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公开(公告)号：CN112251526A
公开(公告)日：2021-01-22
申请号：CN202011047766.7
申请日：2020-09-29
Applicant: 大连理工大学
Abstract: 本发明提供一种由番茄miR172a初级体编码小肽miPEP172a的预测、鉴定方法，包括以下步骤：S1、前体序列设计引物1；S2、以野生型番茄早粉2号的DNA以及cDNA为模板提取总RNA，并作为模板反转录合成cDNA，再以番茄为模板用引物2进行PCR扩增；S3、筛选鉴定；其原核表达方法包括以下步骤：S1.构建原核表达载体；S2.用重组表达质粒转化大肠杆菌感受态细胞；S3.转化大肠杆菌；S4.接种于卡纳霉素培养基，然后诱导。本发明提出的鉴定预测方法解决了当前对miRNA初级体所编码小肽筛选方法的成本问题，使小肽的快速、低价鉴定成为可能；本发明提出的原核表达方法，显著降低了小肽的合成成本，操作简单，对小肽的大量生产应用具有重要价值。
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公开(公告)号：CN108588078A
公开(公告)日：2018-09-28
申请号：CN201810430303.5
申请日：2018-05-08
Applicant: 大连理工大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/10 , C12N15/84 , A01H5/00 , A01H6/82
Abstract: 本发明提供了一种番茄抗晚疫病外显子环状RNA-EcircRNA45以及该基因的克隆方法；本发明还提供了上述番茄抗晚疫病外显子环状RNA-EcircRNA45的应用方法，用于番茄抵御病原菌侵染，即在番茄中过表达所述番茄抗晚疫病外显子环状RNA-EcircRNA45。本发明首先设计特异的环状RNA引物进行PCR、一代测序实验证实番茄抗晚疫病外显子环状RNA-EcircRNA45的客观存在；还提供了一种有效检测番茄抗晚疫病外显子环状RNA-EcircRNA45的特异qRT-PCR引物，减少了假阳性的存在。藉由本发明外显子环状RNA-EcircRNA45的过表达，可以实现对番茄晚疫病抗性基因的调控。
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公开(公告)号：CN120015136A
公开(公告)日：2025-05-16
申请号：CN202411949750.3
申请日：2024-12-27
Applicant: 大连理工大学
Abstract: 本发明涉及植物基因组学、生物信息学领域，具体涉及一种番茄多肽基因组数据库及其索引文件的构建方法。番茄多肽基因组数据库的构建方法包括：S1.将番茄多肽基因组拆分；S2.对S1得到的多个染色体进行六框翻译；S3.将S2得到的多个氨基酸序列进行组合，得到番茄多肽基因组。番茄多肽基因组数据库索引文件的构建方法包括(1)提取S2得到的多个氨基酸序列的长度、名称和氨基酸排列；(2)合并提取的多个氨基酸序列的长度、名称和氨基酸排列信息，并按照6个阅读框进行拆分；(3)运行自写脚本，根据每条氨基酸的长度计算其核苷酸的位置，并输出bed文件。本发明通过构建番茄多肽基因组及索引文件，为番茄非编码肽的挖掘提供了新的思路，对番茄分子育种有着重要意义。
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公开(公告)号：CN119220554A
公开(公告)日：2024-12-31
申请号：CN202411516426.2
申请日：2024-10-29
Applicant: 大连理工大学
Abstract: 本发明提供一种番茄抗晚疫病的基因SlPin4，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；提供了该基因的克隆方法及应用，SlPin4基因的克隆包括：以野生型番茄早粉2号的基因组为模板使用PCR技术进行扩增；将扩增纯化后的PCR产物与pMD‑19T克隆载体进行连接，将构建的pMD‑19T‑SlPin4转化至大肠杆菌DH5α中挑取单菌落，摇菌提质粒后进行测序，测序正确表明成功构建重组表达载体pBI121‑SlPin4；并且提供了该基因的应用方法，SlPin4的过表达可以正向调控番茄中的抗病相关基因，用于提高番茄植株的抗病性。本发明通过瞬时过表达SlPin4基因增强番茄对晚疫病的抗性，对培育抗病番茄及增产增收有着重要意义。
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公开(公告)号：CN114774463A
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202210377507.3
申请日：2022-04-12
Applicant: 大连理工大学
Abstract: 本发明提供了一种基于手动加压的高效瞬时茄科作物转基因方法，首先配制携带目标基因的农杆菌侵染液，然后将注射器空筒的细口处封闭，将大小适宜的茄科作物叶片和农杆菌侵染液置于注射器空筒内，并使茄科作物叶片完全浸入农杆菌侵染液中，通过反复按压注射器推杆促使菌液全部浸染茄科作物叶片，最后将浸染的茄科作物叶片取出，再培养获得瞬时转基因茄科作物叶片。该方法通过反复抽拉注射器将农杆菌侵染液多次正压渗入茄科作物叶片，从而将外源基因高效瞬时导入植物叶片细胞中。相比传统方法，本发明方法具有耗时短、操作简单、成本低、效率高等诸多优势。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108085318B
公开(公告)日：2021-05-18
申请号：CN201810057162.7
申请日：2018-01-22
