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公开(公告)号:CN118562696A
公开(公告)日:2024-08-30
申请号:CN202410730365.3
申请日:2024-06-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种耐粘稠的谷氨酸棒杆菌及其应用,属于生物基因工程技术领域。本发明的谷氨酸棒杆菌由由谷氨酸棒杆菌ATCC 13032突变得到,突变位点包括:将862902位点上的胞嘧啶突变为胸腺嘧啶;将862903位点上的鸟嘌呤突变为腺嘌呤;将862953位点上的胞嘧啶突变为胸腺嘧啶;将862961位点上的腺嘌呤突变为鸟嘌呤;在862958位点上插入胞嘧啶和胸腺嘧啶;将862963位点上的鸟嘌呤缺失突变。本发明的谷氨酸棒杆菌在高粘稠环境中的耐受性和在低溶解氧环境下的生长代谢能力显著提高,从而提高了粘多糖的产量,避免因产生的粘多糖使得发酵液粘稠,溶氧不足进而限制谷氨酸棒杆菌代谢,最终影响粘多糖合成的问题。
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公开(公告)号:CN117778337A
公开(公告)日:2024-03-29
申请号:CN202311854009.4
申请日:2023-12-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种酪氨酸酶突变体及其在生物染发中应用,属于生物技术领域。本发明筛选并构建了酪氨酸酶突变体,对巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)和多刺疣微菌(Verrucomicrobium spinosum)来源的酪氨酸酶序列,对氨基酸定点突变,实现了酪氨酸酶突变体在大肠杆菌中的高活性表达,得到的酪氨酸酶突变体具有高效催化酪氨酸合成黑色素的能力,并在此基础上提高了酪氨酸酶的稳定性,在保存多日后依然能够保持较高的酶活。基于该酪氨酸酶突变体,建立了酶法催化的生物染发体系,实现了无毒、绿色安全、高效便捷的生物染发,提高了头发的机械强度,安全性优于传统化学染发,染发底物相比于其他生物染发剂所用黑色素前体也更廉价易得。
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公开(公告)号:CN114763570B
公开(公告)日:2024-02-27
申请号:CN202111060434.7
申请日:2021-09-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了制备不同分子量肝素的磺酸化修饰体系构建及其应用,属于生物工程技术领域。本发明利用合成生物学技术和基因工程手段,以毕赤酵母GS115为出发菌株,在细胞内异源表达了肝素合成途径相关基因:双功能N-脱乙酰/N-磺酸转移酶(NDST)、葡萄糖醛酸C5‑变构酶(C5epi)、磺酸乙酰肝素2‑磺酸转移酶(2‑OST)、磺酸乙酰肝素6‑磺酸转移酶(6‑OST)、磺酸乙酰肝素3‑磺酸转移酶(3‑OST),本发明实现了利用微生物发酵碳源生产肝素修饰酶,并首次实现了从ATP出发全酶法体外催化合成肝素。
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公开(公告)号:CN117210444A
公开(公告)日:2023-12-12
申请号:CN202311177846.8
申请日:2023-09-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种对酶进行再设计促进其在原核生物中可溶表达及活性提高的方法,属于计算化学,生物信息学,基因工程以及蛋白质工程技术领域。该方法包括以下步骤:将活性位点及其 范围内的氨基酸残基、底物结合位点及其 范围内的氨基酸残基设置为不允许变动位点,将半胱氨酸残基所在位点设置为氨基酸变动位点,不允许出现半胱氨酸且保持该位点氨基酸α碳原子不变,蛋白序列上其余位点设置为虚拟饱和突变位点,再经筛选得到再设计的酶。本发明通过上述方法设计得到的胰蛋白酶突变体可以在原核微生物中实现高效可溶表达,酰胺酶比酶活达到77.48U/mg,通过多位点突变实现了酶活的进一步提高,达到了137.05U/mg。
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公开(公告)号:CN116640745B
公开(公告)日:2023-12-08
申请号:CN202310784916.X
申请日:2023-06-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及透明质酸酶突变体及其在水解硫酸软骨素中的应用,属于生物工程技术领域。本发明的透明质酸酶突变体是将位于水蛭来源透明质酸酶的底物结合口袋中的氨基酸残基进行突变后得到的蛋白质,具体是以氨基酸序列SEQ ID NO.1所示的透明质酸酶为出发序列,将第65位的苯丙氨酸突变为丝氨酸;和/或将第180位苏氨酸突变为精氨酸。本发明应用定向进化技术和方法对透明质酸酶进行了改造,其中,所得双突变体对于硫酸软骨素的催化效率提高了
