公开(公告)号：CN113376375A

公开(公告)日：2021-09-10

申请号：CN202110631461.9

申请日：2021-06-07

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 范红结 ,  肖宁 ,  周红 ,  蔺辉星 ,  李剑男 ,  胡雨婷 ,  李敏雪

IPC: G01N33/569

Abstract: 本发明公开了一种胞内劳森菌的IPMA抗体检测方法，包括以下步骤：(1)利用McCoy细胞进行胞内劳森菌的培养；(2)制备IPMA反应板：将步骤(1)培养的胞内劳森菌加入到含McCoy细胞的细胞板中培养，连续培养4‑5d，之后依次进行固定、通透和封闭；(3)在步骤(2)所得的IPMA反应板中加入待测血清，同时分别加入阳性对照血清和阴性对照血清，孵育；加入过氧化物酶标记的二抗，孵育；加入显色液，反应，干燥；(4)显微镜下观察，当待测血清样品为胞内劳森菌抗体阳性时，则被胞内劳森菌感染的阳性细胞胞质将被染为棕红色；而当待测猪血清样品为胞内劳森菌抗体阴性时，则被胞内劳森菌感染的McCoy细胞胞质不着色。该法具有特异性强、灵敏度高、操作简单等优点。

公开(公告)号：CN111830257B

公开(公告)日：2023-10-24

申请号：CN202010699735.3

申请日：2020-07-17

Applicant: 南京农业大学 ,  南京昌吉生物科技有限公司

Inventor： 范红结 ,  蔺辉星 ,  李敏雪 ,  肖宁 ,  李剑男

IPC: G01N33/58 ,  G01N33/573 ,  G01N33/569 ,  G01N33/531 ,  G01N21/84 ,  G01N21/78 ,  C07K16/12 ,  C07K16/06

Abstract: 本发明涉及一种猪源胞内劳森菌免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA)抗原检测方法。利用纯化的重组SodC蛋白作为免疫原，制备了兔抗胞内劳森菌SodC蛋白多克隆抗体，并检测其效价和反应原性。以猪胞内劳森菌阳性菌为包被原，制备的多克隆抗体为一抗，建立了一种胞内劳森菌IPMA抗原检测方法。本发明方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，不需要荧光倒置显微镜、酶标仪、PCR仪等昂贵仪器，操作简便，判断更为直观，染色后的微孔板可以长时间保存，适合大量样品的筛查，为胞内劳森菌在感染细胞中的定位及检测提供了新手段。

公开(公告)号：CN111961627A

公开(公告)日：2020-11-20

申请号：CN202010880403.5

申请日：2020-08-27

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 范红结 ,  肖宁 ,  周红 ,  李剑男 ,  李敏雪 ,  蔺辉星

IPC: C12N1/20 ,  C12N1/02 ,  A61K39/02 ,  A61P31/04 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种胞内劳森菌的分离与培养方法，其包括以下步骤：胞内劳森菌分离物的制备；McCoy细胞传代培养；细菌接种与培养；胞内劳森菌的传代与冻存；胞内劳森菌的鉴定。本发明使用McCoy细胞为宿主细胞，用其进行胞内劳森菌的分离与培养，填补了国内尚未成功从猪体内分离培养胞内劳森菌的空白，并为胞内劳森菌弱毒疫苗的研制及致病机理研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN111830257A

公开(公告)日：2020-10-27

申请号：CN202010699735.3

申请日：2020-07-17

Applicant: 南京农业大学 ,  南京昌吉生物科技有限公司

Inventor： 范红结 ,  李敏雪 ,  肖宁 ,  李剑男

IPC: G01N33/58 ,  G01N33/573 ,  G01N33/569 ,  G01N33/531 ,  G01N21/84 ,  G01N21/78 ,  C07K16/12 ,  C07K16/06

Abstract: 本发明涉及一种猪源胞内劳森菌免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA)抗原检测方法。利用纯化的重组SodC蛋白作为免疫原，制备了兔抗胞内劳森菌SodC蛋白多克隆抗体，并检测其效价和反应原性。以猪胞内劳森菌阳性菌为包被原，制备的多克隆抗体为一抗，建立了一种胞内劳森菌IPMA抗原检测方法。本发明方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，不需要荧光倒置显微镜、酶标仪、PCR仪等昂贵仪器，操作简便，判断更为直观，染色后的微孔板可以长时间保存，适合大量样品的筛查，为胞内劳森菌在感染细胞中的定位及检测提供了新手段。