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公开(公告)号：CN108203714B
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN201611188402.4
申请日：2016-12-20
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/82 , C12N15/66 , C12N15/113
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种棉花基因的编辑方法。公开了用于棉花基因组编辑的CRISPR‑Cas9系统及其构建方法。本发明克隆得到两个陆地棉U6启动子pGhU6‑7和pGhU6‑9，并突变了Bsa Ⅰ酶切位点。利用优化后的启动子构建了在棉花中具有编辑能力的CRISPR‑Cas9载体的两个载体pRGEB32‑GhU6.7‑NPT Ⅱ、pRGEB32‑GhU6.9‑NPT Ⅱ。选取1个棉花内源基因GhCLA为目标基因，设计四个靶向该基因的sgRNA，引导Cas9蛋白在GhCLA的特异位点进行切割。通过棉花的白化表型、酶切图、测序验证，表明pGhU6‑7I和pGhU6‑9I驱动的CRISPR‑Cas9基因编辑系统在棉花内具有编辑能力。
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公开(公告)号：CN102485897B
公开(公告)日：2014-12-10
申请号：CN201010582448.0
申请日：2010-12-06
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/29
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域。具体涉及一种分离、克隆的GbF3H基因，功能验证表明该基因是一种能够改变棉花花瓣颜色的功能基因，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，它编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，编码368个氨基酸。所述的基因GbF3H与植物类黄酮代谢及花青素的合成相关。通过RNAi抑制该基因的表达可以显著减少棉花花瓣的花青素含量，使花色变淡；而超量表达该基因可以提高棉花花瓣的花青素含量。利用本发明克隆的通过转化可能改变植物花瓣的颜色，也可以应用于花卉颜色的改良，同时有望开发出花色相关的分子标记。
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公开(公告)号：CN102485894B
公开(公告)日：2013-10-23
申请号：CN201010582387.8
申请日：2010-12-06
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/82
Abstract: 本发明涉及植物基因工程领域。特征是：克隆鉴定了海岛棉GbEXPA1和GbEXPATR基因的启动子。其启动子的核苷酸序列如序列表1和序列表2所示。这两个启动子在棉花中是纤维特异/优势表达启动子。将启动子PGbEXPA1和PGbEXPATR DNA序列分别与GUS基因融合构建的植物表达载体经农杆菌介导的遗传转化方法转化棉花，获得转基因植株经染色鉴定，GUS基因在棉花纤维中优势表达。这两个启动子表达模式基本一致，但有微弱差异。通过一系列截短启动子序列与GUS融合，转基因棉花验证结果表明-461bp～-1bp的序列是该启动子PGbEXPA1的核心序列。本发明还公开了含有启动子PGbEXPA1的重组表达载体，该重组表达载体可应用于培育在植物根中特异表达目的基因的转基因植株。
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公开(公告)号：CN115725601B
公开(公告)日：2024-07-02
申请号：CN202211086626.X
申请日：2022-09-07
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/60
Abstract: 本发明提供了一种棉花细胞色素基因GhCB5b及应用，涉及植物基因工程技术领域。本发明所述基因GhCB5b，与拟南芥AtCB5b高度同源。经实施例验证，在棉花超表达GhCB5b材料中，成熟纤维变长，强度提高，马克隆值降低；敲除GhCB5b基因后，则会抑制棉纤维伸长，强度和马克隆值没有显著变化。因此本发明所述基因GhCB5b可以改良纤维品质，具有广泛的应用价值，并为揭示GhCB5b在棉花纤维中可能的作用机制提供重要的指导思路。
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公开(公告)号：CN115725601A
公开(公告)日：2023-03-03
申请号：CN202211086626.X
申请日：2022-09-07
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/60
Abstract: 本发明提供了一种棉花细胞色素基因GhCB5b及应用，涉及植物基因工程技术领域。本发明所述基因GhCB5b，与拟南芥AtCB5b高度同源。经实施例验证，在棉花超表达GhCB5b材料中，成熟纤维变长，强度提高，马克隆值降低；敲除GhCB5b基因后，则会抑制棉纤维伸长，强度和马克隆值没有显著变化。因此本发明所述基因GhCB5b可以改良纤维品质，具有广泛的应用价值，并为揭示GhCB5b在棉花纤维中可能的作用机制提供重要的指导思路。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106801065B
