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公开(公告)号：CN114836356B
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202210629474.7
申请日：2022-06-06
Applicant: 南京农业大学 , 南京昌吉生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种胞内劳森菌弱毒疫苗菌株、疫苗及其应用，所述胞内劳森菌弱毒疫苗菌株保藏在中国典型培养物保藏中心，命名为LJS19051‑P80，保藏日期为2022年5月12日，保藏编号为CCTCC NO：V202239。所述胞内劳森菌弱毒疫苗菌株用于制作胞内劳森菌弱毒疫苗菌株疫苗，能有效预防猪增生性回肠炎。本发明以前期分离的胞内劳森菌LJS19051菌株为疫苗候选菌株，使用体外传代致弱方式对其进行致弱，并选择合适代次的致弱菌株制备胞内劳森菌弱毒疫苗，为猪增生性回肠炎商品化弱毒疫苗的研制及猪场猪增生性回肠炎的有效防控奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113292651A
公开(公告)日：2021-08-24
申请号：CN202110750619.4
申请日：2021-07-01
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K16/12 , C12N15/13 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种猪源胞内劳森菌Omp2蛋白单克隆抗体及其应用，所述单克隆抗体的重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；所述单克隆抗体的轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。本发明所得猪源胞内劳森菌Omp2蛋白单克隆抗体能够用于胞内劳森菌，以制备的单克隆抗体为一抗，IFTC‑标记的羊抗鼠抗体为二抗，检测感染细胞中的胞内劳森菌，为肠上皮细胞中胞内劳森菌抗原检测方法的建立奠定基础。
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公开(公告)号：CN111830257B
公开(公告)日：2023-10-24
申请号：CN202010699735.3
申请日：2020-07-17
Applicant: 南京农业大学 , 南京昌吉生物科技有限公司
IPC: G01N33/58 , G01N33/573 , G01N33/569 , G01N33/531 , G01N21/84 , G01N21/78 , C07K16/12 , C07K16/06
Abstract: 本发明涉及一种猪源胞内劳森菌免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA)抗原检测方法。利用纯化的重组SodC蛋白作为免疫原，制备了兔抗胞内劳森菌SodC蛋白多克隆抗体，并检测其效价和反应原性。以猪胞内劳森菌阳性菌为包被原，制备的多克隆抗体为一抗，建立了一种胞内劳森菌IPMA抗原检测方法。本发明方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，不需要荧光倒置显微镜、酶标仪、PCR仪等昂贵仪器，操作简便，判断更为直观，染色后的微孔板可以长时间保存，适合大量样品的筛查，为胞内劳森菌在感染细胞中的定位及检测提供了新手段。
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公开(公告)号：CN113444175A
公开(公告)日：2021-09-28
申请号：CN202110855204.3
申请日：2021-07-28
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K16/12 , C12N15/13 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种重组猪胞内劳森菌Hsp60蛋白单克隆抗体及其应用，所述单克隆抗体的重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；所述单克隆抗体的轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。本发明所制备的重组猪胞内劳森菌Hsp60蛋白单克隆抗体纯度高、特异性好、灵敏度高，与其它肠道致病菌无交叉反应性，可用于ELISA、IFA检测，对于临床LI诊断和实验室LI诊断技术研发具有重要意义。
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公开(公告)号：CN113376375A
公开(公告)日：2021-09-10
申请号：CN202110631461.9
申请日：2021-06-07
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种胞内劳森菌的IPMA抗体检测方法，包括以下步骤：(1)利用McCoy细胞进行胞内劳森菌的培养；(2)制备IPMA反应板：将步骤(1)培养的胞内劳森菌加入到含McCoy细胞的细胞板中培养，连续培养4‑5d，之后依次进行固定、通透和封闭；(3)在步骤(2)所得的IPMA反应板中加入待测血清，同时分别加入阳性对照血清和阴性对照血清，孵育；加入过氧化物酶标记的二抗，孵育；加入显色液，反应，干燥；(4)显微镜下观察，当待测血清样品为胞内劳森菌抗体阳性时，则被胞内劳森菌感染的阳性细胞胞质将被染为棕红色；而当待测猪血清样品为胞内劳森菌抗体阴性时，则被胞内劳森菌感染的McCoy细胞胞质不着色。该法具有特异性强、灵敏度高、操作简单等优点。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114836356A
