公开(公告)号：CN110004181B

公开(公告)日：2022-10-11

申请号：CN201910212739.1

申请日：2019-03-20

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 牟彦双 ,  李佳男 ,  刘忠华 ,  姜超前 ,  王玥 ,  矫彦文

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/63

Abstract: 一种附加型CRISPR/Cas9表达载体及其构建方法与应用，属于细胞工程领域。为了解决现有的CRISPR/Cas表达系统易整合到宿主细胞基因组，破坏基因组内序列的问题，本发明提供了一种附加型CRISPR/Cas9表达载体，该载体为含有S/MAR序列的CRISPR/Cas9表达载体，是指含有S/MAR序列的CRISPR/Cas9表达载体，所述S/MAR序列，其核苷酸如SEQ ID NO：1所示；所述S/MAR序列位于该载体中能编码蛋白的编码区序列和bGH poly(A)序列之间。本发明提供的附加型CRISPR/Cas9表达载体，可以游离在染色体外表达Cas9蛋白和单链的引导RNA，可用于基因敲除研究。

公开(公告)号：CN110004181A

公开(公告)日：2019-07-12

申请号：CN201910212739.1

申请日：2019-03-20

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 牟彦双 ,  李佳男 ,  刘忠华 ,  姜超前 ,  王玥 ,  矫彦文

IPC: C12N15/90 ,  C12N15/63

Abstract: 一种附加型CRISPR/Cas9表达载体及其构建方法与应用，属于细胞工程领域。为了解决现有的CRISPR/Cas表达系统易整合到宿主细胞基因组，破坏基因组内序列的问题，本发明提供了一种附加型CRISPR/Cas9表达载体，该载体为含有S/MAR序列的CRISPR/Cas9表达载体，是指含有S/MAR序列的CRISPR/Cas9表达载体，所述S/MAR序列，其核苷酸如SEQ ID NO：1所示；所述S/MAR序列位于该载体中能编码蛋白的编码区序列和bGH poly(A)序列之间。本发明提供的附加型CRISPR/Cas9表达载体，可以游离在染色体外表达Cas9蛋白和单链的引导RNA，可用于基因敲除研究。