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公开(公告)号:CN104231071B
公开(公告)日:2017-10-24
申请号:CN201410317401.X
申请日:2014-07-04
Applicant: 东北农业大学
IPC: C07K14/705 , C12N15/12 , C12N5/20 , C07K16/28 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了鹅CD3ε链胞外区单克隆抗体及其在检测鹅CD3+T淋巴细胞中的应用。以鹅胸腺cDNA为模板扩增得到鹅CD3ε基因,根据GoCD3ε胞外区基因特点,设计1对特异性引物扩增得到鹅CD3ε胞外区基因(CD3εex),采用大肠杆菌表达鹅CD3εex。以含有CD3εex的重组质粒为免疫原,免疫BALB/c小鼠,重组蛋白rGoCD3ε加强免疫,获得1株稳定分泌鹅CD3ε链胞外区单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3C11)。该单克隆抗体能与纯化的重组蛋白rGoCD3反应,同时能够与分离的鹅外周血淋巴细胞发生特异性反应。因此,本发明的提出为检测鹅中CD3+T淋巴细胞提供了一种新的、有效的技术手段。
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公开(公告)号:CN101696453A
公开(公告)日:2010-04-21
申请号:CN200910073126.0
申请日:2009-11-02
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 检测牛病毒性腹泻病毒的方法逆转录环介导等温扩增反应试剂盒的制备及其使用方法,它涉及反应试剂盒的制备及其使用方法。它解决了现有检测牛病毒性腹泻病毒的方法存在成本昂贵,需要专业设备及专业人员参与检测且不适于现阶段中国畜牧业发展状况的问题。方法:首先设计引物,然后配制逆转录环介导等温扩增反应液,即完成。使用方法:取含牛病毒性腹泻病毒样品的RNA提取物,加入反应液,混合后进行逆转录环介导等温扩增反应,再离心检测;或加入10000×SYBR GREEN I,然后置于紫外灯下检测;或进行电泳检测;或采用Real-time PCR仪进行保温反应检测。本发明反应试剂盒的检测方便,无需昂贵仪器,降低成本。
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公开(公告)号:CN101302512A
公开(公告)日:2008-11-12
申请号:CN200810064840.9
申请日:2008-07-02
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 鉴别诊断口蹄疫的表位抗原的基因序列,它涉及了鉴别诊断口蹄疫的抗原的基因序列。本发明解决了现有的口蹄疫鉴别抗原会出现非特异性反应,造成检出假阳性的问题。本发明的鉴别诊断口蹄疫的表位抗原的基因序列长度分别为72bp、177bp、351bp、525bp和699bp。本发明的基因序列表达的蛋白克服了大分子量重组蛋白出现非特异性反应,造成检出假阳性的问题。
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公开(公告)号:CN1648665A
公开(公告)日:2005-08-03
申请号:CN200410043811.6
申请日:2004-08-18
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/531 , C12Q1/68 , C07K16/08 , C07K14/005
Abstract: 本发明提供的是一种检测鹅细小病毒抗体的重组原核表达蛋白抗原及其制备方法。本产品制备过程包括:(1)设计扩增GPV-VP3基因的特异性引物;(2)通过PCR扩增获得VP3基因片段;(3)对VP3基因进行克隆、测序鉴定;(4)将VP3基因定向亚克隆至pGEX-6p-1原核表达载体;(5)VP3基因在大肠杆菌的诱导表达;(6)VP3基因表达蛋白的亲合层析纯化。本产品可作为检测鹅细小病毒抗体的间接-ELISA及Dot-ELISA方法的检测抗原,也可作为预防鹅细小病毒感染的基因工程亚单位疫苗。
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公开(公告)号:CN113462653B
公开(公告)日:2022-10-04
申请号:CN202110756919.3
申请日:2021-07-05
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/18 , G01N33/68 , G01N33/577 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体、分泌该单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用。本发明所述的一种抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体,由保藏编号为CGMCC No.22321的杂交瘤细胞株分泌产生。实验证明,所述的单克隆抗体对猪Gasdermin D蛋白具有反应特异性,所述的单克隆抗体不仅能够检测猪GSDMD全蛋白,还能够检测活化切割后的猪GSDMD蛋白羧基端节段。本发明的提出对猪GSDMD生物学功能的研究具有重要意义。
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公开(公告)号:CN113462653A
公开(公告)日:2021-10-01
申请号:CN202110756919.3
