一种用于H7N9亚型禽流感血清杀伤效应测定的靶细胞及鉴定方法

    公开(公告)号:CN118360236A

    公开(公告)日:2024-07-19

    申请号:CN202410259112.2

    申请日:2021-10-20

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明提供了一种用于H7N9亚型禽流感血清杀伤效应测定的靶细胞及鉴定方法,其包括如下步骤:PCR扩增目标基因片段、目的基因包装到载体中、转染、慢病毒分离和检测、测定HA蛋白表达情况、测定血清杀伤活性。本发明有着如下有益效果:本发明构建的细胞株高效均一地表达HA蛋白,在普通二级实验室即可操作,为测定H7N9血清杀伤效应提供稳定、可靠的靶细胞来源;本发明提供的细胞系带有ZSgreen荧光报告基因,无需额外的标记,且能区分靶细胞与效应细胞;本发明建立的检测H7N9禽流感免疫血清Fc效应的方法,为全面认识H7N9疫苗的免疫保护机理提供有力工具;除了针对特定的病菌外,本发明还可以对其他家禽疫苗抗体Fc免疫效应的测定提供了技术参考。

    表达H7N9亚型禽流感病毒血凝素蛋白的重组杆状病毒灭活疫苗及其制备方法与应用

    公开(公告)号:CN108888761B

    公开(公告)日:2021-11-09

    申请号:CN201810489385.0

    申请日:2018-05-21

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明涉及一种表达H7N9亚型禽流感病毒血凝素蛋白的重组杆状病毒疫苗及其制备方法与应用。该疫苗包括:重组杆状病毒rBac‑JX148HA,该重组杆状病毒能够表达H7N9禽流感病毒主要免疫抗原HA蛋白,其免疫佐剂为SEPPIC佐剂;其中所述的HA蛋白的核酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明疫苗免疫鸡后,能诱导较高的抗体滴度、提供针对H7N9亚型高致病性禽流感病毒的完全临床保护、有效抑制排毒。该疫苗安全性高,克服了传统的鸡胚生产疫苗具有鸡胚供应不稳定、外源病毒污染、废弃物产量大等缺陷,在H7N9亚型禽流感的防控上具有较好的应用前景,且符合兽用疫苗利用悬浮细胞培养技术进行大规模生产的趋势。

    一种重组的H7N9亚型禽流感病毒样颗粒及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN112079904A

    公开(公告)日:2020-12-15

    申请号:CN202011000015.X

    申请日:2020-09-22

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了一种重组的H7N9亚型禽流感病毒样颗粒及其制备方法和应用,基于重组杆状病毒昆虫细胞培养系统,分别构建了表达H7N9高致病性禽流感病毒HA蛋白、NA蛋白、M1蛋白的重组杆状病毒。将三株重组杆状病毒共感染悬浮的昆虫细胞,可收获到在细胞内自行组装的H7N9亚型禽流感病毒样颗粒。经超滤管与不同梯度浓度蔗糖浓缩纯化后,与佐剂混和乳化制备疫苗。制备的疫苗免疫鸡可诱导机体产生特异性抗体,具有免疫原性强、安全性好、遗传稳定性高等优点。以致死剂量的H7N9亚型高致病性禽流感病毒攻击后,能够提供完全的临床保护且显著抑制鸡的排毒。本发明为预防H7N9亚型禽流感病毒感染提供了一种新的方法,也为流感病毒新型疫苗的开发奠定了基础。

    稳定表达人源TIGAR基因的MDCK细胞系

    公开(公告)号:CN106479983B

    公开(公告)日:2019-05-07

    申请号:CN201610994452.5

    申请日:2016-11-11

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明属于生物技术领域,具体地涉及稳定表达人源TIGAR基因的MDCK细胞系。该细胞系是稳定表达人源TIGAR基因的MDCK细胞系TG‑418‑E5,其含有TIGAR编码基因序列,它的保藏号是CGMCC NO:12983。通过在MDCK细胞中稳定表达TIGAR基因,提高了细胞的抗凋亡能力,延长了重组细胞的存活时间。该方法不仅为研究MDCK的无血清全悬浮培养用于大规模生产细胞培养疫苗的应用奠定了基础,同时提高禽流感疫苗株的繁殖滴度节约了生产工艺成本。此外,TG‑418‑E5细胞系在抗禽流感病毒药物筛选、疫苗株筛选以及细胞培养疫苗的生产方面都展示出较好的应用前景。

    一种红细胞膜包覆的禽流感病毒样颗粒纳米疫苗及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN116585463A

    公开(公告)日:2023-08-15

    申请号:CN202310213348.8

    申请日:2023-03-08

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了一种红细胞膜包覆的禽流感病毒样颗粒纳米疫苗及其制备方法与应用,该纳米疫苗通过红细胞膜包覆重组的H7N9亚型禽流感病毒样颗粒,所述H7N9亚型禽流感病毒样颗粒同时含有HA蛋白、NA蛋白和M1蛋白。本发明的技术方案通过红细胞膜的包裹使流感病毒样颗粒疫苗可有效躲避生物屏障,进行全身的血液循环,实现纳米疫苗在脾脏中的蓄积,从而提高病毒样颗粒疫苗的生物相容性、在体内的循环时间,并降低机体免疫清除率,显著提升疫苗的体液免疫和细胞免疫效果。本发明为预防H7N9亚型禽流感病毒感染提供了一种新的方法,也为流感病毒新型疫苗的开发奠定了基础。

    一种禽流感病毒样颗粒抗原、疫苗及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN112079905B

    公开(公告)日:2022-06-14

    申请号:CN202011000033.8

    申请日:2020-09-22

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了一种禽流感病毒样颗粒抗原、疫苗及其制备方法和应用,将一株基于串联表达H7N9亚型禽流感病毒HA、NA、M1基因的重组杆状病毒转染昆虫细胞自行组装形成禽流感病毒样颗粒抗原;将本发明所制备的病毒样颗粒抗原用于制备疫苗。本发明制备的疫苗免疫鸡群后能够产生较高滴度的HI抗体、中和抗体和IgY抗体,能够提供针对H7N9亚型高致病性禽流感病毒100%的临床保护,并能有效抑制排毒。本发明不依赖于鸡胚,生产成本低、周期短;仅以低剂量一次免疫就可诱导较强的保护能力。本发明为VLP疫苗的工业化生产提供了基础。

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