公开(公告)号：CN115948477A

公开(公告)日：2023-04-11

申请号：CN202210856638.X

申请日：2022-07-20

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 牟彦双 ,  刘忠华 ,  郭晓晨 ,  耿立爽 ,  姜超前

IPC: C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明公开一种提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率的诱导剂、方法以及应用，属于基因工程技术领域。为了提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率以及多基因编辑的效率的技术问题。本发明公开一种提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率的诱导剂，所述诱导剂为Nedisertib或/和ssODN‑M。该方法对单个基因或同时对多个基因提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率。

公开(公告)号：CN115948477B

公开(公告)日：2024-05-28

申请号：CN202210856638.X

申请日：2022-07-20

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 牟彦双 ,  刘忠华 ,  郭晓晨 ,  耿立爽 ,  姜超前

IPC: C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明公开一种提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率的诱导剂、方法以及应用，属于基因工程技术领域。为了提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率以及多基因编辑的效率的技术问题。本发明公开一种提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率的诱导剂，所述诱导剂为Nedisertib或/和ssODN‑M。该方法对单个基因或同时对多个基因提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率。

公开(公告)号：CN116590322A

公开(公告)日：2023-08-15

申请号：CN202310577474.1

申请日：2023-05-22

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 牟彦双 ,  徐倩倩 ,  刘忠华 ,  姜超前 ,  耿立爽 ,  王金鹏 ,  李鑫禹

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种CRISPR‑MCPN载体及其构建方法、应用，属于基分子生物学领域。本发明CRISPR‑MCPN载体可以实现在同一个细胞中达到多水平调控、提高基因调控的效率。所述CRISPR‑MCPN载体包括CRISPR‑Cas9基因调控组件、tRNA‑array序列、融合在sgRNA的茎环中RNA发夹序列、适配体‑RNA结合蛋白和基因调控结构域。所述CRISPR‑MCPN载体及其构建方法使一个单一启动子能够在一个单一的转录本中同时表达多个蛋白和gRNAs，从而实现一个单独载体可以使激活、抑制、甲基化和去甲基化四种功能在同一细胞中独立作用。

公开(公告)号：CN110004181B

公开(公告)日：2022-10-11

申请号：CN201910212739.1

申请日：2019-03-20

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 牟彦双 ,  李佳男 ,  刘忠华 ,  姜超前 ,  王玥 ,  矫彦文

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/63

Abstract: 一种附加型CRISPR/Cas9表达载体及其构建方法与应用，属于细胞工程领域。为了解决现有的CRISPR/Cas表达系统易整合到宿主细胞基因组，破坏基因组内序列的问题，本发明提供了一种附加型CRISPR/Cas9表达载体，该载体为含有S/MAR序列的CRISPR/Cas9表达载体，是指含有S/MAR序列的CRISPR/Cas9表达载体，所述S/MAR序列，其核苷酸如SEQ ID NO：1所示；所述S/MAR序列位于该载体中能编码蛋白的编码区序列和bGH poly(A)序列之间。本发明提供的附加型CRISPR/Cas9表达载体，可以游离在染色体外表达Cas9蛋白和单链的引导RNA，可用于基因敲除研究。

公开(公告)号：CN110004181A

公开(公告)日：2019-07-12

申请号：CN201910212739.1

申请日：2019-03-20

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 牟彦双 ,  李佳男 ,  刘忠华 ,  姜超前 ,  王玥 ,  矫彦文

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/63

Abstract: 一种附加型CRISPR/Cas9表达载体及其构建方法与应用，属于细胞工程领域。为了解决现有的CRISPR/Cas表达系统易整合到宿主细胞基因组，破坏基因组内序列的问题，本发明提供了一种附加型CRISPR/Cas9表达载体，该载体为含有S/MAR序列的CRISPR/Cas9表达载体，是指含有S/MAR序列的CRISPR/Cas9表达载体，所述S/MAR序列，其核苷酸如SEQ ID NO：1所示；所述S/MAR序列位于该载体中能编码蛋白的编码区序列和bGH poly(A)序列之间。本发明提供的附加型CRISPR/Cas9表达载体，可以游离在染色体外表达Cas9蛋白和单链的引导RNA，可用于基因敲除研究。

公开(公告)号：CN108244095A

公开(公告)日：2018-07-06

申请号：CN201710802837.1

申请日：2017-09-08

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 翁晓刚 ,  牟彦双 ,  张宇霆 ,  蔡铭铭 ,  宋健 ,  刘忠华

IPC: A01N1/02 ,  A61D19/02

Abstract: 一种猪冻精解冻稀释液及其配制方法，本发明属于猪冻精解冻技术领域。本发明要解决的技术问题是猪冷冻精液在解冻稀释过程中极易发生精子的氧化损伤。本发明的组分：D‑葡萄糖、果糖、氯化钾、乙二胺四乙酸二钠、碳酸氢钠，柠檬酸三钠、聚乙烯醇、庆大霉素、黄芪多糖和白藜芦醇。方法：一、将D‑葡萄糖、果糖、氯化钾、乙二胺四乙酸二钠、碳酸氢钠，柠檬酸三钠、聚乙烯醇，用双蒸水配制成水溶液；二、置于26℃水浴锅中平衡至充分溶解并且pH值稳定；三、除菌滤器过滤；四、使用前30分钟加入庆大霉素、黄芪多糖和白藜芦醇。本发明有效地产生抗氧化作用，降低了冻精解冻稀释过程剧烈稳定变化对精子的氧化损伤。

公开(公告)号：CN107119053A

公开(公告)日：2017-09-01

申请号：CN201710483307.5

申请日：2017-06-23

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 牟彦双 ,  刘忠华 ,  郭佳 ,  马伟超 ,  郭超

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/113 ,  A01K67/0276 ,  A01K2207/15 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/108 ,  A01K2267/03 ,  C07K14/47 ,  C12N15/8509 ,  C12N15/907

Abstract: 一种特异靶向猪MC4R基因的sgRNA导向序列及应用，涉及一种sgRNA导向序列及应用。该sgRNA导向序列为CGTCTCGCGCTTGGACTCAG。本发明提供的sgRNA导向序列可通过CRISPR/Cas9系统敲除或编辑MC4R基因，进而消除MC4R的表达，为制备MC4R转基因猪奠定基础。本发明应用于基因工程领域。

公开(公告)号：CN107099533A

公开(公告)日：2017-08-29

申请号：CN201710483275.9

申请日：2017-06-23

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 牟彦双 ,  刘忠华 ,  尹智 ,  翁晓刚

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90

CPC classification number: C12N15/113 ,  C07K14/4743 ,  C12N9/22 ,  C12N15/85 ,  C12N15/907 ,  C12N2310/10 ,  C12N2810/10

Abstract: 一种特异靶向猪IGFBP3基因的sgRNA导向序列及应用，涉及一种sgRNA导向序列及应用。该sgRNA导向序列为CGTCTCGCGCTTGGACTCAG。本发明提供的sgRNA导向序列可通过CRISPR/Cas9系统敲除或编辑IGFBP3基因，进而消除IGFBP3的表达，为制备IGFBP3转基因猪奠定基础。本发明应用于基因工程领域。