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公开(公告)号：CN101904330A
公开(公告)日：2010-12-08
申请号：CN200910032891.8
申请日：2009-06-05
Applicant: 江苏省淡水水产研究所 , 南京大学
CPC classification number: Y02A40/81
Abstract: 本发明涉及翘嘴鳜精子超低温冷冻保存和复苏方法，选择形态正常、生长良好、无疾病、达到性成熟的亲鱼，对其用3mg/kg PG和200μg/kg LRH-A2腹腔注射进行诱导催熟，24h后轻压鱼腹，获取无血污的精液，将其与D-15稀释液按1∶3稀释，4℃平衡30min后，加入10％DMSO混匀，分装，在液氮面上方6cm处平衡10min，在液氮面上平衡5min后投入液氮中保存。37℃水浴，激活液SM激活，将翘嘴鳜卵挤出置于容器中，按105∶1的精卵数量比滴加入解冻后的精液拌匀，再滴加适量激活溶液SM，拌匀，使卵受精。该发明保存的精子质量高，具备授精能力，其在翘嘴鳜的种质保存、遗传育种、可持续养殖及病害防治等方面有着重要的理论意义和应用价值。
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公开(公告)号：CN101864476A
公开(公告)日：2010-10-20
申请号：CN200910030771.4
申请日：2009-04-15
Applicant: 江苏省淡水水产研究所 , 南京大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了一种特异性鉴别刀鲚与凤鲚的PCR技术。根据刀鲚与凤鲚线粒体DNA控制区(D-loop)和细胞色素b(Cytochrome b)基因的保守序列，设计出两对特异引物，制定了便捷的鉴别刀鲚与凤鲚的PCR反应体系。提取鱼肌肉DNA进行PCR扩增，取扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下检测，如P1F/R引物对扩增产物存在1220bp DNA条带，P2F/R引物对无扩增，则确定所检鲚鱼为刀鲚；如P1F/R引物对无扩增，P2F/R引物对产物存在280bp DNA条带，则可确定为凤鲚。本方法为形态学上无法鉴别的不同发育时期刀鲚与凤鲚的定性检测提供了快速、可靠的分子生物学鉴定技术。
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公开(公告)号：CN113106067B
公开(公告)日：2024-06-21
申请号：CN202010029500.3
申请日：2020-01-10
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明涉及一种嵌合抗原受体‑单核/巨噬细胞(CAR‑M)的构建及其应用。运用基因编辑手段设计、优化适于导入单核/巨噬细胞细胞膜组构的基因工程受体分子作为嵌合抗原受体，包括前导肽，识别区，铰链区和跨膜/胞内信号区，具体地，所述嵌合抗原受体包括如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.18所示的序列。本发明还涉及上述嵌合抗原受体‑单核/巨噬细胞(CAR‑M)的应用，本发明采用单核/巨噬细胞作为细胞免疫治疗的载体细胞，是利用其良好的组织浸润性与细胞因子趋化性，可以解决CAR‑T无法进入实体瘤内部的问题。本发明利用嵌合抗原受体赋予单核/巨噬细胞对肿瘤细胞的靶向性，并增强对肿瘤细胞的吞噬，进一步可以递呈肿瘤抗原给T细胞，增强抗肿瘤免疫。本发明所构建的嵌合抗原受体‑单核/巨噬细胞(CAR‑M)可用于肝癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等实体瘤的细胞免疫治疗。
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公开(公告)号：CN113106067A
公开(公告)日：2021-07-13
申请号：CN202010029500.3
申请日：2020-01-10
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明涉及一种嵌合抗原受体‑单核/巨噬细胞(CAR‑M)的构建及其应用。运用基因编辑手段设计、优化适于导入单核/巨噬细胞细胞膜组构的基因工程受体分子作为嵌合抗原受体，包括前导肽，识别区，铰链区和跨膜/胞内信号区，具体地，所述嵌合抗原受体包括如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.18所示的序列。本发明还涉及上述嵌合抗原受体‑单核/巨噬细胞(CAR‑M)的应用，本发明采用单核/巨噬细胞作为细胞免疫治疗的载体细胞，是利用其良好的组织浸润性与细胞因子趋化性，可以解决CAR‑T无法进入实体瘤内部的问题。本发明利用嵌合抗原受体赋予单核/巨噬细胞对肿瘤细胞的靶向性，并增强对肿瘤细胞的吞噬，进一步可以递呈肿瘤抗原给T细胞，增强抗肿瘤免疫。本发明所构建的嵌合抗原受体‑单核/巨噬细胞(CAR‑M)可用于肝癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等实体瘤的细胞免疫治疗。
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公开(公告)号：CN111057719A
公开(公告)日：2020-04-24
申请号：CN201811233196.3
申请日：2018-10-17
Applicant: 南京大学
IPC: C12N15/867
