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公开(公告)号：CN115947795B
公开(公告)日：2024-04-16
申请号：CN202211064046.0
申请日：2022-09-01
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/01 , C12N15/70 , G01N33/535 , G01N33/68 , G01N33/543
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的重组蛋白、双抗原夹心ELISA试剂盒及其应用，包括包被抗原的酶标板、酶标抗体、非洲猪瘟阳性对照血清、ASF阴性对照血清、稀释液、反应液、10×洗涤液、TMB底物溶液、终止液。该试剂盒中包被酶标板的抗原为携带His标签的重组ASFV p54、p30融合蛋白(p54‑30‑His)。该试剂盒可用于ASFV感染血清学诊断以及抗体的水平的监测、流行病学调查等，并能有效避免重组亚单位疫苗或病毒样颗粒疫苗免疫猪抗体检测时标签蛋白的干扰，为ASFV抗体检测、检测提供一种准确、有效的方法。
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公开(公告)号：CN115947795A
公开(公告)日：2023-04-11
申请号：CN202211064046.0
申请日：2022-09-01
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/01 , C12N15/70 , G01N33/535 , G01N33/68 , G01N33/543
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的重组蛋白、双抗原夹心ELISA试剂盒及其应用，包括包被抗原的酶标板、酶标抗体、非洲猪瘟阳性对照血清、ASF阴性对照血清、稀释液、反应液、10×洗涤液、TMB底物溶液、终止液。该试剂盒中包被酶标板的抗原为携带His标签的重组ASFV p54、p30融合蛋白(p54‑30‑His)。该试剂盒可用于ASFV感染血清学诊断以及抗体的水平的监测、流行病学调查等，并能有效避免重组亚单位疫苗或病毒样颗粒疫苗免疫猪抗体检测时标签蛋白的干扰，为ASFV抗体检测、检测提供一种准确、有效的方法。
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公开(公告)号：CN107022026A
公开(公告)日：2017-08-08
申请号：CN201710438812.8
申请日：2017-06-12
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明属于生物技术研究领域，具体涉及一种鸡卵黄抗体的纯化方法。所述的鸡卵黄抗体纯化方法用类弹性蛋白多肽(ELP)与链球菌G蛋白(SPG)C2结构域融合蛋白与粗制卵黄抗体结合，用相变循环沉淀结合复合物；然后洗脱卵黄抗体，用相变循环去除ELP‑C2融合蛋白。与现有的卵黄抗体纯化方法相比，本发明的鸡卵黄抗体纯化方法具有简单、快速和纯化效率高等优点。
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公开(公告)号：CN101921878B
公开(公告)日：2012-09-05
申请号：CN201010288475.7
申请日：2010-09-21
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种非洲猪瘟病毒核酸扩增引物、检测方法和试剂盒。所说的引物对和特异性核酸探针选自SEQIDNO：1-12。其检测方法包括步骤：（a）利用PCR引物扩增待测样本中核酸；（b）将烷巯基标记的检测探针标记至纳米金颗粒上；（c）将生物素标记的捕捉探针和步骤（b）纳米金标记的检测探针与变性的PCR产物杂交；（d）将步骤（c）的杂交体系加入包被链亲素的酶标板，捕捉杂交复合物；（e）银染增强捕捉的纳米金；（f）终止银染增强反应，肉眼观察灰度判定结果。本发明具有检测敏感性高、检测特异性强以及检测成本低的特点，可有效排除PCR方法检测非洲猪瘟病毒出现的假阳性或假阴性，快速检测出非洲猪瘟病毒核酸。
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公开(公告)号：CN118256446A
公开(公告)日：2024-06-28
申请号：CN202410446996.2
申请日：2024-04-15
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/867 , C12N15/34 , C12N7/00 , G01N33/569 , G01N33/68 , C12R1/91 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种稳定表达非洲猪瘟病毒(ASFV)p30抗原的MA104‑p30细胞系及其构建方法和应用，属于基因工程领域，构建的细胞系不仅能用于ASFV抗体的检测，还可用于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的病毒快速增殖。所述的细胞系构建时以慢病毒作为ASFV CP204L基因传递载体，通过药物筛选、细胞克隆，获得稳定表达ASFV p30抗原的MA104‑p30细胞系，可用于ASFV抗体的间接免疫荧光检测；除此之外，该MA104‑p30细胞系中PIAS1基因表达高于正常的MA104细胞系，可促进PRRSV的增殖，在猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗生产上有应用前景。
