公开(公告)号：CN111549058B

公开(公告)日：2023-04-25

申请号：CN202010286443.7

申请日：2020-04-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 姜爱文 ,  刘红林 ,  陶景丽 ,  李荣阳 ,  张轩

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统在猪胎儿成纤维细胞中实现基因敲除的方法，包括下述步骤：构建Cas9/sgRNA真核表达载体；构建RGS‑CR双荧光代替性报告载体；将Cas9/sgRNA真核表达载体和RGS‑CR报告载体共转至293T细胞中，筛选最高效的sgRNA序列；将筛选出的Cas9/sgRNA质粒电转至猪胎儿成纤维细胞中，实现敲除。本发明的方法操作简单，可在猪体细胞上可实现高效的基因编辑。

公开(公告)号：CN112176070B

公开(公告)日：2022-04-19

申请号：CN202010765498.6

申请日：2020-08-03

Applicant: 南京农业大学 ,  常州市枫华牧业有限公司

Inventor： 吴望军 ,  李荣阳 ,  张增凯 ,  刘红林 ,  黄小国

IPC: C12Q1/6888 ,  C12N15/11 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明公开了一种与猪肌内脂肪性状相关的UCP3基因、分子标记及其应用，该SNP分子标记为位于如SEQ ID NO：6所示序列的2159bp处的G/T突变，其基因组位置位于猪11.1版本第9号染色体从5’端起的8387309位点。本发明首先在279头试验猪群中利用FastTarget目标区域测序技术在该基因中鉴定了一个影响猪肌内脂肪含量的变异位点，并建立了针对该位点的PCR‑RsaI‑RFLP基因快速分型方法；在此基础上，本发明在500头试验猪群中对该位点提高肌内脂肪的应用效果进行了验证，结果表明通过该位点有利基因型的选择可显著提高猪群肌内脂肪含量，所鉴定的变异位点可用于种猪肌内脂肪的早期、活体、快速的标记辅助选育。

公开(公告)号：CN112176070A

公开(公告)日：2021-01-05

申请号：CN202010765498.6

申请日：2020-08-03

Applicant: 南京农业大学 ,  常州市枫华牧业有限公司

Inventor： 吴望军 ,  李荣阳 ,  张增凯 ,  刘红林 ,  黄小国

IPC: C12Q1/6888 ,  C12N15/11 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明公开了一种与猪肌内脂肪性状相关的UCP3基因、分子标记及其应用，该SNP分子标记为位于如SEQ ID NO：6所示序列的2159bp处的G/T突变，其基因组位置位于猪11.1版本第9号染色体从5’端起的8387309位点。本发明首先在279头试验猪群中利用FastTarget目标区域测序技术在该基因中鉴定了一个影响猪肌内脂肪含量的变异位点，并建立了针对该位点的PCR‑RsaI‑RFLP基因快速分型方法；在此基础上，本发明在500头试验猪群中对该位点提高肌内脂肪的应用效果进行了验证，结果表明通过该位点有利基因型的选择可显著提高猪群肌内脂肪含量，所鉴定的变异位点可用于种猪肌内脂肪的早期、活体、快速的标记辅助选育。

公开(公告)号：CN111549058A

公开(公告)日：2020-08-18

申请号：CN202010286443.7

申请日：2020-04-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 姜爱文 ,  刘红林 ,  陶景丽 ,  李荣阳 ,  张轩

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统在猪胎儿成纤维细胞中实现基因敲除的方法，包括下述步骤：构建Cas9/sgRNA真核表达载体；构建RGS-CR双荧光代替性报告载体；将Cas9/sgRNA真核表达载体和RGS-CR报告载体共转至293T细胞中，筛选最高效的sgRNA序列；将筛选出的Cas9/sgRNA质粒电转至猪胎儿成纤维细胞中，实现敲除。本发明的方法操作简单，可在猪体细胞上可实现高效的基因编辑。