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公开(公告)号：CN113528683A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202110780216.4
申请日：2021-07-09
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12Q1/06 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种用于检测胞内劳森菌的绝对荧光定量PCR引物对、试剂盒及检测方法，所述引物对包括上游引物和下游引物，其核酸序列如下所示：上游引物：GCTGTGGATTGGGAGAAATC(SEQ ID NO.1)；下游引物：CAAGTTGACCAGCCTCTGC(SEQ ID NO.2)。本发明还建立了一种胞内劳森菌绝对荧光定量PCR检测方法，该方法包括利用所述的引物对，进行荧光定量PCR检测。与传统方法相比，基于核酸特异性序列分子方法的实时荧光定量PCR具有快速、敏感、特异且稳定的优点。本发明可用于临床样品中低含量胞内劳森菌的快速和特异检测，可通过定量方法检测胞内劳森菌含量，从而为了解胞内劳森菌在猪体内的变化规律，以及为猪增生性回肠炎的诊断、流行病学调查及胞内劳森菌致病机制研究奠定基础。
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公开(公告)号：CN111961627A
公开(公告)日：2020-11-20
申请号：CN202010880403.5
申请日：2020-08-27
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种胞内劳森菌的分离与培养方法，其包括以下步骤：胞内劳森菌分离物的制备；McCoy细胞传代培养；细菌接种与培养；胞内劳森菌的传代与冻存；胞内劳森菌的鉴定。本发明使用McCoy细胞为宿主细胞，用其进行胞内劳森菌的分离与培养，填补了国内尚未成功从猪体内分离培养胞内劳森菌的空白，并为胞内劳森菌弱毒疫苗的研制及致病机理研究奠定了基础。
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公开(公告)号：CN111830257A
公开(公告)日：2020-10-27
申请号：CN202010699735.3
申请日：2020-07-17
Applicant: 南京农业大学 , 南京昌吉生物科技有限公司
IPC: G01N33/58 , G01N33/573 , G01N33/569 , G01N33/531 , G01N21/84 , G01N21/78 , C07K16/12 , C07K16/06
Abstract: 本发明涉及一种猪源胞内劳森菌免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA)抗原检测方法。利用纯化的重组SodC蛋白作为免疫原，制备了兔抗胞内劳森菌SodC蛋白多克隆抗体，并检测其效价和反应原性。以猪胞内劳森菌阳性菌为包被原，制备的多克隆抗体为一抗，建立了一种胞内劳森菌IPMA抗原检测方法。本发明方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，不需要荧光倒置显微镜、酶标仪、PCR仪等昂贵仪器，操作简便，判断更为直观，染色后的微孔板可以长时间保存，适合大量样品的筛查，为胞内劳森菌在感染细胞中的定位及检测提供了新手段。
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公开(公告)号：CN105132437B
公开(公告)日：2018-06-08
申请号：CN201510452639.8
申请日：2015-07-28
Applicant: 南京农业大学 , 南京昌吉生物科技有限公司
IPC: C12N15/31 , C12N15/63 , C12N15/863 , C12N7/01 , A61K48/00 , A61K39/112 , A61P31/04
CPC classification number: Y02A50/482
Abstract: 本发明属于生物制品领域，提供一种鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L的编码基因、包括该基因的转移载体pUSG11/P28‑OmpL、重组猪痘病毒rSPV‑OmpL及其应用、制备方法。编码基因序列如SEQ ID NO.1所示。重组猪痘病毒是在猪痘病毒VR‑363中插入鼠伤寒沙门菌外膜蛋白L基因获得的。重组猪痘病毒载体疫苗rSPV‑OmpL能够在免疫动物体内大量表达目的蛋白OmpL，能够诱导动物体内产生较高效价的针对OmpL的抗体，并对免疫动物产生良好的保护作用，对小鼠的免疫保护率可高达80％，兼具有弱毒疫苗的免疫效果好和灭活疫苗的安全性高等特点，是一种理想的新型疫苗。
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公开(公告)号：CN112457398B
公开(公告)日：2023-01-03
申请号：CN202011478073.3
申请日：2020-12-15
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K16/12 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种沙门菌PagC蛋白的抗原表位肽，合成属间特异的含有线性表位的氨基酸序列DRQASGSVEPEGIH和FKEHSTQDGDSFNKISSRKTGFA做为筛选抗原，得到抗原表位在线性的P1序列上的单抗细胞株J，筛选到的mAb J抗原表位P1在沙门菌属内保守、属间特异。本发明通过制备单克隆抗体，能够用于建立沙门菌抗体阻断ELISA检测方法，具有特异性好，灵敏度高的特点，具有广泛推广的潜力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112626036B
