公开(公告)号：CN119552791A

公开(公告)日：2025-03-04

申请号：CN202411774464.8

申请日：2024-12-05

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  朱莺莺 ,  孟佳炜 ,  张文立

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12P19/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种产L‑岩藻糖的工程大肠杆菌及其应用，其通过代谢工程策略，利用基因组整合和质粒表达路径基因相结合的方式，增强了L‑岩藻糖的生产，通过优化双质粒系统，加强前体供应，实现了高效生产L‑岩藻糖。此外，引入hok/sok系统和cysC的营养缺陷系统，成功构建了基于质粒的无抗生素依赖的工程菌株。该菌株在不添加抗生素的情况下，通过摇瓶培养和补料培养，分别产生了7.99g/L和61.91g/L的L‑岩藻糖，提供了迄今为止报道的最高L‑岩藻糖产量，并且发酵过程完全无需抗生素的使用。

公开(公告)号：CN117965484A

公开(公告)日：2024-05-03

申请号：CN202410002878.2

申请日：2024-01-02

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  朱莺莺 ,  王宁宁 ,  张文立

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N1/21 ,  C12P19/04 ,  C12P19/18 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了高效合成乳酰‑N‑岩藻糖基五糖‑Ⅴ的工程大肠杆菌的构建方法及应用，属于微生物代谢工程技术领域。以高效生产乳酰‑N‑四糖(LNT)的大肠杆菌为起始菌株，引入具有底物特异性的α1,3/4‑岩藻糖基转移酶，实现LNFP V的高效合成。从九个候选酶中选择脆弱拟杆菌α1,3/4‑岩藻糖基转移酶作为体内合成LNFP V的最佳酶，其LNFP V产量最高，副产物积累最低。通过计算机辅助的定点突变，获得了一种有益的突变体K128D，进一步提高了LNFPV的产量，构建得到的重组大肠杆菌通过分批补料培养可以产生25.68g/L的LNFP V，为进一步工业化生产与合成其他复杂母乳低聚糖奠定了基础。

公开(公告)号：CN114990037B

公开(公告)日：2024-03-26

申请号：CN202210573394.4

申请日：2022-05-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  李泽宇 ,  朱莺莺

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/61 ,  C12N15/56 ,  C12N15/54 ,  C12N15/55 ,  C12N15/53 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种高产乳酰‑N‑四糖的重组大肠杆菌的构建方法及应用，属于微生物代谢工程技术领域。本发明以前期研究中获得的高产乳酰‑N‑三糖II的重组大肠杆菌为出发菌株，并在该大肠杆菌基因组上整合有单拷贝的galE，通过质粒组合优化表达lgtA、pF和galE，并通过CRISPR‑Cas9基因编辑系统在大肠杆菌宿主基因组上敲除ugD，以缓解中间产物的代谢分流，同时加强产物合成过程中辅因子的再生与循环，进一步提高乳酰‑N‑四糖的产量，在摇瓶发酵实验过程中，重组大肠杆菌生产乳酰‑N‑四糖的能力为6.16g/L，在5L发酵罐中，乳酰‑N‑四糖的产量达到57.5g/L，为进一步工业化生产乳酰‑N‑四糖奠定了基础。

公开(公告)号：CN116769808A

公开(公告)日：2023-09-19

申请号：CN202310168797.5

申请日：2023-02-27

Applicant: 江南大学 ,  华熙生物科技股份有限公司

Inventor： 沐万孟 ,  朱莺莺 ,  陈逸晗 ,  王浩 ,  王芬 ,  陈柔霖 ,  张文立

IPC: C12N15/54 ,  A23C9/152 ,  A23C9/16 ,  A23L33/21 ,  C12N1/21 ,  C12N9/10 ,  C12P19/00 ,  C12N15/70 ,  A61K31/702 ,  A61P1/14 ,  A61P1/00 ,  A61P37/02 ,  A61K8/60 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种专一生产2′‑岩藻糖基乳糖的菌株及应用，属于微生物代谢工程技术领域。本发明公开了一种编码SAMT蛋白的核酸分子，核酸分子包括如SEQ ID NO.2所示序列或与SEQ ID NO.2具有至少98％序列同一性的核苷酸序列。该核酸分子编码的SAMT蛋白来源于Azospirillumlipoferum，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该蛋白具有优越的α1,2‑岩藻糖基转移酶催化活性和严格的底物特异性，在摇瓶发酵实验过程中，重组大肠杆菌BSS2生产2′‑岩藻糖基乳糖的能力为8.03g/L，在5L发酵罐中，2′‑岩藻糖基乳糖的产量达到112.56g/L，为目前报道的最高产量，具备工业化应用的潜力。