申请日:2021-07-05
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/18 , G01N33/68 , G01N33/577 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体、分泌该单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用。本发明所述的一种抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体,由保藏编号为CGMCC No.22321的杂交瘤细胞株分泌产生。实验证明,所述的单克隆抗体对猪Gasdermin D蛋白具有反应特异性,所述的单克隆抗体不仅能够检测猪GSDMD全蛋白,还能够检测活化切割后的猪GSDMD蛋白羧基端节段。本发明的提出对猪GSDMD生物学功能的研究具有重要意义。
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公开(公告)号:CN105886474B
公开(公告)日:2019-09-17
申请号:CN201610244264.0
申请日:2016-04-19
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/28 , G01N33/577 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了抗鹅CD8α链胞外区单克隆抗体及其在检测禽类外周血中CD8+T淋巴细胞中的应用。本发明以携带鹅CD8α链胞外区基因的原核表达载体为模板,设计1对特异性引物扩增得到鹅CD8α链胞外区238‑480bp基因,构建重组原核表达载体,采用大肠杆菌表达鹅CD8α链胞外区80‑160aa,得到重组蛋白rGopET‑30a‑CD8αex。以重组蛋白rGopET‑30a‑CD8αex为免疫原,免疫小鼠,经筛选获得1株稳定分泌抗鹅CD8α链胞外区80‑160aa单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为9E4,保藏号是:CGMCCNO.11194。研究表明,该单克隆抗体能与纯化的重组鹅CD8α链胞外区80‑160aa蛋白反应,同时也能够与分离的鹅、鸭以及鸡的外周血淋巴细胞发生特异性反应。因此,本发明的提出为检测禽类外周血中CD8+T淋巴细胞提供了一种新的、有效的技术手段。
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公开(公告)号:CN102121013B
公开(公告)日:2013-01-09
申请号:CN200910073285.0
申请日:2009-11-27
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 可高效表达的成熟鸡α干扰素多肽的制备方法,它涉及鸡α干扰素多肽的制备方法。它解决了现有重组鸡α干扰素基因不能在大肠杆菌中表达或者表达量很低,以及重组鸡α干扰素在制备中复性效果差的问题。方法:一、将成熟鸡α干扰素基因中的稀有密码子全部同义替换为大肠杆菌偏好性密码子,经合成得优化后的鸡α干扰素基因;二、克隆到表达载体中,然后转化到大肠杆菌感受态细胞中,经筛选后诱导表达,离心后得湿菌,再进行包涵体的提取和溶解;三、进行复性及纯化,收集蛋白。本发明成熟鸡α干扰素基因能在大肠杆菌中高效表达,表达量可达总菌体蛋白的30%,复性效果好。
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公开(公告)号:CN102618632A
公开(公告)日:2012-08-01
申请号:CN201210017537.X
申请日:2012-01-20
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种功能性微生物多样性分析用引物和使用该引物的多重扩增,涉及3对用于功能性微生物多样性分析的针对β-葡萄糖苷水解酶基因的引物。经DNAMAN6.0软件进行序列同源性比对后分别设计β-葡萄糖苷水解酶GH1家族的通用简并引物GH1F,GH1R,GH1R-GC,和β-葡萄糖苷水解酶GH3家族细菌、放线菌的通用简并引物GH3BF,GH3BR,GH3BF-GC,以及β-葡萄糖苷水解酶GH3家族真菌的通用简并引物GH3EF,GH3ER,GH3EF-GC,本发明提供的引物具有很好的通用性和实用性,能良好的反应实验对象中参与降解纤维素的功能性微生物的多样性,可以适用于来源于土壤,沉积物,人畜胃肠道等环境样品的分析。
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公开(公告)号:CN101603043A
公开(公告)日:2009-12-16
申请号:CN200910072332.X
申请日:2009-06-19
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/21
Abstract: 一种鹅干扰素-α多肽基因,它涉及一种鹅干扰素-α基因。它解决了目前天然的鹅干扰素-α基因在大肠杆菌内不能表达的问题。本发明鹅干扰素-α多肽基因序列如SEQ ID NO:1所示。本发明木糖还原酶基因序全长505bp,10bp处有起始密码子ATG,496bp处有终止密码子TAA,有489bp完整的开放阅读框。本发明鹅干扰素-α多肽基因能够在大肠杆菌表达系统中高效表达鹅干扰素-α成熟多肽。本发明的鹅干扰素-α多肽基因转录后mRNA的二级结构明显优于天然鹅干扰素-α多肽基因,提高了鹅干扰素-α在大肠杆菌系统中的表达量,实现了高效表达。
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