，可以在胞外合成苏氨酸，胞内合成PHB。本发明构建的菌株苏氨酸合成量大大提高，在摇瓶发酵水平产量为17.0g/L，在3-L罐发酵水平，合成苏氨酸产量为96.4g/L，在10L罐发酵水平，合成苏氨酸产量为133.5g/L。所述基因工程菌为TWF001/pFW01-phaCAB生长状况良好，未引入外源抗性基因序列，更有利于大规模工业化生产。