Applicant: 大连理工大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/10 , C12N15/82 , A01H5/12 , A01H6/82
Abstract: 本发明提供了一种通过沉默miRNA482b来提高番茄晚疫病抗性的长链非编码RNA‑lncRNA23468，其DNA分子序列如SEQ ID NO.1所示；提供了该长链非编码RNA的克隆方法：以野生型抗晚疫病番茄L3708的cDNA为模板进行PCR扩增，将得到的PCR产物与pMD‑19T克隆载体连接，转化大肠杆菌DH5α，挑取单菌落进行测序；还提供了该长链非编码RNA的应用方法。本发明方法得到的长链非编码RNA在番茄中瞬时过表达后，番茄miR482b的表达量显著降低，对晚疫病的抗性显著提高；其用于沉默miR482b，对培育抗晚疫病番茄品种具有重要意义。
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公开(公告)号：CN119120504A
公开(公告)日：2024-12-13
申请号：CN202411516425.8
申请日：2024-10-29
Applicant: 大连理工大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/70 , C12N15/82 , A01N37/46 , A01P3/00 , A01G13/00 , A01G7/06 , A01H5/00 , A01H6/82 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供一种番茄抗晚疫病基因SlprePIP2的克隆及其与小肽SlPIP2的应用，番茄抗晚疫病基因SlprePIP2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的小肽SlPIP2前体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，小肽SlPIP2来源于SEQ ID NO.2的C末端，如SEQ ID NO.3所示。本发明筛选到响应晚疫病菌诱导显著上调的SlprePIP2基因，提供了该基因的克隆方法并构建了PBI121‑SlprePIP2过表达载体，SlprePIP2的过表达可以提高植株对晚疫病菌的抗性。此外，对番茄植株喷施小肽SlPIP2，可以通过提高抗病蛋白PR的转录水平，进一步增强植株的抗病性，这有助于挖掘新型植物抗病多肽的抗病基因，为开展防治晚疫病的工作提供新的思路。
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公开(公告)号：CN116640759A
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202310487941.1
申请日：2023-05-04
Applicant: 大连理工大学
Abstract: 本发明提供一种番茄抗晚疫病基因LTPg1的克隆方法与应用，克隆方法包括以番茄早粉2号的cDNA为模板进行PCR扩增，将得到的PCR产物与pMD‑19T克隆载体连接，转化大肠杆菌DH5α，挑取单菌落提取质粒，进行质粒PCR后将质粒送测序，与LTPg1一致的即为连接pMD‑19T正确的质粒；还提供了番茄抗晚疫病基因LTPg1在番茄抗晚疫病中的应用。本发明抗晚疫病基因LTPg1，将其过表达以后，可以增强番茄对晚疫病的抗性。此外，LTPg1的过表达还会上调其他PR基因的表达量，本发明为揭示nsLTPs参与番茄抗晚疫病的分子机制奠定了基础。
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公开(公告)号：CN108085318A
公开(公告)日：2018-05-29
申请号：CN201810057162.7
申请日：2018-01-22
Applicant: 大连理工大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/10 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/82
Abstract: 本发明提供了一种通过沉默miRNA482b来提高番茄晚疫病抗性的长链非编码RNA-lncRNA23468，其DNA分子序列如SEQ ID NO.1所示；提供了该长链非编码RNA的克隆方法：以野生型抗晚疫病番茄L3708的cDNA为模板进行PCR扩增，将得到的PCR产物与pMD-19T克隆载体连接，转化大肠杆菌DH5α，挑取单菌落进行测序；还提供了该长链非编码RNA的应用方法。本发明方法得到的长链非编码RNA在番茄中瞬时过表达后，番茄miR482b的表达量显著降低，对晚疫病的抗性显著提高；其用于沉默miR482b，对培育抗晚疫病番茄品种具有重要意义。
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公开(公告)号：CN1624146A
公开(公告)日：2005-06-08
申请号：CN200410155542.2
申请日：2004-12-17
Applicant: 大连理工大学
IPC: C12N15/87
Abstract: 一种通过子房滴注获得转基因植物的方法属于生物工程领域。涉及一种应用于有花植物，通过子房滴注获得转基因植物的方法，无需经过原生质体培养、细胞培养、组织培养以及再生植株等过程，属于生物工程领域。其特征是在植物授粉后花粉粒萌发、雄核通过花粉管通道进入胚囊后，完全切除花柱及0－1.0mm的子房，在切口处滴注外源DNA，使其通过子房进入胚囊，直接转化处于融合期无壁的生殖细胞或受精卵，达到遗传转化之目的，不同转化对象的转化效率可达到1－30％，安全、高效，可重复。
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