公开(公告)日：2022-08-02
申请号：CN202210629474.7
申请日：2022-06-06
Applicant: 南京农业大学 , 南京昌吉生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种胞内劳森菌弱毒疫苗菌株、疫苗及其应用，所述胞内劳森菌弱毒疫苗菌株保藏在中国典型培养物保藏中心，命名为LJS19051‑P80，保藏日期为2022年5月12日，保藏编号为CCTCC NO：V202239。所述胞内劳森菌弱毒疫苗菌株用于制作胞内劳森菌弱毒疫苗菌株疫苗，能有效预防猪增生性回肠炎。本发明以前期分离的胞内劳森菌LJS19051菌株为疫苗候选菌株，使用体外传代致弱方式对其进行致弱，并选择合适代次的致弱菌株制备胞内劳森菌弱毒疫苗，为猪增生性回肠炎商品化弱毒疫苗的研制及猪场猪增生性回肠炎的有效防控奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113444175B
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN202110855204.3
申请日：2021-07-28
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K16/12 , C12N15/13 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种重组猪胞内劳森菌Hsp60蛋白单克隆抗体及其应用，所述单克隆抗体的重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；所述单克隆抗体的轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。本发明所制备的重组猪胞内劳森菌Hsp60蛋白单克隆抗体纯度高、特异性好、灵敏度高，与其它肠道致病菌无交叉反应性，可用于ELISA、IFA检测，对于临床LI诊断和实验室LI诊断技术研发具有重要意义。
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公开(公告)号：CN113292651B
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN202110750619.4
申请日：2021-07-01
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K16/12 , C12N15/13 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种猪源胞内劳森菌Omp2蛋白单克隆抗体及其应用，所述单克隆抗体的重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；所述单克隆抗体的轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。本发明所得猪源胞内劳森菌Omp2蛋白单克隆抗体能够用于胞内劳森菌，以制备的单克隆抗体为一抗，IFTC‑标记的羊抗鼠抗体为二抗，检测感染细胞中的胞内劳森菌，为肠上皮细胞中胞内劳森菌抗原检测方法的建立奠定基础。
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公开(公告)号：CN113528683A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202110780216.4
申请日：2021-07-09
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12Q1/06 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种用于检测胞内劳森菌的绝对荧光定量PCR引物对、试剂盒及检测方法，所述引物对包括上游引物和下游引物，其核酸序列如下所示：上游引物：GCTGTGGATTGGGAGAAATC(SEQ ID NO.1)；下游引物：CAAGTTGACCAGCCTCTGC(SEQ ID NO.2)。本发明还建立了一种胞内劳森菌绝对荧光定量PCR检测方法，该方法包括利用所述的引物对，进行荧光定量PCR检测。与传统方法相比，基于核酸特异性序列分子方法的实时荧光定量PCR具有快速、敏感、特异且稳定的优点。本发明可用于临床样品中低含量胞内劳森菌的快速和特异检测，可通过定量方法检测胞内劳森菌含量，从而为了解胞内劳森菌在猪体内的变化规律，以及为猪增生性回肠炎的诊断、流行病学调查及胞内劳森菌致病机制研究奠定基础。
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公开(公告)号：CN111961627A
公开(公告)日：2020-11-20
申请号：CN202010880403.5
申请日：2020-08-27
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种胞内劳森菌的分离与培养方法，其包括以下步骤：胞内劳森菌分离物的制备；McCoy细胞传代培养；细菌接种与培养；胞内劳森菌的传代与冻存；胞内劳森菌的鉴定。本发明使用McCoy细胞为宿主细胞，用其进行胞内劳森菌的分离与培养，填补了国内尚未成功从猪体内分离培养胞内劳森菌的空白，并为胞内劳森菌弱毒疫苗的研制及致病机理研究奠定了基础。
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