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公开(公告)号：CN105906719B
公开(公告)日：2019-06-11
申请号：CN201610301779.X
申请日：2016-05-09
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明属于生物技术研究领域，具体涉及一种自聚肽融合CD151蛋白及其制备方法和应用。所述的自聚肽融合CD151蛋白由猪CD151蛋白PRRSV结合片段和ELK16自聚肽组成，其制备方法包括表达载体构建、融合蛋白表达与纯化、PRRSV结合片段确定以及病毒浓缩、纯化和检测。所述自聚肽融合CD151蛋白可用于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)浓缩、纯化和环境监测中。与其他方法相比，用本发明的自聚肽融合CD151蛋白浓缩、纯化和检测PRRSV具有敏感、简单和经济等优点，不仅可用于组织样品的PRRSV浓缩和纯化，还可用于环境样品的PRRSV检测和分离培养。
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公开(公告)号：CN104725515B
公开(公告)日：2017-11-14
申请号：CN201510124638.0
申请日：2015-03-20
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明属于生物技术研究领域，具体涉及一种类弹性蛋白多肽与柯萨奇腺病毒受体融合蛋白及其制备方法和在重组腺病毒浓缩和纯化中的应用。所述类弹性蛋白多肽(ELP)与柯萨奇腺病毒受体(CAR)融合蛋白(ELP‑CAR)，由ELP、间隔区和CAR‑D1区组成。其制备方法包括类弹性蛋白多肽与柯萨奇腺病毒受体融合表达载体的构建、融合蛋白的表达与纯化以及重组腺病毒的纯化与洗脱。与其他方法相比，用本发明的类弹性蛋白多肽与柯萨奇腺病毒受体融合蛋白浓缩和纯化重组腺病毒具有简单、快速和经济等优点，制备的重组腺病毒可以用于动物实验研究和基因工程疫苗。
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公开(公告)号：CN103525775A
公开(公告)日：2014-01-22
申请号：CN201310485894.3
申请日：2013-10-16
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及表达猪繁殖与呼吸综合征病毒游离受体重组腺病毒组及其制备与应用。所述重组腺病毒组，是由表达猪唾液酸粘附素前四个IgV结构域和与猪IgG Fc片段融合蛋白的重组腺病毒，及表达脱衣壳受体CD163第5-9个SRCR结构域与猪IgG Fc片段融合蛋白的重组腺病毒组成。该重组腺病毒组应用于制备防治猪繁殖与呼吸综合征制剂。与现有的疫苗相比，本发明制备的重组腺病毒为复制缺陷性病毒，不能在猪体内扩散传播，不存在散毒和毒力返强风险，表达的两种游离受体的协同作用能显著抑制不同毒株PRRSV感染，可以作为防控PRRS的新型制剂进行开发。
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公开(公告)号：CN106148376B
公开(公告)日：2020-08-11
申请号：CN201610536854.0
申请日：2016-07-09
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明提供了一种K88ac+产肠毒素大肠杆菌致弱株的构建方法，包括如下步骤：1)对K88ac+产肠毒素大肠杆菌肠毒素基因进行无痕点突变：对无抗生素抗性基因的K88ac+产肠毒素大肠杆菌的LT I基因上的TCT突变成AAA，使其对应编码的63号位的丝氨酸(S)突变成赖氨酸(K)；2)对K88ac+产肠毒素大肠杆菌肠毒素基因的敲除：在步骤1)的基础上，敲除K88ac+产肠毒素大肠杆菌的STⅡ基因，从而达到致弱K88ac+产肠毒素大肠杆菌的目的。使用本发明方法构建的致弱菌粘附性强、体内定植时间长、接种后能防止致病菌株的感染，可用于K88ac+ETEC引起的大肠杆菌病的生物预防。
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公开(公告)号：CN105175554B
公开(公告)日：2018-09-25
申请号：CN201510700114.1
申请日：2015-10-26
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明属于生物技术研究领域，具体涉及一种类弹性蛋白多肽与热应激蛋白90α融合蛋白及其制备方法和在传染性法氏囊病病毒浓缩与纯化中的应用。所述类弹性蛋白多肽(ELP)与热应激蛋白90α(Hsp90α)融合蛋白由ELP和Hsp90α的传染性法氏囊病病毒(IBDV)结合片段M167a组成。其制备方法包括融合表达载体的构建、融合蛋白的表达与纯化、IBDV结合片段的确定以及IBDV的浓缩与洗脱。与其他方法相比，用本发明的融合蛋白浓缩和纯化传染性法氏囊病病毒具有简单、快速和经济等优点，制备的传染性法氏囊病病毒可用于实验研究和疫苗制备。
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