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公开(公告)号：CN102080096A
公开(公告)日：2011-06-01
申请号：CN201010585352.X
申请日：2010-12-13
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/66
Abstract: 本发明涉及一种便于外源蛋白纯化的原核表达载体及构建方法。所说的天表达载体结构如图1所示，它是在载体pET30a基础上，插入多克隆位点及Mxe-ELP基因序列，构建而成。将欲表达得外源蛋白编码基因插入多克隆位点，转化感受态宿主细胞，诱导表达后，利用弹性蛋白样多肽的生物学特点，再借助内含肽MxeGyrA在硫醇存在条件下能自我切割特点，从而分离、纯化出表达的外源蛋白。该表达系统与其他原核表达系统相比，避免使用价格昂贵的层析技术，且操作简单易行，在蛋白生产领域有着极其明显的优势，特别适用于可溶性蛋白的表达纯化。
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公开(公告)号：CN101402945B
公开(公告)日：2010-10-06
申请号：CN200810234683.1
申请日：2008-11-14
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明建立的表达抗传染性法氏囊病病毒miRNA的重组禽腺联病毒制备方法属于基因工程和生物制品研究领域，包括siRNA的选择、双链短发夹寡核苷酸的合成与克隆、含miRNA表达盒禽腺联病毒转移载体的构建、重组禽腺联病毒的产生与鉴定、重组病毒表达的miRNA对传染性法氏囊病病毒复制和基因表达抑制作用的检测。与现有的其他技术相比，该系统不仅能在禽源细胞中有效、持久地表达miRNA，对传染性法氏囊病病毒复制和基因表达具有特异、持久的抑制作用，而且对家禽无任何致病作用，不仅可用于体外实验，而且可作为抗禽病毒感染的新型生物制剂进行开发。
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公开(公告)号：CN110161239B
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN201910379347.4
申请日：2019-05-08
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/558 , G01N33/577 , G01N33/532 , G01N33/544
Abstract: 本发明涉及一种基于EFTu的双抗体夹心胶体金试纸、葡萄球菌检测方法及应用，属于病原诊断技术领域，包括PVC底板，在PVC底板上按顺序依次固定有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫。其中胶体金垫内有胶体金标记的抗葡萄球菌延长因子Tu（EFTu）抗原的单克隆抗体1F7F10；硝酸纤维素膜表面划有检测线和质控线，检测线为针对葡萄球菌EFTu另一表位的单克隆抗体2E5D3，质控线为羊抗小鼠IgG抗体。本发明建立的胶体金免疫层析试纸条具有方便、快速、特异等优点，可用于葡萄球菌的快速检测。
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公开(公告)号：CN109295010B
公开(公告)日：2021-04-02
申请号：CN201811178904.8
申请日：2018-10-10
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种利用鸡肝细胞进行坦布苏病毒高效扩增的方法，包括以下步骤：（1）细胞培养：将鸡肝细胞用含体积浓度为10%胎牛血清的DMEM‑F12培养基进行培养，待细胞长满单层后，用PBS洗涤一遍后，以质量浓度为0.25%的胰酶进行消化、传代至细胞培养板中；（2）鸡肝细胞高效扩增坦布苏病毒：将鸡肝细胞接种至细胞培养板内培养，在汇合度为60%到70%时，将坦布苏病毒AHRD2018株接种鸡肝细胞，MOI为0.01，以2ml含体积浓度为2%胎牛血清的培养基培养4天，定时收集200μl上清冻存于‑80℃冰箱备用，同时每孔补200μl含体积浓度为2%胎牛血清的培养基。本发明利用鸡肝细胞可以更早产生高滴度病毒的特性，利用病毒复制速率显著高于DF‑1细胞和BHK‑21细胞的鸡肝细胞来扩增坦布苏病毒。
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公开(公告)号：CN106148376B
公开(公告)日：2020-08-11
申请号：CN201610536854.0
申请日：2016-07-09
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明提供了一种K88ac+产肠毒素大肠杆菌致弱株的构建方法，包括如下步骤：1)对K88ac+产肠毒素大肠杆菌肠毒素基因进行无痕点突变：对无抗生素抗性基因的K88ac+产肠毒素大肠杆菌的LT I基因上的TCT突变成AAA，使其对应编码的63号位的丝氨酸(S)突变成赖氨酸(K)；2)对K88ac+产肠毒素大肠杆菌肠毒素基因的敲除：在步骤1)的基础上，敲除K88ac+产肠毒素大肠杆菌的STⅡ基因，从而达到致弱K88ac+产肠毒素大肠杆菌的目的。使用本发明方法构建的致弱菌粘附性强、体内定植时间长、接种后能防止致病菌株的感染，可用于K88ac+ETEC引起的大肠杆菌病的生物预防。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105175554B
