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公开(公告)号:CN119242450A
公开(公告)日:2025-01-03
申请号:CN202410810093.8
申请日:2024-06-21
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N1/14 , C12N13/00 , C12N15/04 , C12N1/02 , C12Q1/6895 , C12Q1/6869 , C12Q1/04 , C12R1/885
Abstract: 本发明公开了一种无性繁殖类丝状真菌新功能基因的挖掘方法及其应用,涉及应用微生物技术领域,保藏编号:CGMCC No.12166;保藏单位:中国普通微生物菌种保藏管理中心;保藏日期:2016年4月11日。本发明公开了一种无性繁殖类丝状真菌新功能基因的挖掘方法:S1、构建脲苷合成缺陷型但具有潮霉素抗性的木霉菌株A;S2、获取随机突变株B;S3、通过原生质体融合方法构建暂时性拟似“二倍体”;S4、通过核内的两套染色体通过同源重组进行随机突变子染色体基因随机回补,并通过表型变化筛选获得表型回补突变子;S5、利用重测序技术确定回补的关键突变位点并通过基因编辑方法反向验证基因功能。本发明方法给研究无性繁殖类丝状真菌的功能基因提供了新的方法。
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公开(公告)号:CN114181958B
公开(公告)日:2023-06-09
申请号:CN202110775430.0
申请日:2021-07-08
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种α‑淀粉酶基因amy1及其编码的蛋白与应用。首先以堆肥样品为原料提取总RNA,再通过反转录获取α‑淀粉酶基因amy1的cDNA;以cDNA为模板,利用PCR扩增法获得的amy1基因的完整序列;接着采用双酶切和酶连方法,将完整的amy1基因插入到pPICZαA表达载体上,获得重组表达质粒pPICZαA‑amy1;然后采用电击转化法将重组表达质粒pPICZαA‑amy1转化到毕赤酵母感受态中,筛选高效的工程菌转化子;最后工程菌经过液体发酵培养基诱导培养后,分泌α‑淀粉酶AMY1。酶学结果分析表明:温度在40℃时,AMY1水解可溶性淀粉每分钟产生的还原糖含量为0.55μg/mL,在pH6‑8时,AMY1水解可溶性淀粉每分钟可产生的还原糖含量最高值为0.78μg/mL。本发明为农业废弃物的资源化利用、生态农业的发展提供了理论基础和技术保障。
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公开(公告)号:CN111363684B
公开(公告)日:2020-12-15
申请号:CN201910877067.6
申请日:2019-09-17
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供一种木质纤维高效降解复合菌剂及其在堆肥中的应用。本发明目的在于进一步提高畜禽养殖粪污和秸秆类废弃物的堆肥效果,开发出一种含有米黑根毛霉菌NJAU‑F4‑5,芽孢杆菌NJAU‑N20和芽孢杆菌NJAU‑N30的复合菌剂,为畜禽养殖粪污和秸秆类废弃物高效堆肥提供复合菌资源及技术支撑。所述的复合菌剂的应用为其加速堆肥发酵。步骤如下:将畜禽粪污与秸秆按照一定C/N混匀后接种液体复合菌剂,砌成条垛后,采用条垛式发酵工艺,翻抛发酵。相比于对照不添加菌种和添加单菌处理,复合菌剂的添加有效促进了堆肥初期堆体温度的升高,促使堆体提前进入降温期,促进堆肥产品发芽指数的提高,有效驱动了堆肥腐熟。
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公开(公告)号:CN109234245A
公开(公告)日:2019-01-18
申请号:CN201811105086.9
申请日:2018-09-21
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种吲哚乙醛脱氢酶基因ald2及其过表达方法和应用。一种哈茨木霉NJAU4742中IAA生物合成的关键基因吲哚乙醛脱氢酶基因ald2,核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。含有吲哚乙醛脱氢酶基因ald2的过表达方法。吲哚乙醛脱氢酶基因ald2及其过表达片段在构建IAA产量显著提高的哈茨木霉NJAU4742基因工程菌中的应用。本发明最新发现的哈茨木霉NJAU4742中ald2基因在IAA合成过程中具有重要的作用,基因的超表达后均能显著增加植物主根系根毛区中柱鞘位置的IAA含量。本发明为新型木霉生物有机肥的研制、生态农业的发展提供了理论基础和技术保障。
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公开(公告)号:CN108164302A
公开(公告)日:2018-06-15
申请号:CN201810011113.X
申请日:2018-01-05
Applicant: 南京农业大学
IPC: C05F17/02
Abstract: 本发明公开了滚筒式微生物有机肥二次固体发酵工艺及设备。一种二次固体发酵制备微生物有机肥的方法,包括先向堆肥物料中加入酸解氨基酸溶液,在70±5℃进行搅拌中和反应24‑40小时;反应结束时物料中土著微生物含量控制在106个/克以下;向中和后的堆肥中接入功能菌种子液,进行二次固体发酵;温度为35±5℃,时间为48‑75小时。本发明使用自制特殊设备将功能菌添加后进行二次固体发酵,以促进和提高生物有机肥料产品中功能菌与有机载体的磨合程度、增加功能菌含量稳定性、提高生物有机肥料进入土壤后定殖效果,最终促进产品的田间生物效果。
