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公开(公告)号：CN102206611B
公开(公告)日：2012-10-17
申请号：CN201110107432.9
申请日：2011-04-27
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/0797
Abstract: 本发明公开了一种羊水源性神经干细胞的分离培养方法，首先分离到羊水细胞，然后再在羊水细胞中添加分离培养基，分离得到的神经干细胞生长形成神经球，将其消化分离为单细胞后进行传代培养。本发明提供的羊水源性神经干细胞的分离培养方法，开辟了分离培养神经干细胞的新途径，应用本发明方法从羊水中分离培养神经干细胞成功率高。所分离到的羊水源性神经干细胞在体外诱导后分化为星形胶质细胞和神经元细胞等功能细胞；所分离到的羊水源性神经干细胞具有可行性和有效性，具有自我更新、增殖和分化潜能。
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公开(公告)号：CN102676559A
公开(公告)日：2012-09-19
申请号：CN201110390905.0
申请日：2011-11-30
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/57 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873 , C12R1/44
Abstract: 本发明公开了一种重组溶葡萄球菌素位点特异性整合载体及其构建的重组细胞，重组溶葡萄球菌素基因由牛生长激素信号肽加上突变的溶葡萄球菌素成熟肽组成，在他的5′端和3′端加入酪蛋白基因的调控序列，在酪蛋白5′端和EGFP的终止密码子后各添加一个鸡β乳球蛋白的绝缘子元件。用整合了目的基因的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞，通过SCNT获得转基因克隆胚胎。通过胚胎移植技术将发育正常的转基因克隆胚胎，有望生产出转重组溶葡萄球菌素基因的抗乳房炎的高产奶牛。
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公开(公告)号：CN102634535A
公开(公告)日：2012-08-15
申请号：CN201210106175.1
申请日：2012-04-12
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种随机锌指蛋白库的构建方法，包括锌指蛋白表达插入载体pBD-P-Gal11p-ZFR的构建、随机锌指蛋白序列的构建以及随机锌指蛋白表达载体pBD-P-Gal11p-ZFS构建，在将其转化并表达后获得高容量的随机锌指蛋白库。该高容量的随机锌指蛋白库，为锌指蛋白的筛选奠定了基础。
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公开(公告)号：CN102426126A
公开(公告)日：2012-04-25
申请号：CN201110251106.5
申请日：2011-08-29
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: G01N1/30
Abstract: 本发明公开了一种牛囊胚内细胞团细胞和滋养层细胞的差异染色方法，包括以下步骤：1)利用免疫染色方法，以抗CDX2单克隆抗体作为一抗，将其与特异表达在牛囊胚滋养层细胞的CDX2分子进行免疫结合；2)利用免疫染色方法，以红色荧光标记的能够与抗CDX2单克隆抗体结合的抗体作为二抗，对清洗后的结合有一抗的牛囊胚进行免疫染色；3)在免疫染色完成后，对牛囊胚进行整体的细胞核荧光染色，以形成差异染色。本发明在CDX2蛋白在滋养层细胞内特异性表达，而在内细胞团细胞上不表达的基础上，这样利用基于CDX2分子的红色免疫染色和DAPI细胞核蓝色染色来进行差异染色，准确率为100％，而且图片清晰漂亮。
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公开(公告)号：CN102296090A
公开(公告)日：2011-12-28
申请号：CN201110249842.7
申请日：2011-08-29
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/877
Abstract: 本发明公开了一种基于体细胞核移植构建的牛体细胞克隆胚的处理方法，将待移植的牛体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，在电融合之后1h，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚用1μM的Oxamflatin处理牛体细胞克隆胚胎12h，可以显著提高牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102226199A
公开(公告)日：2011-10-26
申请号：CN201110109950.4
申请日：2011-04-29
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85
