公开(公告)号：CN101852808A

公开(公告)日：2010-10-06

申请号：CN201010175088.2

申请日：2010-05-18

Applicant: 中国医学科学院生物医学工程研究所

Inventor： 冷希岗 ,  周波 ,  宋丽萍 ,  朱敦皖 ,  吕丰 ,  刘兰霞 ,  董霞 ,  张海玲

IPC: G01N33/577 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了应用生物条码与基因芯片检测蛋白浓度的方法，步骤：(1)分别设计合成基因芯片用探针和扫描用生物条码；(2)用待测蛋白抗原的单克隆抗体修饰磁性微球；(3)用待测蛋白抗原的多克隆抗体与扫描用生物条码标记纳米金；(4)基因芯片制备；(5)将步骤(2)的产物与待测蛋白抗原混合并结合；(6)将步骤(5)的产物与步骤(3)的产物混合并结合；磁性分离，除去未与步骤(5)的产物结合的步骤(3)的产物部分；(7)将三(2-羧乙基)膦盐酸盐的水溶液加入步骤(6)的产物中，磁性分离，分离出上清液；(8)将上清液与基因芯片进行杂交并检测。实验证实其本发明方法的可行性、特异性及高通量。其灵敏度可达fM水平。

公开(公告)号：CN101509010A

公开(公告)日：2009-08-19

申请号：CN200910068252.7

申请日：2009-03-26

Applicant: 中国医学科学院生物医学工程研究所

Inventor： 冷希岗 ,  徐伟杰 ,  朱筠 ,  董霞 ,  宋丽萍

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明公开了包括人类组织因子途径抑制因子的重组质粒及高表达人类组织因子途径抑制因子重组酵母菌，包括人类组织因子途径抑制因子的重组质粒，是以序列表SEQ IDNo.2、SEQ ID No.3所述序列为PCR引物，mTFPI－pPIC9为模板，扩增出人类组织因子途径抑制因子基因阅读框架，回收得序列表SEQ ID No.1所述的核苷酸序列，与pPIC9K加入T4连接酶进行反应，制成包括人类组织因子途径抑制因子的重组质粒。本发明应用剂量效应原理，运用抗生素G418抗性，筛选出高表达人类组织因子途径抑制因子重组酵母菌。经高密度发酵，使菌种表达人类组织因子途径抑制因子量大大提高。

公开(公告)号：CN100451116C

公开(公告)日：2009-01-14

申请号：CN200610015651.3

申请日：2006-09-14

Applicant: 中国医学科学院生物医学工程研究所

Inventor： 冷希岗 ,  罗师平 ,  宋丽萍 ,  刘兰霞 ,  余波

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/63 ,  C12N15/67 ,  C12N15/81 ,  C07K14/435

Abstract: 本发明公开了一种人类组织因子途径抑制因子突变基因mTFPI、包括该基因的重组载体及其宿主细胞，实验证明，与野生型TFPI基因在毕赤酵母中表达的重组蛋白量相比，本发明的TFPI突变基因mTFPI在毕赤酵母中所表达的重组蛋白量有较大提高，从而可以大大降低大规模发酵培养获得该重组蛋白的生产成本。

公开(公告)号：CN1920031A

公开(公告)日：2007-02-28

申请号：CN200610015653.2

申请日：2006-09-14

Applicant: 中国医学科学院生物医学工程研究所

Inventor： 冷希岗 ,  余波 ,  刘兰霞 ,  宋丽萍 ,  张海玲

IPC: C12N15/12 ,  C07K14/435 ,  C12N15/63 ,  C12N15/81

Abstract: 本发明公开了一种人类组织因子途径抑制因子突变基因m1TFPI、包括该基因的重组载体及重组酵母菌，人类组织因子途径抑制因子突变基因m1TFPI具有序列表中SEQ IDNo.1所述的核苷酸序列，包括该基因的重组载体是将人类组织因子途径抑制因子突变基因m1TFPI DNA用XhoI和EcoRI消化的片段与pPIC9载体，加入T4连接酶，进行连接反应，制成m1TFPI－pPIC9，在本发明完成的基础上，可以延长TFPI重组蛋白在血循环中的代谢时间，同时，尽量保持其生物学特性，如：抗凝血活性，与肝素的结合能力等，从而可以大大减少TFPI的给药次数，降低治疗费用，促进TFPI重组蛋白在临床上的应用。

公开(公告)号：CN101857877A

公开(公告)日：2010-10-13

申请号：CN201010159669.7

申请日：2010-04-29

Applicant: 中国医学科学院生物医学工程研究所

Inventor： 冷希岗 ,  王海燕 ,  宋丽萍 ,  朱敦皖 ,  刘兰霞 ,  董霞 ,  张海玲

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了含TFPI基因与GFP基因双顺反子的逆转录病毒真核表达载体及构建方法及应用，含TFPI基因与GFP基因双顺反子的逆转录病毒真核表达载体用下述方法制成：以序列表SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所述序列为引物，pIRES-TFPI为模板，扩增出以序列表SEQ ID NO.1所示的人类组织因子途径抑制因子基因的全长cDNA，将其插入到逆转录病毒载体pMSCV-IRES-GFP中，获得pMSCV-TFPI-IRES-GFP重组质粒，实现了TFPI和绿色荧光蛋白在EPCs内的非融合表达，两种蛋白之间功能互不干扰。在正常发挥TFPI生物学功能的同时，GFP的表达可作为转基因细胞的有效示踪手段，为研究携带TFPI基因的EPCs在体内的组织定位及分化情况提供了极大便利。