公开(公告)日：2021-01-26
申请号：CN201510833618.0
申请日：2015-11-25
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种提高棉花再生及转化效率的方法及应用。通过再生能力比较筛选获得农艺性状优良的棉花转基因受体材料Y668，以Y668为受体转GFP基因获得的分离群体T1代中的阴性单株Null为组织培养受体材料，经过连续两次的体细胞再生获得R2群体，最后经过典型单株选择、自交获得再生能力比亲本提高3倍的转化受体材料Jin 668。本发明还公开了Jin 668在棉花转基因中的应用。以本发明培育的Jin668作为转基因受体材料,将多个抗虫、提高油份的基因导入棉花宿主细胞，得到表达外源基因的转基因棉花植株。
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公开(公告)号：CN103789325B
公开(公告)日：2016-02-17
申请号：CN201410073300.2
申请日：2014-02-28
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/82
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一个分离克隆自棉花的细胞壁伸展蛋白基因GbEXPATR及应用。本发明从海岛棉纤维不同发育时期的cDNA文库中获得海岛棉纤维特异表达的缺少第二个结构域的细胞壁伸展蛋白基因GbEXPATR，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，其中52-306为碱基所示的区域是编码区，它特异地在海岛棉纤维伸长期、转换期及次生壁合成初期高效表达。将获得的全长ORF构建到植物超量表达载体pCAMBIA2301m上，用农杆菌介导的遗传转化方法转化陆地棉，对转基因后代的纤维品质进行分析，发现它能够有效促进纤维的伸长；马克隆值降低；使纤维从C2级上升到B2级；断裂比强度的升高。利用本发明可以有效改良棉花纤维品质。
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公开(公告)号：CN102485893B
公开(公告)日：2014-01-22
申请号：CN201010582335.0
申请日：2010-12-06
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/82
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域。公开了两个在棉花纤维起始期优势、高效表达的启动子PGbPDF1-1和PGbPDF1-2及其应用。这两个启动子的核酸序列如序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。所述启动子在棉花纤维发育起始阶段为表达高峰。通过一系列截短启动子序列与GUS融合，转基因棉花验证结果表明翻译起始密码子到其上游236bp的序列是这两个启动子的核心序列。本发明还公开了利用所述启动子所构建的表达盒的结构以及其在培育改良棉花中的应用。
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公开(公告)号：CN101020924A
公开(公告)日：2007-08-22
申请号：CN200610166552.5
申请日：2006-12-30
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于棉花育种领域，涉及一种海岛棉EST－SSR引物序列的制备技术及应用，利用这些引物进行棉花遗传多样性的评价、分子遗传连锁构建和棉花重要性状的QTL定位。步骤包括：1)建立海岛棉品系Pima3－79纤维发育的cDNA文库，从单一序列中挑出占其中富含二、三、四、五或六核苷酸重复且长度≥10碱基的EST；2)设计SSR侧翼引物；3)从田间取基因型为AA、DD和AADD的棉种材料和亲本鄂棉22、Pima3－79以及BC1群体植株的嫩绿叶片提取其总DNA；4)用设计的SSR引物扩增步骤3)所示的材料和群体；5)计算每对引物的多态性信息含量，并对步骤3)所示的基因型棉种材料作聚类和主坐标分析；6)将BC1作图群体扩增的EST－SSR整合到种间遗传连锁图谱相应的连锁群上，并作棉花重要性状的QTL定位。结果显示，位于连锁群15的引物HAU033与籽指性状连锁，位于连锁群29的引物HAU100与单株铃数性状连锁；分别贡献了表型变异的7.41％和5.95％。
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公开(公告)号：CN1300166C
公开(公告)日：2007-02-14
申请号：CN200410060637.6
申请日：2004-07-27
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于棉花分子生物学中RNA抽提技术领域。公开了一种新的利用硫氰酸胍-氯仿抽提、酚纯化棉花RNA的抽提方法。针对棉花的酚类、多糖类等和次生代谢物质对抽提纯化高质量RNA样品的影响，制备了新的裂解液和抽提工艺。利用高浓度的硫氰酸胍裂解细胞同时抑制细胞内源核酸酶的活性。该裂解液中含有聚乙烯吡咯烷酮4000和β-巯基乙醇，用于抑制棉花中多酚类物质的氧化。利用氯仿抽提以除去部分多糖，多酚和蛋白质。将粗提物用裂解液溶解后利用水饱和酚以更有效地去除多糖和蛋白质。本发明具有经济、快速、稳定的特点，抽提的RNA样品质量较高。
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