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公开(公告)号：CN108165635A
公开(公告)日：2018-06-15
申请号：CN201611113063.3
申请日：2016-12-07
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于分子生物学领域，提供一种KIAA1462基因启动子区变异位点及其在扬州鹅产蛋性状选育上的应用。该突变位点位于KIAA1462基因启动子区转录起始位点上游696bp处，具有多态性SNP位点，分别为鸟嘌呤G或胞嘧啶C，从而获得了与扬州鹅产蛋性状相关的功能基因及分子遗传标记，为鹅产蛋性状的选育工作提供了理论依据。
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公开(公告)号：CN111549058A
公开(公告)日：2020-08-18
申请号：CN202010286443.7
申请日：2020-04-13
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统在猪胎儿成纤维细胞中实现基因敲除的方法，包括下述步骤：构建Cas9/sgRNA真核表达载体；构建RGS-CR双荧光代替性报告载体；将Cas9/sgRNA真核表达载体和RGS-CR报告载体共转至293T细胞中，筛选最高效的sgRNA序列；将筛选出的Cas9/sgRNA质粒电转至猪胎儿成纤维细胞中，实现敲除。本发明的方法操作简单，可在猪体细胞上可实现高效的基因编辑。
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公开(公告)号：CN101914524B
公开(公告)日：2011-12-21
申请号：CN201010235667.1
申请日：2010-07-23
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种从小RNA合成的cDNA文库分离出microRNA前体cDNA的方法，包括以下步骤：将cDNA进行PCR扩增；得到的cDNA片段用5’端带有生物素标记的引物进行PCR扩增，扩增后得到的cDNA双链进行变性处理，然后用磁珠技术进行cDNA双链分离；对分离得到的cDNA单链进行复性，形成具有具有不同二级结构的单链cDNA，分别回收，进行PCR反应形成双链；将PCR片段经限制酶酶切，克隆测序。本发明采用的测序方法能够更为有效地提高miRNA克隆测序的效率。
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公开(公告)号：CN102041272A
公开(公告)日：2011-05-04
申请号：CN201010247916.9
申请日：2010-08-06
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/867 , C12N15/66 , C12N7/01
Abstract: 本发明公开了慢病毒介导的猪生长激素单质粒诱导表达系统，可用来制备转基因猪，属于基因工程领域。猪生长激素(pGH)具有刺激骨及软骨组织生长、调节蛋白质、脂类和糖类代谢的功能，能显著提高猪的生长速度、瘦肉率和饲料报酬，但以往的转生长激素基因动物G H在体内表达量和表达时间不受调控，结果导致很多生理性的疾病，得不偿失。本发明首先构建了强力霉素调控的pGH双质粒诱导表达系统，其次将双质粒改造为单质粒诱导表达系统，调控猪GH定时定量表达，在转基因动物中首次报道，其次将单质粒诱导表达系统中调控表达的DNA功能片段插入慢病毒载体，采用慢病毒介导该外源基因进入动物细胞，提高了转基因效率。mRNA分析表明该系统可以使猪的GH基因实现严密的诱导表达。
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公开(公告)号：CN109576276B
公开(公告)日：2022-09-27
申请号：CN201811549514.7
申请日：2018-12-18
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/12 , C12N15/113 , C12N15/11 , C12Q1/6888
Abstract: 本发明属于家畜分子生物学技术与遗传育种领域，公开了猪肉质性状相关基因Prox1的分子克隆及应用，利用双荧光酶活性分析技术确定了猪Prox1基因启动子区活性区，在‑1182/‑1957bp区域存在影响启动子活性的正调控元件；而在‑1182/‑682bp区域、‑682/‑192bp区域，以及‑192到+122bp区域均存在影响启动子活性的负调控元件。本发明在猪Prox1基因启动子序列中鉴定了18个遗传变异位点，并证明其中三个完全连锁的遗传变异位点与猪肉pH性状存在显著相关，可作为猪生产性状辅助选育的重要分子标记。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112176070A
公开(公告)日：2021-01-05
申请号：CN202010765498.6
申请日：2020-08-03
Applicant: 南京农业大学 , 常州市枫华牧业有限公司
IPC: C12Q1/6888 , C12N15/11 , C12N15/12