公开(公告)日：2018-09-25
申请号：CN201510700114.1
申请日：2015-10-26
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明属于生物技术研究领域，具体涉及一种类弹性蛋白多肽与热应激蛋白90α融合蛋白及其制备方法和在传染性法氏囊病病毒浓缩与纯化中的应用。所述类弹性蛋白多肽(ELP)与热应激蛋白90α(Hsp90α)融合蛋白由ELP和Hsp90α的传染性法氏囊病病毒(IBDV)结合片段M167a组成。其制备方法包括融合表达载体的构建、融合蛋白的表达与纯化、IBDV结合片段的确定以及IBDV的浓缩与洗脱。与其他方法相比，用本发明的融合蛋白浓缩和纯化传染性法氏囊病病毒具有简单、快速和经济等优点，制备的传染性法氏囊病病毒可用于实验研究和疫苗制备。
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公开(公告)号：CN106148376A
公开(公告)日：2016-11-23
申请号：CN201610536854.0
申请日：2016-07-09
Applicant: 扬州大学
CPC classification number: C12N15/70 , A61K35/74 , C07K14/245 , C12N15/66
Abstract: 本发明提供了一种K88ac+产肠毒素大肠杆菌致弱株的构建方法，包括如下步骤：1)对K88ac+产肠毒素大肠杆菌肠毒素基因进行无痕点突变：对无抗生素抗性基因的K88ac+产肠毒素大肠杆菌的LT I基因上的TCT突变成AAA，使其对应编码的63号位的丝氨酸(S)突变成赖氨酸(K)；2)对K88ac+产肠毒素大肠杆菌肠毒素基因的敲除：在步骤1)的基础上，敲除K88ac+产肠毒素大肠杆菌的STⅡ基因，从而达到致弱K88ac+产肠毒素大肠杆菌的目的。使用本发明方法构建的致弱菌粘附性强、体内定植时间长、接种后能防止致病菌株的感染，可用于K88ac+ETEC引起的大肠杆菌病的生物预防。
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公开(公告)号：CN105906719A
公开(公告)日：2016-08-31
申请号：CN201610301779.X
申请日：2016-05-09
Applicant: 扬州大学
CPC classification number: C07K14/705 , C07K14/00 , C07K2319/00 , C12N7/00 , C12N2770/10051
Abstract: 本发明属于生物技术研究领域，具体涉及一种自聚肽融合CD151蛋白及其制备方法和应用。所述的自聚肽融合CD151蛋白由猪CD151蛋白PRRSV结合片段和ELK16自聚肽组成，其制备方法包括表达载体构建、融合蛋白表达与纯化、PRRSV结合片段确定以及病毒浓缩、纯化和检测。所述自聚肽融合CD151蛋白可用于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)浓缩、纯化和环境监测中。与其他方法相比，用本发明的自聚肽融合CD151蛋白浓缩、纯化和检测PRRSV具有敏感、简单和经济等优点，不仅可用于组织样品的PRRSV浓缩和纯化，还可用于环境样品的PRRSV检测和分离培养。
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公开(公告)号：CN102296069A
公开(公告)日：2011-12-28
申请号：CN201110255463.9
申请日：2011-08-31
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/113
Abstract: 本发明设计的有效抑制不同毒株猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）复制的非翻译区特异人工微小RNA（miRNA）属于基因工程和生物制品研究领域，所述微小RNA序列如SEQIDNO：1-4之一所示。本发明还公开了包括基于RNA聚合酶II的人工miRNA表达载体构建、miRRNAi设计、双链寡核苷酸合成与克隆、miRNA表达检测及其对不同毒株PRRSV复制的抑制作用。与针对其它PRRSV基因的siRNA相比，本发明筛选的人工miRNA针对病毒RNA基因组的非翻译区保守序列，既能抑制同源毒株复制，也能抑制异源毒株复制，既可用于抗PRRSV感染制剂开发，也可用于转基因猪抗病品系培育。
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公开(公告)号：CN101402945A
公开(公告)日：2009-04-08
申请号：CN200810234683.1
申请日：2008-11-14
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明建立的表达抗传染性法氏囊病病毒miRNA的重组禽腺联病毒制备方法属于基因工程和生物制品研究领域，包括siRNA的选择、双链短发夹寡核苷酸的合成与克隆、含miRNA表达盒禽腺联病毒转移载体的构建、重组禽腺联病毒的产生与鉴定、重组病毒表达的miRNA对传染性法氏囊病病毒复制和基因表达抑制作用的检测。与现有的其他技术相比，该系统不仅能在禽源细胞中有效、持久地表达miRNA，对传染性法氏囊病病毒复制和基因表达具有特异、持久的抑制作用，而且对家禽无任何致病作用，不仅可用于体外实验，而且可作为抗禽病毒感染的新型生物制剂进行开发。
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