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公开(公告)号:CN107084867B
公开(公告)日:2018-05-25
申请号:CN201710261618.7
申请日:2017-04-20
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N1/28
Abstract: 本发明公开了一种丝状真菌固体发酵产物总蛋白的提取方法。本方法的技术核心是结合玻璃珠机械破壁与细胞破碎缓冲液(SI)的方法,来破坏丝状真菌厚实坚韧的细胞壁并释放出胞内总蛋白,并在提取缓冲液(SII)和蛋白酶抑制剂的保护下提取到高质量的木霉固体发酵产物总蛋白。本发明采用了一种简单易行的方法,克服了丝状真菌细胞壁厚实坚韧、胞内蛋白难以释放,固体发酵物中高有机质和腐殖酸类物质的干扰,结合半透膜透析法可以直接从木霉固体发酵产物中提取到高质量的总蛋白,为固体发酵过程中丝状真菌蛋白质组学的研究提供技术保障。
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公开(公告)号:CN106566845A
公开(公告)日:2017-04-19
申请号:CN201610990205.8
申请日:2016-11-10
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12P1/04 , C05C11/00 , C05G3/00 , C05G3/0064 , C12R1/01
Abstract: 本发明公开了一种霍氏肠杆菌生产的生物表面活性剂及其应用。利用霍氏肠杆菌Enterobacter hormaechei生产了生物表活性剂,对配方及生产条件进行了深入探索。对碳源、氮源的加入量进行了改良,并对生产发酵条件进行了改良,使得表面活性剂产量每升达到了2g以上。创新性的将生物表面活性剂与废弃畜禽氨基酸水解液进行伍配,使产物成分不流失,且避免了提纯工作。
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公开(公告)号:CN106244614A
公开(公告)日:2016-12-21
申请号:CN201610695491.5
申请日:2016-08-20
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开一株强寄生广谱病原真菌的哈茨木霉工程菌株的构建及其应用,本发明首次发现了Nox1介导的H2O2是SQR-T037重寄生病原真菌过程中的重要抑菌成分,研究表明,敲除基因nox1,突变子失去重寄生核盘菌、尖孢镰刀菌和齐整小菌核;构建互补表达nox1突变子,恢复野生型所具有的重寄生能力。确实Nox1直接调控SQR-T037重寄生病原真菌。构建过量表达nox1的工程菌,增加菌丝表面H2O2的浓度,显著提高重寄生灰霉病菌、交链格孢菌、尖孢镰刀菌、核盘菌、立枯丝核菌和齐整小菌核的能力。本发明可有效解决以木霉为主的微生物制剂及相关生物肥料应用中功能菌抑制病害发生和田间应用效果不稳定的问题。
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公开(公告)号:CN103332972A
公开(公告)日:2013-10-02
申请号:CN201310081095.X
申请日:2013-03-14
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: Y02W30/43
Abstract: 本发明涉及一种利用膨化鸡毛作为替代蛋白生产香蕉专用促生生物有机肥的配方、工艺及产品,属于农业集约化生产技术。将三种原料按照膨化鸡毛10%和菜粕堆肥10%和猪粪堆肥80%混合,再按5%(质量比)接入含菌量为1×108CFU/g以上的NJN-6发酵液,充分混匀后建堆,进行条剁式固体发酵,每天翻堆1次,以便提供充足的氧气和维持不超过50℃,发酵7-9天结束。所生产的专用生物有机肥中NJN-6的数量不低于1×108CFU/g,全氮含量为2~4%(其中90%以上为有机氮),总氮磷钾养分为4~7%、有机质含量≥45%。试验结果表明,将鸡毛经膨化后与菜粕堆肥以及猪粪堆肥混合起来进行二次发酵制作香蕉专用促生生物有机肥,富含大量的有益氨基酸,其总体效果较好,节约成本32%。
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公开(公告)号:CN116287006A
公开(公告)日:2023-06-23
申请号:CN202310159760.6
申请日:2023-02-24
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开一种利用秸秆制备植物高效促生剂的方法及其应用。所述的方法包括利用膨胀蛋白TgS或膨胀蛋白TgS协同纤维素酶在0.1MNaAC‑HAC缓冲液中50‑60℃下处理秸秆45‑50h,将反应过后的固液混合物通过固液分离机进行分离,固体部分为未分解的秸秆,暗棕色液体为植物促生剂提取液;其中,所述的膨胀蛋白TgS的编码序列如SEQ ID NO.1所示。发明人利用此植物促生剂在经济作物黄瓜上测试了促生效果,结果表明施用此植物促生剂后,黄瓜根际侧根显著增多,黄瓜生物量提高,促生效果明显。
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