一株重组的枯草芽孢杆菌及由其生产转谷氨酰胺酶的方法

    公开(公告)号:CN102586167B

    公开(公告)日:2013-07-24

    申请号:CN201210052578.2

    申请日:2012-03-01

    Abstract: 本发明公开了一株重组的枯草芽孢杆菌及由其生产转谷氨酰胺酶的方法,该重组菌株由以下步骤构建得到:(1)通过融合PCR将P43启动子+信号肽基因与subtilisin-like protease基因连接,再将融合PCR扩增产物转化入枯草芽孢杆菌WB800,得到枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S;(2)PCR扩增茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因,然后将扩增产物转化入枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S中得到枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG。将枯草芽孢杆菌B.subtilisWB800S/proMTG发酵、纯化,得到可溶性的转谷氨酰胺酶。本发明方法可以在发酵液上清中直接获得具有生物活性的转谷氨酰胺酶,省去了繁琐的细胞破碎、纯化后激活酶原等过程,简化了发酵生产工艺。

    粉末状纤维素酶固体制剂的制备方法

    公开(公告)号:CN101289660A

    公开(公告)日:2008-10-22

    申请号:CN200810027167.1

    申请日:2008-04-01

    Abstract: 本发明涉及一种粉末状纤维素酶固体制剂的制备方法,其中先取酶活为6000-11000单位/mL、固型含量为13%-19%的纤维素酶浓缩液,在前述的纤维素酶浓缩液中加入质量比为5-15%的硫酸钠或氯化钠,再经雾化器雾化成细小的雾滴,然后在干燥塔内与经高效过滤的热空气接触,该干燥塔内的进风温度控制在110-125℃,出风温度控制在60℃左右,如此迅速蒸发溶剂并形成细粉,经分离系统后得到酶活≥25000单位/g、总酶活保存率在90%以上,从而获取品质优良的纤维素酶粉末状产品,并且工艺简单,可形成大批量低成本、低劳动强度的粉末状纤维素酶连续生产线。

    一种基于中生菌素抗性的重组丝状真菌转化子筛选方法

    公开(公告)号:CN120026043A

    公开(公告)日:2025-05-23

    申请号:CN202510041565.2

    申请日:2025-01-10

    Inventor: 潘力 毕付提

    Abstract: 本发明公开一种基于中生菌素抗性的重组丝状真菌转化子筛选方法。本发明将中生菌素作为筛选丝状真菌基因改造转化子的压力来源,利用nat基因作为中生菌素抗性基因,可以低背景,高效整合外源DNA到丝状真菌基因组。基于中生菌素抗性的转化子筛选,转化效率不低于常用标记,且遗传背景远低于潮霉素等丝状真菌常用抗生素。本发明为丝状真菌的理性改造增加一种高效的筛选标记,可在同一野生型菌株中使用包括中生菌素、潮霉素等在内的多种抗生素进行多个筛选,极大降低菌株的基因连续改造难度,丰富了丝状真菌合成生物学底盘的连续遗传改造方式,为构建工业丝状真菌微生物细胞工厂拓展了思路,并对其他丝状真菌高通量筛选具有重要参考价值。

    一种紫红链霉菌磷脂酶A2突变体及其制备方法

    公开(公告)号:CN118726306B

    公开(公告)日:2025-03-14

    申请号:CN202410871496.3

    申请日:2024-07-01

    Inventor: 潘力 刘钊远 王斌

    Abstract: 本发明公开一种紫红链霉菌磷脂酶A2突变体及其制备方法,属于生物技术领域。本发明共获得了6个单位点突变的突变体及5个组合突变体;相较于野生型,突变体N21E,Q47K,F53H,Y68H,I84L,Q116M,N21E/I84L,Q47K/I84L,I84L/Q116M,N21E/I84L/Q116M和Q47K/I84L/Q116M的酶活力均有所提高,分别提升了32.3%,20.2%,27.9%,20.5%,69.7%,60.5%,106.6%,92.9%,213.2%,406.5%,304.3%。本发明获得的磷脂酶A2突变体酶活力得到显著提高,具有较大的工业应用潜力和经济价值。

    一种适合重组丝状真菌高通量筛选的培养方法

    公开(公告)号:CN117965416B

    公开(公告)日:2024-10-11

    申请号:CN202410143241.5

    申请日:2024-02-01

    Inventor: 潘力 毕付提

    Abstract: 本发明公开一种适合重组丝状真菌高通量筛选的培养方法,涉及生物工程技术领域。本发明将带有自主复制序列的外源蛋白表达载体转化到丝状真菌新鲜原生质体中。在液体培养基中培养转化的原生质体,在抑制原生质体萌发的同时使外源蛋白基因瞬时表达,之后可以借助流式细胞仪等仪器高通量筛选转化子。本发明的方法可以明显缩短丝状真菌原生质体转化周期,简化操作流程,提高丝状真菌转化成功率和筛选效率,为构建工业丝状真菌微生物细胞工厂拓展了思路,并对其他丝状真菌理性高通量筛选具有重要参考价值。