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公开(公告)号:CN116904429A
公开(公告)日:2023-10-20
申请号:CN202311103816.2
申请日:2023-08-30
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/54 , C12N15/70 , C12N15/57 , C12N15/81 , C12N1/21 , C12N1/19 , C12P21/06 , C07K14/78 , C12R1/19 , C12R1/84
Abstract: 本发明公开了一种高效表达胶原蛋白水解酶的方法及其应用,属于生物技术领域。本发明采用含有胶原蛋白水解酶突变体的宿主细胞进行发酵,生产的胶原蛋白水解酶酶活显著提升,且在宿主菌中的可溶性表达也大幅提升,实现了胶原蛋白水解酶的高效表达,其中,胶原蛋白水解酶突变体是将来自Bacillus cereus VD021的胶原蛋白水解酶经过截短改造得到。将该酶应用于不同来源胶原蛋白的水解催化时可将胶原蛋白全部转化为低分子量胶原蛋白肽,降解效果良好,具有重要的应用前景。
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公开(公告)号:CN116694657A
公开(公告)日:2023-09-05
申请号:CN202310663758.2
申请日:2023-06-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于调控sigma因子改变大肠杆菌细胞生长与代谢合成的方法,属于生物技术领域。本发明通过过表达sigma因子实现对大肠杆菌全基因组基因的表达调控,以提高大肠杆菌的生长强度,进而强化其代谢物的生产。与其他调控方法相比,本发明无需额外表达异源元件,也不需要对目的基因进行改造,即可实现全基因组水平的表达调控。且经验证,利用本发明提升细胞生长和代谢产物合成的方法,可以显著提高5‑氨基乙酰丙酸的产量。
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公开(公告)号:CN113881613B
公开(公告)日:2023-07-25
申请号:CN202110396678.6
申请日:2021-04-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种微生物发酵法生产制备超高分子量透明质酸的方法,属于生物工程技术领域。本发明在谷氨酸棒杆菌中游离表达透明质酸合酶编码基因pmhasA,构建了透明质酸的合成途径;采取弱化RBS强度的方法,弱化合酶pmHAS的表达;采取定点突变的策略理性改造透明质酸合成酶编码基因pmhasA;在谷氨酸棒杆菌中通过组合调控策略强化表达前体UDP‑葡萄糖醛酸和UDP‑N‑乙酰葡萄糖胺的合成途径酶编码基因;对发酵工艺进行优化,采取低温发酵的策略;重组谷氨酸棒杆菌生产的透明质酸分子量达到5‑9MDa。本发明构建的重组谷氨酸棒杆菌适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号:CN113684166B
公开(公告)日:2023-07-04
申请号:CN202110926226.4
申请日:2021-08-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效合成软骨素及其寡聚糖的重组谷氨酸棒杆菌,属于生物工程技术领域。本发明构建的重组谷氨酸棒杆菌生产的软骨素寡聚糖的产量达到20g L‑1。通过构建软骨素合成途径并异源表达软骨素裂解酶,可以直接一步法发酵获得软骨素寡聚糖。本发明为微生物高效合成高纯度软骨素奠定了坚实的基础,构建的重组谷氨酸棒杆菌适合于工业化生产应用。
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公开(公告)号:CN116064617A
公开(公告)日:2023-05-05
申请号:CN202211459643.3
申请日:2022-11-16
Applicant: 美药星(南京)制药有限公司 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高欧洲牡蛎溶菌酶产量的方法,属于生物工程领域。本发明从脊椎动物、软体动物、禽类和昆虫共12种不同来源溶菌酶基因序列中筛选获得了酶活相对较高的欧洲牡蛎来源溶菌酶,并实现酶在毕赤酵母中的活性表达。本发明还通过在OElyz的N端融合不同氨基酸短肽和蛋白标签。当融合Sumo标签时,摇瓶水平上重组OElyz的胞外酶活达到382.6U/mL,此产量水平可以满足溶菌酶在医药、生工、食品领域的应用需求。
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