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公开(公告)号：CN115948477B
公开(公告)日：2024-05-28
申请号：CN202210856638.X
申请日：2022-07-20
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开一种提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率的诱导剂、方法以及应用，属于基因工程技术领域。为了提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率以及多基因编辑的效率的技术问题。本发明公开一种提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率的诱导剂，所述诱导剂为Nedisertib或/和ssODN‑M。该方法对单个基因或同时对多个基因提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率。
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公开(公告)号：CN116590322A
公开(公告)日：2023-08-15
申请号：CN202310577474.1
申请日：2023-05-22
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12N15/63 , C12N15/113 , C12N15/55 , C12N15/66
Abstract: 本发明公开了一种CRISPR‑MCPN载体及其构建方法、应用，属于基分子生物学领域。本发明CRISPR‑MCPN载体可以实现在同一个细胞中达到多水平调控、提高基因调控的效率。所述CRISPR‑MCPN载体包括CRISPR‑Cas9基因调控组件、tRNA‑array序列、融合在sgRNA的茎环中RNA发夹序列、适配体‑RNA结合蛋白和基因调控结构域。所述CRISPR‑MCPN载体及其构建方法使一个单一启动子能够在一个单一的转录本中同时表达多个蛋白和gRNAs，从而实现一个单独载体可以使激活、抑制、甲基化和去甲基化四种功能在同一细胞中独立作用。
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公开(公告)号：CN117418319A
公开(公告)日：2024-01-19
申请号：CN202311275904.0
申请日：2023-09-28
Applicant: 东北农业大学
IPC: C40B40/02 , C40B50/06 , C12N15/12 , C12N15/867 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种猪全转录因子激活文库构建方法及其筛选调控OCT4基因的转录因子的方法，属于分子生物学领域。本发明解决了目前基因组规模的功能获得筛选方法在很大程度上局限于cDNA文库过表达系统的使用，而合成和使用聚合cDNA文库的成本高且复杂的问题。本发明为了筛选猪中调控OCT4表达的转录因子，构建了猪全转录因子CRISPR激活文库，具体技术方案如下：首先筛选猪的转录因子，针对转录因子设计合成sgRNA后构建慢病毒sgRNA文库，同时构建既表达OCT4启动子驱动的EGFP，又表达dCas9‑SAM系统元件的细胞系，最后利用构建好的sgRNA文库感染该细胞系，再通过sgRNA富集来筛选调控OCT4表达的转录因子。本研究所述的方法可为猪这一物种筛选和研究转录因子功能及调控网络提供有力的工具。
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公开(公告)号：CN117050935A
公开(公告)日：2023-11-14
申请号：CN202310913897.6
申请日：2023-07-24
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开一种诱导猪多能性细胞的诱导剂以其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。为了提供一种利用表达内源性重编程因子获得多能性细胞的方法。本申请公开一种诱导猪多能性细胞的诱导剂，所述诱导剂为以Cas12a‑Activ载体作为基础载体骨架，将24个基因的sgRNA串联合成一个片段，然后连接到基础载体骨架中获得Cas12a‑Activ‑24重组载体或以Cas12a‑Activ载体作为基础载体骨架，将10个基因的sgRNA串联合成一个片段，然后连接到基础载体骨架中获得Cas12a‑Activ‑10重组载体。CRISPR内源激活的重编程方法拓宽了猪成纤维细胞重编程的可用工具。
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公开(公告)号：CN115948477A
公开(公告)日：2023-04-11
申请号：CN202210856638.X
申请日：2022-07-20
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开一种提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率的诱导剂、方法以及应用，属于基因工程技术领域。为了提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率以及多基因编辑的效率的技术问题。本发明公开一种提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率的诱导剂，所述诱导剂为Nedisertib或/和ssODN‑M。该方法对单个基因或同时对多个基因提高CRISPR/Cas9的同源重组修复效率。
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