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN202011576486.5
申请日：2020-12-28
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基因缺失的无毒猪痘病毒及其在制备疫苗中的应用，所述无毒猪痘病毒是野生猪痘病毒的SPV009基因缺失病毒，所述SPV009基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。相对于现有技术，本发明经过大量试验成功构建了SPVSPV009基因缺失的猪痘病毒，该病毒对猪安全无毒，可作为疫苗表达载体用于其他动物疫病的活载体疫苗的研制，减少养殖业的经济损失。
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公开(公告)号：CN110376388B
公开(公告)日：2021-10-19
申请号：CN201910756529.9
申请日：2019-08-16
Applicant: 南京农业大学 , 南京昌吉生物科技有限公司
IPC: G01N33/68 , G01N33/569 , G01N33/535
Abstract: 本发明公开了一种新型副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法，涉及抗体的检测领域，尤其涉及利用一种重组截短蛋白P2检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA检测方法及其试剂盒。这种副猪嗜血杆菌间接ELISA检测方法通过截短表达一种重组副猪嗜血杆菌外膜蛋白P2，并以该蛋白作为包被抗原，并通过对ELISA反应条件、检测方式和临界值确定方式的优化；能够实现对副猪嗜血杆菌抗体的准确检测，具有较好的特异性和敏感性；有效解决了在抗体检测过程中本底过高的问题；并较大程度降低了检测成本。
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公开(公告)号：CN113444175A
公开(公告)日：2021-09-28
申请号：CN202110855204.3
申请日：2021-07-28
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K16/12 , C12N15/13 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种重组猪胞内劳森菌Hsp60蛋白单克隆抗体及其应用，所述单克隆抗体的重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；所述单克隆抗体的轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。本发明所制备的重组猪胞内劳森菌Hsp60蛋白单克隆抗体纯度高、特异性好、灵敏度高，与其它肠道致病菌无交叉反应性，可用于ELISA、IFA检测，对于临床LI诊断和实验室LI诊断技术研发具有重要意义。
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公开(公告)号：CN113376375A
公开(公告)日：2021-09-10
申请号：CN202110631461.9
申请日：2021-06-07
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种胞内劳森菌的IPMA抗体检测方法，包括以下步骤：(1)利用McCoy细胞进行胞内劳森菌的培养；(2)制备IPMA反应板：将步骤(1)培养的胞内劳森菌加入到含McCoy细胞的细胞板中培养，连续培养4‑5d，之后依次进行固定、通透和封闭；(3)在步骤(2)所得的IPMA反应板中加入待测血清，同时分别加入阳性对照血清和阴性对照血清，孵育；加入过氧化物酶标记的二抗，孵育；加入显色液，反应，干燥；(4)显微镜下观察，当待测血清样品为胞内劳森菌抗体阳性时，则被胞内劳森菌感染的阳性细胞胞质将被染为棕红色；而当待测猪血清样品为胞内劳森菌抗体阴性时，则被胞内劳森菌感染的McCoy细胞胞质不着色。该法具有特异性强、灵敏度高、操作简单等优点。
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公开(公告)号：CN107686865A
公开(公告)日：2018-02-13
申请号：CN201710961272.1
申请日：2017-10-17
Applicant: 南京农业大学 , 上海市金山区农业委员会 , 上海市金山区动物疫病预防控制中心 , 中国农业科学院上海兽医研究所 , 上海振华奶牛有限公司
CPC classification number: C12Q1/705 , C12Q1/6851 , C12Q2600/166 , C12Q2531/113 , C12Q2545/113 , C12Q2561/101
Abstract: 本发明公开了一种检测I型牛疱疹病毒的引物对、探针、试剂盒及方法，所述引物对和探针是针对I型牛疱疹病毒Cooper毒株gE基因序列第1607-1704位如SEQ ID NO.4所示核苷酸序列设计的引物对和探针，所述试剂盒包含该引物对和探针。本发明的试剂盒，不仅可以实现快速、准确、特异性地对I型牛疱疹病毒进行检测，而且能有效鉴别I型牛疱疹病毒野毒株和I型牛疱疹病毒gE基因缺失疫苗株，灵敏度高、特异性强、重复性好，具有广阔的应用前景。
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