    一种高效表达及纯化Cas9蛋白的方法和应用

    公开(公告)号:CN114410608B

    公开(公告)日:2023-08-22

    申请号:CN202210054940.3

    申请日:2022-01-18

    Inventor: 潘力 廖清 王斌

    Abstract: 本发明公开一种高效表达及纯化Cas9蛋白的方法和应用。本发明主要包括Cas9表达载体的构建,大肠杆菌的转化,Cas9蛋白的诱导表达,Cas9蛋白的纯化,以及体内体外的应用。使用GB1作为促溶标签,可增加SpCas9的稳定性及溶解性,初步提高SpCas9的表达量,且GB1不影响SpCas9的功能,后续不需去除,简便可行。再通过使用10×His标记,有助于融合蛋白与Ni‑NTA树脂的高亲和力,并有助于高盐洗去除污染的核酸,提高纯化效果。使用串联T7启动子,明显提高SpCas9的表达量。通过体内外应用,证明了所纯化得到的SpCas9‑GB1蛋白正确折叠,具有切割DNA的能力,且可入核进行基因编辑。

    激酶基因在调控丝状真菌菌丝形态中的应用

    公开(公告)号:CN115820746A

    公开(公告)日:2023-03-21

    申请号:CN202211388724.9

    申请日:2022-11-08

    Inventor: 潘力 喻乐意 王斌

    Abstract: 本发明公开了激酶基因在调控丝状真菌菌丝形态中的应用。本发明首次在丝状真菌中构建RNP基因编辑体系,构建的RNP体系可以编辑黑曲霉的基因,该方法免去构建重组载体的繁琐程序,操作简单,可以用于黑曲霉的基因编辑。结合RNP体系进行基因编辑发现,敲除MpkA基因时,黑曲霉菌落较小,生长缓慢,菌丝呈现短杆状,基本无分支。同时,黑曲霉MpkA基因被敲除时,可以促进其蛋白的分泌量。本发明在丝状真菌的遗传操作以及高通量技术的应用提供了良好的材料以及理论依据,为丝状真菌在工业酶制剂领域的发展提供了研究思路。

    一种多级孔炭材料及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN113663640A

    公开(公告)日:2021-11-19

    申请号:CN202110962579.X

    申请日:2021-08-20

    Inventor: 潘力 喻乐意 李星

    Abstract: 本发明公开一种多级孔炭材料及其制备方法和应用,涉及生物质炭吸附剂制备的技术领域。本发明将啤酒糟作为底物,运用黑曲霉产酶的特点,对啤酒糟进行微生物预处理,得到比表面积最高达1689m2/g,以及具备多级孔结构的炭材料。该炭材料具备高比表面积,以及微孔、介孔、大孔多孔径结构的特征,可有效提高炭材料的吸附性能。同时,该炭材料对甲苯具有很好的吸附性能,最高吸附量为0.399g/g。本发明中的底物啤酒糟和黑曲霉均为无毒无害的前体物质,制备工艺简单,绿色环保,成本低廉,可实现工业化;可广泛应用于吸附领域,也可应用于环保、催化、医药等其他领域;在吸附剂的开发以及空气的净化领域具有较大的应用前景。

    一种可用于提高分泌效率的信号肽及其应用

    公开(公告)号:CN107857801B

    公开(公告)日:2020-09-22

    申请号:CN201710990135.0

    申请日:2017-10-23

    Abstract: 本发明公开了一种可用于提高分泌效率的信号肽及其应用。该信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码该信号肽的核苷酸序列选自如下任一序列:(a)如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或者其互补序列;(b)对SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的,具有与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列相同的作为信号肽功能的核苷酸序列或者其互补序列。本发明提供了一种具有很强的分泌表达活性的信号肽,能实现外源基因的高表达,为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的元件。

    一种具有启动子功能的DNA片段及其应用

    公开(公告)号:CN106480036B

    公开(公告)日:2019-04-09

    申请号:CN201611083079.4

    申请日:2016-11-30

    Inventor: 潘力 董宏智

    Abstract: 本发明公开了一种具有启动子功能的DNA片段及其应用。该DNA片段为为如下任一序列:(a)如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或者其互补序列;(b)对如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的,具有与如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列相同的作为启动子功能的核苷酸序列或者其互补序列。该DNA片段具有启动子的功能,有很强的特异表达活性,在不需要添加诱导物的条件下即能实现CRISPR‑Cas9系统中gRNA的表达,使得黑曲霉来源的U6启动子可以在黑曲霉自身的CRISPR‑Cas9系统中运用。

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