Abstract: 本发明公开了一种用于生产外源蛋白的山羊β-乳球蛋白基因座打靶载体构建方法，以山羊β-乳球蛋白基因5’端调控序列BLG5作为5’端同源臂，以山羊β-乳球蛋白基因3’端包含第6、第7外显子及下游的序列BLG3作为3’端同源臂，以第5外显子和第5内含子的部分序列E5作为连接序列用以将正筛选标记基因置于第5内含子中；将BLG5、目的基因及E5顺次连接，再和BLG3分别连接到通用型打靶载体中正筛选标记两侧。在需要时可以将目标蛋白的基因组DNA或cDNA序列插入到该通用打靶载体的目的基因位置处或直接置换掉原来的目的基因，然后用所获得的打靶载体转染山羊胎儿成纤维细胞或其他细胞，筛选出中靶的细胞，通过体细胞核移植技术获得能在乳腺中生产目标蛋白的转基因山羊。
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公开(公告)号：CN102086475A
公开(公告)日：2011-06-08
申请号：CN201010592751.9
申请日：2010-12-13
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 一种目的基因的漂移处理检测方法，包括收集转基因细胞培养液、核移植操作液和胚胎培养液等可能含有外源基因的液体，对其进行高压处理，然后对液体进行浓缩；针对外源基因的基因序列设计引物，通过PCR技术，特异性扩增外源基因的DNA片段，根据PCR扩增结果，判断在转基因细胞筛选过程中以及胚胎生产和培养过程中所产生的液体经处理后是否还有外源基因的存在。本发明这种处理检测方法完全可以避免外源基因的漂移，保证了转基因动物生产过程中的环境安全。适用于来源于人的防御素-3基因的转基因奶牛和山羊的生产过程中的基因漂移的检测。
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公开(公告)号：CN101186925B
公开(公告)日：2010-05-26
申请号：CN200710019050.4
申请日：2007-11-12
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种通用型高效真核表达载体p3I-GFPN及采用该载体构建的抗乳腺炎的转基因载体，本发明构建的抗乳腺炎转基因载体pCMV/CSN2-hLY-hIFA，在乳腺细胞中能高水平表达绿色荧光蛋白，在泌乳期的乳腺细胞中，由于CSN2的启动子发挥了启动作用，使转pCMV/CSN2-hLY-hIFA的乳腺细胞分泌大量的人溶菌酶和人干扰素A，在通过乳汁分离获得目的蛋白的同时又能较好的防治家畜乳腺炎。
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公开(公告)号：CN1896274A
公开(公告)日：2007-01-17
申请号：CN200510096097.1
申请日：2005-09-29
Applicant: 西北农林科技大学生物工程研究所
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种牛胚胎性别简易鉴定方法，其血液基因组鉴定率达100％，胚胎性别鉴定率为99.0％以上，操作简便、灵敏度高、鉴定快速、实用性强、使用设备简单，并可以在1h内鉴定出胚胎性别，形成的胚胎性别鉴定试剂盒完全可以应用于生产，且成本仅为同类产品的1/10。本发明根据牛特异性序列和雄性特异性序列，设计出6条特异性引物，能够识别6个特异位点，反应目的序列形成一个哑铃型结构单元，并以此为核心，短时间内扩增出大量大小不等的DNA片断。反应过程中，仅需要60～65℃恒温水浴即可；结果鉴定采用dNTPs沉淀法(反应管中部出现白色条带为阴性)。
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公开(公告)号：CN118969085A
公开(公告)日：2024-11-15
申请号：CN202411141685.1
申请日：2024-08-20
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: G16B25/00 , G16B20/30 , G16B25/20 , G16B50/10 , C12Q1/6809 , C12Q1/6851 , C12N5/073 , C12N5/077 , C12Q1/02
Abstract: 本发明涉及基因表达与调控技术领域，公开了一种筛选与鉴定猪胚胎附植关键基因的方法，包括：生物信息学鉴定，胚胎收集与培养。该筛选与鉴定猪胚胎附植关键基因的方法，通过分析了猪基因组中的env基因，并利用bulk转录组测序分析了正常和SCNT胚胎与胎盘之间表达差异，筛选到2个候选合胞素基因；通过结构分析发现Sus1与Sus2具经典合胞素基因结构，表达分析发现Sus1在早期胚胎合子基因组激活阶段高表达，Sus2仅在胎盘与肺中表达且胎盘特异高表达，揭示Sus1与Sus2可能介导猪胚胎发育并发挥重要作用，通过细胞融合与假型病毒试验验证发现，Sus1与Sus2均可促进细胞融合并且介导病毒进入，这进一步表明Sus1与Sus2可能参与早期胚胎发育与胎盘形成过程。
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