公开(公告)号：CN111549058A

公开(公告)日：2020-08-18

申请号：CN202010286443.7

申请日：2020-04-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 姜爱文 ,  刘红林 ,  陶景丽 ,  李荣阳 ,  张轩

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统在猪胎儿成纤维细胞中实现基因敲除的方法，包括下述步骤：构建Cas9/sgRNA真核表达载体；构建RGS-CR双荧光代替性报告载体；将Cas9/sgRNA真核表达载体和RGS-CR报告载体共转至293T细胞中，筛选最高效的sgRNA序列；将筛选出的Cas9/sgRNA质粒电转至猪胎儿成纤维细胞中，实现敲除。本发明的方法操作简单，可在猪体细胞上可实现高效的基因编辑。

公开(公告)号：CN111549058B

公开(公告)日：2023-04-25

申请号：CN202010286443.7

申请日：2020-04-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 姜爱文 ,  刘红林 ,  陶景丽 ,  李荣阳 ,  张轩

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统在猪胎儿成纤维细胞中实现基因敲除的方法，包括下述步骤：构建Cas9/sgRNA真核表达载体；构建RGS‑CR双荧光代替性报告载体；将Cas9/sgRNA真核表达载体和RGS‑CR报告载体共转至293T细胞中，筛选最高效的sgRNA序列；将筛选出的Cas9/sgRNA质粒电转至猪胎儿成纤维细胞中，实现敲除。本发明的方法操作简单，可在猪体细胞上可实现高效的基因编辑。

公开(公告)号：CN109917058A

公开(公告)日：2019-06-21

申请号：CN201910193809.3

申请日：2019-03-14

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴望军 ,  姜爱文 ,  刘红林 ,  董超 ,  张锡英

IPC: G01N30/74 ,  G01N30/06

Abstract: 本发明公开了一种细胞内四种游离脱氧核苷酸的高效液相测定方法，色谱条件为：InertSustain AQ-C18色谱柱；流动相A：40-60mM KH2PO4，pH5.0-6.0；流动相B：CH3OH；流速：1.0ml/min；波长：260nm；柱温：40℃；等梯度洗脱，A:B＝90:10。本发明的细胞内四种游离脱氧核苷酸的高效液相色谱测定方法，能有效分离细胞内四种游离的脱氧核苷酸，操作简单，重复性好，其测定的精密度满足细胞分析的要求。