公开(公告)号：CN102021201A

公开(公告)日：2011-04-20

申请号：CN201010272528.6

申请日：2010-09-06

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘红林 ,  邹晓龙 ,  姜保春

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/113 ,  C12N15/87 ,  A61D19/02 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种肌肉生成抑制素基因敲除猪的制备方法。属于生物技术领域。在293Ft细胞中生产能表达靶向猪肌肉生成抑制素(myostatin)基因的shRNA的病毒颗粒，然后用生产出的这种慢病毒感染猪胎儿成纤维细胞，48小时后通过荧光定量PCR检测发现有效地抑制了细胞中Myostatin基因的表达。本发明慢病毒颗粒可以用于显微注射猪受精卵卵周隙，使病毒核酸整合到胚胎基因组并表达shRNA，经胚胎移植后可以生产Myostatin敲除转基因猪。该慢病毒颗粒还可以用于精子载体法制作转基因猪。可避开传统的同源打靶基因敲除的繁琐操作，病毒消耗少而且可稳定传代。

公开(公告)号：CN102041272A

公开(公告)日：2011-05-04

申请号：CN201010247916.9

申请日：2010-08-06

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 刘红林 ,  姜保春 ,  邹晓龙

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/66 ,  C12N7/01

Abstract: 本发明公开了慢病毒介导的猪生长激素单质粒诱导表达系统，可用来制备转基因猪，属于基因工程领域。猪生长激素(pGH)具有刺激骨及软骨组织生长、调节蛋白质、脂类和糖类代谢的功能，能显著提高猪的生长速度、瘦肉率和饲料报酬，但以往的转生长激素基因动物G H在体内表达量和表达时间不受调控，结果导致很多生理性的疾病，得不偿失。本发明首先构建了强力霉素调控的pGH双质粒诱导表达系统，其次将双质粒改造为单质粒诱导表达系统，调控猪GH定时定量表达，在转基因动物中首次报道，其次将单质粒诱导表达系统中调控表达的DNA功能片段插入慢病毒载体，采用慢病毒介导该外源基因进入动物细胞，提高了转基因效率。mRNA分析表明该系统可以使猪的GH基因实现严密的诱导表达。