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公开(公告)号：CN116064518A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202210920352.3
申请日：2022-08-02
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12P7/26 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌小RNA调控系统构建方法，属于生物工程技术领域。本发明可以快速设计产生大量sRNA调控工具对枯草芽孢杆菌中的基因表达进行敲低。与其他调控方法相比，本发明无需额外表达其他RNA伴侣蛋白等其他基因，也无需对目的基因进行改造，操作简便、高效。其次，本发明可快速设计出大量序列不同的人工sRNA调控工具，丰富了调控元件库的种类和数量。利用本发明的sRNA可实现对枯草芽孢杆菌外源基因gfp、内源基因ftsZ、comER、aslR、aslD、ldh、pta、acoA、bdhA等实现不同程度的抑制，可有效调控目的基因的表达。
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公开(公告)号：CN116064514A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202210874785.X
申请日：2022-07-25
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P13/04 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种调控基因表达的非编码sRNA及其应用，属于生物技术领域。本发明率先发现任何一个不依赖ρ因子的转录终止子(或称内源性终止子)和一段特异性的靶向基因mRNA互补配对区组合形成的非编码sRNA即可发挥基因调控功能。将该发现作为一条基本、通用原则来设计非编码sRNA，可达到特异性调控任意基因表达的目的。本发明以gfp、ftsZ基因及麦角硫因合成底物的合成旁路途径为例，验证了在该设计原则下设计的非编码sRNA能够有效调控gfp、ftsZ的表达，或提高麦角硫因产量。本发明的方法将为原核生物的基因调控提供更为有效、便捷的调控技术，可以实现对任意基因的快速调控。
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公开(公告)号：CN114763518B
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202111062175.1
申请日：2021-09-10
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/19 , C12N15/81 , C12N15/65 , C12N15/64 , C12N15/54 , C12N15/53 , C12N15/61 , C12P19/26 , C12R1/84 , C12R1/865
Abstract: 本发明公开了发酵生产肝素的酵母工程菌的构建及其应用，属于生物工程技术领域。本发明首先将肝素合成途径中的外源基因肝素前体合酶基因kfiC，α4‑N‑乙酰氨基葡糖转移酶酶基因kfiA和UDP‑葡萄糖脱氢酶编码基因tuaD分别整合到毕赤酵母和酿酒酵母基因组中，初步构建了肝素前体合成途径，之后分别在毕赤酵母和酿酒酵母中表达筛选并优化N‑脱乙酰磺酸转移酶、葡萄糖醛酸C5‑变构酶、磺酸乙酰肝素2‑磺酸转移酶、磺酸乙酰肝素6‑磺酸转移酶、磺酸乙酰肝素3‑磺酸转移酶，得到合成不同磺酸化程度的磺酸乙酰肝素的生产菌株。本发明首次实现了利用微生物发酵碳源合成不同磺酸化程度的肝素。
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公开(公告)号：CN115786320A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202211651602.4
申请日：2022-12-21
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于自组装策略构建固定化酶合成磺酸基供体PAPS的方法，属于生物技术领域。本发明提供一种利用聚集蛋白自组装PAPS合成双功能酶和ADP磷酸化酶，实现酶的固定化用以合成PAPS。通过进一步对linker进行理性设计和改造，大大提高了转化效率。本发明通过自组装肽同时实现PAPS合成双功能酶和ADP磷酸化酶的共固定化，直接破壁添加离心沉淀，实现一步法合成PAPS。固定化PAPS合成双功能酶在循环利用十次后仍具有45％的ATP转化率，约为第一次使用的50％。该方法简化了酶的分离纯化步骤，提高了酶的利用效率，大幅降低了工业化PAPS生产的成本。
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公开(公告)号：CN115029365A
公开(公告)日：2022-09-09
申请号：CN202210653033.0
申请日：2022-06-09
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/31 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N15/12 , C12N9/88 , C07K14/435 , C12P21/02 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种大肠杆菌益生菌EcN无抗生素高效稳定表达体系构建与应用，属于基因工程技术领域。本发明通过截短EcN隐性质粒的一个或多个元件，得到pMUT1衍生质粒pMUT1’‑del‑Rop、pMUT1’‑del‑NikA、pMUT1’‑del‑Rop‑NikA以及pMUT2衍生质粒pMUT2’‑del‑MobB、pMUT2’‑del‑MobC、pMUT2’‑del‑MobD和pMUT2’‑del‑Hyp、pMUT2’‑del‑MobBCD‑Hyp。将这些质粒导入E.coli Nissle 1917衍生菌株中，在不含抗生素的条件中培养，可使质粒在宿主细胞中的稳定存在，且实现质粒上目的蛋白的稳定表达，可以稳定维持6.5～13天。隐性质粒的开发有望取代传统抗生素维持的质粒，对于构建新型无抗生素表达平台具有重要的意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111518822B
公开(公告)日：2022-08-09
申请号：CN201910588540.9
申请日：2019-07-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种硫酸软骨素ABC裂解酶突变体及其分泌表达的方法，属于生物工程技术领域。本发明将普通变形杆菌来源的硫酸软骨素ABC裂解酶进行了定点突变，通过融合信号肽加强了其分泌表达，对表达酶的菌株进行了外膜蛋白敲除，并进一步提供了菌株的培养策略。
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公开(公告)号：CN114763570A
公开(公告)日：2022-07-19
申请号：CN202111060434.7
申请日：2021-09-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了制备不同分子量肝素的磺酸化修饰体系构建及其应用，属于生物工程技术领域。本发明利用合成生物学技术和基因工程手段，以毕赤酵母GS115为出发菌株，在细胞内异源表达了肝素合成途径相关基因：双功能N－脱乙酰/N－磺酸转移酶(NDST)、葡萄糖醛酸C5‑变构酶(C5epi)、磺酸乙酰肝素2‑磺酸转移酶(2‑OST)、磺酸乙酰肝素6‑磺酸转移酶(6‑OST)、磺酸乙酰肝素3‑磺酸转移酶(3‑OST)，本发明实现了利用微生物发酵碳源生产肝素修饰酶，并首次实现了从ATP出发全酶法体外催化合成肝素。
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公开(公告)号：CN111518736B
公开(公告)日：2022-04-15
申请号：CN201911018182.4
申请日：2019-10-24
Applicant: 华熙生物科技股份有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效合成高纯度透明质酸及其寡聚糖的重组谷氨酸棒状杆菌，属于生物工程技术领域。本发明构建的重组谷氨酸棒状杆菌生产的透明质酸的产量达到40g/L，粗产品纯度达到95％。通过外源添加透明质酸水解酶并优化发酵条件，可以获得特定分子量的透明质酸寡糖，并实现透明质酸产量的进一步提升，使产量达到72g/L。本发明为微生物高效合成高纯度透明质酸奠定了坚实的基础，构建的重组谷氨酸棒状杆菌适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN113717965A
公开(公告)日：2021-11-30
申请号：CN202111088551.4
申请日：2021-09-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种链霉菌胰蛋白酶特异性改造的方法及其应用，属于基因工程技术领域。本发明通过在毕赤酵母中异源表达灰色链霉菌胰蛋白酶SGT，并对其进行突变，得到了两个能够显著提升对精氨酸特异性识别效率的突变体，使得突变体对Tos‑Gly‑Pro‑Arg‑AMC催化效率达到了36000ml‑1min‑1，适用于胰岛素及胰岛素类似物的生产，从而在工业中具有良好应用前景。
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