Abstract: 本发明公开了一种与猪肌内脂肪性状相关的UCP3基因、分子标记及其应用，该SNP分子标记为位于如SEQ ID NO：6所示序列的2159bp处的G/T突变，其基因组位置位于猪11.1版本第9号染色体从5’端起的8387309位点。本发明首先在279头试验猪群中利用FastTarget目标区域测序技术在该基因中鉴定了一个影响猪肌内脂肪含量的变异位点，并建立了针对该位点的PCR‑RsaI‑RFLP基因快速分型方法；在此基础上，本发明在500头试验猪群中对该位点提高肌内脂肪的应用效果进行了验证，结果表明通过该位点有利基因型的选择可显著提高猪群肌内脂肪含量，所鉴定的变异位点可用于种猪肌内脂肪的早期、活体、快速的标记辅助选育。
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公开(公告)号：CN109576276A
公开(公告)日：2019-04-05
申请号：CN201811549514.7
申请日：2018-12-18
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/12 , C12N15/113 , C12N15/11 , C12Q1/6888
Abstract: 本发明属于家畜分子生物学技术与遗传育种领域，公开了猪肉质性状相关基因Prox1的分子克隆及应用，利用RACE技术克隆出猪Prox1基因全长cDNA序列，其序列全长3683bp，序列特征如SEQ ID NO:4所示。利用双荧光酶活性分析技术确定了猪Prox1基因启动子区活性区，在-1182/-1957bp区域存在影响启动子活性的正调控元件；而在-1182/-682bp区域、-682/-192bp区域，以及-192到+122bp区域均存在影响启动子活性的负调控元件。群体样本表达模式表明，猪Prox1基因是一个与肉色显著相关的基因，可作为肉色分级的标记基因。另外，本发明在猪Prox1基因启动子序列中鉴定了18个遗传变异位点，并证明其中三个完全连锁的遗传变异位点与猪肉pH性状存在显著相关，可作为猪生产性状辅助选育的重要分子标记。
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公开(公告)号：CN107267627A
公开(公告)日：2017-10-20
申请号：CN201710565071.X
申请日：2017-07-12
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12Q1/6888 , C12Q2600/124 , C12Q2600/156
Abstract: 本发明属于猪标记辅助选择(MAS)技术领域，公开了与猪生产性状相关的Six1基因分子标记的制备与应用。该分子标记选自(1)～(2)中的至少一种：(1)其DNA序列如序列表SEQ ID NO：2所示，在序列表SEQ ID NO：2所示序列的第11bp处有1个A11-G11突变，导致HindII-RFLP多态性；(2)其DNA序列如序列表SEQ ID NO：13所示，在序列表SEQ ID NO：13所示序列的第11bp处有1个(AC)n微卫星变异，n表示(AC)重复数。通过群体数据关联分析，启动子活性，以及基因表达分析，证实了两个分子标记与猪生产性状呈显著相关。本发明所建立的分子标记的制备方法和应用可用于猪相关生产性状的分子选育。
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公开(公告)号：CN102021201A
公开(公告)日：2011-04-20
申请号：CN201010272528.6
申请日：2010-09-06
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/867 , C12N15/113 , C12N15/87 , A61D19/02 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种肌肉生成抑制素基因敲除猪的制备方法。属于生物技术领域。在293Ft细胞中生产能表达靶向猪肌肉生成抑制素(myostatin)基因的shRNA的病毒颗粒，然后用生产出的这种慢病毒感染猪胎儿成纤维细胞，48小时后通过荧光定量PCR检测发现有效地抑制了细胞中Myostatin基因的表达。本发明慢病毒颗粒可以用于显微注射猪受精卵卵周隙，使病毒核酸整合到胚胎基因组并表达shRNA，经胚胎移植后可以生产Myostatin敲除转基因猪。该慢病毒颗粒还可以用于精子载体法制作转基因猪。可避开传统的同源打靶基因敲除的繁琐操作，病毒消耗少而且可稳定传代。
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公开(公告)号：CN101914524A
公开(公告)日：2010-12-15
申请号：CN201010235667.1
申请日：2010-07-23
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种从小RNA合成的cDNA文库分离出microRNA前体cDNA的方法，包括以下步骤：将cDNA进行PCR扩增；得到的cDNA片段用5’端带有生物素标记的引物进行PCR扩增，扩增后得到的cDNA双链进行变性处理，然后用磁珠技术进行cDNA双链分离；对分离得到的cDNA单链进行复性，形成具有具有不同二级结构的单链cDNA，分别回收，进行PCR反应形成双链；将PCR片段经限制酶酶切，克隆测序。本发明采用的测序方法能够更为有效地提高miRNA克隆测序的效率。
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