公开(公告)号：CN113684164B

公开(公告)日：2023-08-25

申请号：CN202110900122.6

申请日：2021-08-06

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  朱莺莺 ,  罗国聪

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/61 ,  C12N15/55 ,  C12N15/56 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高产乳酰‑N‑新四糖的微生物的构建方法及应用，属于微生物基因工程领域。本发明过表达β‑1,3‑乙酰葡萄糖胺转移酶，β‑1,4‑半乳糖基转移酶和/或UDP‑葡萄糖4差向异构酶的编码基因，使其拥有生产乳酰‑N‑四糖的合成能力。本发明通过筛选高效的β‑1,4‑半乳糖基转移酶基因，并通过组合调控乳酰‑N‑新四糖合成途径中lgtA，Aa‑β‑1,4‑GalT和galE的表达，从而精确调控代谢通路的碳通量，缓解代谢压力。在摇瓶实验中，大肠杆菌生产乳酰‑N‑新四糖的能力为0.91 g/L，在3 L发酵罐中，乳酰‑N‑新四糖的产量达到12.14 g/L，具备工业应用的前景。

公开(公告)号：CN113512544B

公开(公告)日：2023-08-08

申请号：CN202110797099.2

申请日：2021-07-14

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  武彦昌 ,  陈秋铭 ,  张文立

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/02 ,  C12P19/24 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的甘露糖异构酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了来源于微生物Deltaproteobacteria bacterium的甘露糖异构酶作为亲本，利用基因突变技术，第37位的精氨酸替换成赖氨酸和第164位的甘氨酸替换成亮氨酸，得到双突变体R37K/G164L。在温度为60℃时，测得野生酶的半衰期为46.27min,突变体酶R37K/G164L的半衰期为185.83min，两点突变体R37K/G164L在60℃的半衰期为野生酶半衰期的4倍，突变体酶相对于野生酶热稳定性明显的提高。这一发现对于研究更多热稳定性甘露糖异构酶具有重要的研究价值。

公开(公告)号：CN114107152B

公开(公告)日：2023-07-25

申请号：CN202111404385.4

申请日：2021-11-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  陈耕 ,  朱莺莺 ,  吴昊

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P19/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高产3‑岩藻糖基乳糖微生物的构建方法及应用，属于微生物基因工程领域。本发明通过筛选高效的α‑1,3‑岩藻糖基转移酶基因，并通过组合调控3‑岩藻糖基乳糖合成途径中manC、manB、wcaG和gmd在大肠杆菌中的表达，使大肠杆菌拥有生产3‑岩藻糖基乳糖的合成能力，并能够精确调控代谢通路的碳通量，缓解代谢压力。在摇瓶实验中，大肠杆菌生产3‑岩藻糖基乳糖的能力为2.01g/L，在3L发酵罐中，3‑岩藻糖基乳糖的产量达到20.3g/L，具备良好工业应用的前景。

公开(公告)号：CN111979168B

公开(公告)日：2022-07-22

申请号：CN202010834657.3

申请日：2020-08-17

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  朱莺莺 ,  万李

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N9/90 ,  C12N9/12 ,  C12N9/10 ,  C12N9/38 ,  C12N9/78 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种提高乳酰‑N‑三糖II产量的基因工程菌及生产方法，属于微生物基因工程领域。本发明通过组合调控乳酰‑N‑三糖II合成途径中glmM，glmU，glmS以及lgtA的表达，从而精确调控代谢通路的碳通量，缓解代谢压力，敲除大肠杆菌宿主乳酰‑N‑三糖II合成途径中wecB，nagB和lacZ的表达，进一步提高乳酰‑N‑三糖II的产量，在摇瓶实验中，大肠杆菌生产乳酰‑N‑三糖II的能力由0.53g/L提升至4.82g/L，在3L发酵罐中，乳酰‑N‑三糖II的产量达到46.2g/L，具备工业应用的前景。

公开(公告)号：CN113308456A

公开(公告)日：2021-08-27

申请号：CN202110496246.2

申请日：2021-05-07

Applicant: 江南大学

Inventor： 张文立 ,  沐万孟 ,  陈佳俊 ,  陈丁 ,  徐炜 ,  陈秋铭

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种热稳定性增强的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了以来源于微生物Thermoclostridium caenicola的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶作为亲本，将107位的甘氨酸Gly突变为脯氨酸Pro，155位的苯丙氨酸Phe突变为酪氨酸Tyr，162位的天冬氨酸Asp突变为苏氨酸Thr，70位的丙氨酸Ala突变为脯氨酸Pro，获得单点突变体酶G107P、F155Y、D162T、A70P和四点突变体酶G107P/F155Y/D162T/A70P，热力学和动力学稳定性得到了提高，在工业化制备D‑阿洛酮糖具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN111979168A

公开(公告)日：2020-11-24

申请号：CN202010834657.3

申请日：2020-08-17

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  朱莺莺 ,  万李

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N9/90 ,  C12N9/12 ,  C12N9/10 ,  C12N9/38 ,  C12N9/78 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种提高乳酰-N-三糖II产量的基因工程菌及生产方法，属于微生物基因工程领域。本发明通过组合调控乳酰-N-三糖II合成途径中glmM，glmU，glmS以及lgtA的表达，从而精确调控代谢通路的碳通量，缓解代谢压力，敲除大肠杆菌宿主乳酰-N-三糖II合成途径中wecB，nagB和lacZ的表达，进一步提高乳酰-N-三糖II的产量，在摇瓶实验中，大肠杆菌生产乳酰-N-三糖II的能力由0.53g/L提升至4.82g/L，在3L发酵罐中，乳酰-N-三糖II的产量达到46.2g/L，具备工业应用的前景。