公开(公告)号：CN104090050A

公开(公告)日：2014-10-08

申请号：CN201410320891.9

申请日：2014-07-08

Applicant: 复旦大学

Inventor： 张祥民 ,  刘一颖 ,  晏国全 ,  高明霞

IPC: G01N30/06 ,  G01N30/72

Abstract: 本发明属于生物分析与检测技术领域，具体为一种基于磁性材料的膜蛋白共价固定方法。本发明利用一锅法合成包有长链聚乙二醇的磁球Fe3O4@PEG，再在PEG的末端羟基上接上三氟乙磺酰基或者将其氧化为醛基。这些活性基团稀疏地分布在磁性材料的表面，与膜蛋白上不同位点的游离氨基发生高效反应，从而将膜蛋白牢固地键合到材料表面。因此，膜蛋白的增溶剂以及磷脂等干扰物便可通过洗涤以及磁性分离的方法被轻松除去，从而达到理想的鉴定效果。实验表明，利用该磁性材料固定膜蛋白具有反应效率高、非特异性吸附小等优点，并成功运用到膜蛋白组的鉴定上。本发明新颖便捷，实用高效，重复性好，稳定性高，具有巨大的推广应用潜力。

公开(公告)号：CN104076111A

公开(公告)日：2014-10-01

申请号：CN201410320892.3

申请日：2014-07-08

Applicant: 复旦大学

Inventor： 张祥民 ,  刘一颖 ,  晏国全 ,  高明霞

IPC: G01N30/06

Abstract: 本发明属于生物分析与检测技术领域，具体为一种用于膜蛋白线鉴定的膜蛋白富集、纯化、酶解一体化装置。该装置由高压泵、六通阀、膜蛋白共价固定反应柱及有关连接组成。所述膜蛋白固定反应柱中填料表面的活性基团能够与膜蛋白游离氨基、羧基发生反应，从而将膜蛋白牢牢固定在反应柱上。本发明利用共价键合的原理将膜蛋白固定在反应柱内，增溶剂以及磷脂等干扰物可通过流动相在线冲洗的方法除去，不会造成额外的样品损失，从而达到理想的鉴定效果。实验表明，利用本发明装置具有反应效率高、非特异性吸附小等优点，并成功运用到大鼠鼠肝组织膜蛋白组的鉴定中。本发明装置结构新颖，实用高效，具有推广应用潜力。

公开(公告)号：CN102243218B

公开(公告)日：2013-11-27

申请号：CN201110123885.0

申请日：2011-05-13

Applicant: 复旦大学

Inventor： 聂爱英 ,  张磊 ,  晏国全 ,  姚鋆 ,  张扬 ,  贺福初 ,  杨芃原 ,  陆豪杰

IPC: G01N30/02 ,  G01N30/06

Abstract: 一种基于细胞培养和串级质谱的蛋白质组学相对定量方法。在细胞培养过程中加入相同质量增加的重同位素标记的精氨酸或赖氨酸，细胞蛋白提取液按不同比例混合，经过特异性内切酶Lys-N和Arg-C酶解后，直接2D-LC-MS/MS分析，提取串级质谱中具有固定质量增加的b,y碎片离子对的峰强度，做比值后确定相应肽段和蛋白的相对量，该方法克服了一级质谱定量的复杂度增加的问题和同重同位素标签串级质谱定量的低质量端抑制效应，提高了一级质谱信号的灵敏度，同时由于在串级质谱中采用多对b,y碎片离子对进行定量，从而保证了该定量方法的准确性和可靠性。为定量蛋白质组学的研究和发展，提供了一个新的方法和技术平台。