Abstract: 本发明为一种高效的小鼠骨髓来源巨噬细胞的转染方法及其应用，其包括以下步骤：1)首先将293T细胞传代至60mm*15mm皿中，培养过夜，使其密度达到80％，按照目的质粒/psPAX2/pMD2.G的顺序以6/3/1的比例进行慢病毒的包装，以获得高滴度慢病毒，滴度为2～3×107TU/mL(总体积5mL)；2)取小鼠骨髓，加入鼠源M-CSF(10ng/mL)进行巨噬细胞诱导，在诱导的第二天加入慢病毒，可以获得高转染效率。本发明在巨噬细胞诱导过程中加入慢病毒，不但能够提高了慢病毒的转染效率，同时还能在不影响巨噬细胞得率的情况下，缩短实验时间。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111057718A
公开(公告)日：2020-04-24
申请号：CN201811226531.7
申请日：2018-10-17
Applicant: 南京大学
IPC: C12N15/867
Abstract: 本发明构建了一种稳定表达绿色荧光蛋白的EGFP-SP2/0细胞株，该细胞株的构建过程：利用Lipofectamine 2000完成病毒包装，293T细胞完成病毒的扩增，用扩增的病毒转染SP2/0，嘌呤霉素筛选经病毒感染的SP2/0细胞，将细胞有限稀释到96孔，筛选得到带有EGFP的EGFP-SP2/0细胞。本发明获得的EGFP-SP2/0细胞绿色荧光蛋白表达稳定，可用于观测肿瘤发生、生长和转移等过程，还可用于抗体的制备，使杂交瘤细胞的筛选简便快速。
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公开(公告)号：CN110215516A
公开(公告)日：2019-09-10
申请号：CN201810180887.5
申请日：2018-03-02
Applicant: 南京大学
IPC: A61K45/00 , A61K39/395 , A61P15/14 , A61P35/00
Abstract: 本发明提供了一种用于乳腺癌免疫治疗的联合用药物组合，包括有效量CDK5抑制剂和有效量的免疫检查点阻断抗体。本发明还进一步提供了一种肿瘤免疫治疗联合用药方法。本发明发现抑制CDK5可以抑制肿瘤恶性进展，逆转免疫抑制性肿瘤微环境，改变肿瘤相关巨噬细胞表型及功能，从而提高T细胞浸润，在与免疫检查点阻断抗体联合用药中，两者可以起到协同效果，进一步增强对于肿瘤的抑制。
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公开(公告)号：CN107523611A
公开(公告)日：2017-12-29
申请号：CN201610477993.0
申请日：2016-06-22
Applicant: 南京大学
CPC classification number: C12Q1/6804 , C12Q1/708 , C12Q2565/518 , C12Q2565/519 , C12Q2527/125
Abstract: 本发明属于分子生物学、免疫学及核酸化学技术领域，具体涉及一种非扩增型核酸杂交捕获检测试剂盒及其应用。该试剂盒基于一种非扩增型抗核酸抗体捕获杂交核酸的免疫检测方法，检测过程不需反转录和PCR等扩增技术，而是利用与待检核酸互补的探针与待检核酸进行退火杂交，形成能被抗核酸抗体识别的结构，然后利用酶联免疫放大检测信号。检测方法具有快速、低成本、高灵敏、高特异性、不需复杂的扩增和检测仪器以及可检测初始病毒载量的优点。
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公开(公告)号：CN105779386A
公开(公告)日：2016-07-20
申请号：CN201610208206.2
申请日：2016-04-06
Applicant: 南京大学
IPC: C12N5/0775 , A61K35/51 , A61K9/08 , A61P35/02
Abstract: 本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种间充质干细胞在制备治疗M5型白血病药物中的应用。本发明提供的间充质干细胞是特定的炎性因子TNF?α和IFN?γ刺激后得到的间充质干细胞；所述间充质干细胞诱导肿瘤细胞凋亡的能力是通过肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL来实现的；所述间充质干细胞为离体间充质干细胞。TNF?α和IFN?γ的刺激使间充质干细胞表达TRAIL的能力显著提高，抗肿瘤能力显著增强，相较化疗，间充质干细胞移植的毒副作用更低，且其低的免疫原性也大大降低移植物抗宿主病的发病率，满足临床需求，为干细胞移植治疗提供了新的思路。可在制备治疗M5型白血病药物中应用。
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公开(公告)号：CN101904329A
公开(公告)日：2010-12-08
申请号：CN200910032890.3
申请日：2009-06-05
Applicant: 江苏省淡水水产研究所 , 南京大学
CPC classification number: Y02A40/81
Abstract: 本发明涉及黄颡鱼精子超低温冷冻保存以及复苏方法，选择形态正常、生长良好、无疾病、达到性成熟的亲鱼，对其用30μg/kg LHRH-A2腹腔注射进行诱导增精，36h后，解剖取精巢于4℃冰箱中预冷的干净研钵中剪碎，将其与任氏液按1∶6稀释后，经4℃平衡30min，加入10％甲醇混匀，分装，在液氮面上方6cm处平衡10min，在液氮面上平衡5min后投入液氮中保存。37℃水浴，激活液SM激活，将黄颡鱼卵挤入容器中，按105∶1的精卵数量比例滴加冻精拌匀，再滴加适量激活溶液SM，拌匀，使卵受精。该发明保存的精子质量高，具备授精能力，其在黄颡鱼的种质保存、遗传育种、可持续养殖及病害防治等方面有着重要的理论意义和应用价值。
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