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公开(公告)号：CN112251526A
公开(公告)日：2021-01-22
申请号：CN202011047766.7
申请日：2020-09-29
Applicant: 大连理工大学
Abstract: 本发明提供一种由番茄miR172a初级体编码小肽miPEP172a的预测、鉴定方法，包括以下步骤：S1、前体序列设计引物1；S2、以野生型番茄早粉2号的DNA以及cDNA为模板提取总RNA，并作为模板反转录合成cDNA，再以番茄为模板用引物2进行PCR扩增；S3、筛选鉴定；其原核表达方法包括以下步骤：S1.构建原核表达载体；S2.用重组表达质粒转化大肠杆菌感受态细胞；S3.转化大肠杆菌；S4.接种于卡纳霉素培养基，然后诱导。本发明提出的鉴定预测方法解决了当前对miRNA初级体所编码小肽筛选方法的成本问题，使小肽的快速、低价鉴定成为可能；本发明提出的原核表达方法，显著降低了小肽的合成成本，操作简单，对小肽的大量生产应用具有重要价值。
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公开(公告)号：CN108588078A
公开(公告)日：2018-09-28
申请号：CN201810430303.5
申请日：2018-05-08
Applicant: 大连理工大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/10 , C12N15/84 , A01H5/00 , A01H6/82
Abstract: 本发明提供了一种番茄抗晚疫病外显子环状RNA-EcircRNA45以及该基因的克隆方法；本发明还提供了上述番茄抗晚疫病外显子环状RNA-EcircRNA45的应用方法，用于番茄抵御病原菌侵染，即在番茄中过表达所述番茄抗晚疫病外显子环状RNA-EcircRNA45。本发明首先设计特异的环状RNA引物进行PCR、一代测序实验证实番茄抗晚疫病外显子环状RNA-EcircRNA45的客观存在；还提供了一种有效检测番茄抗晚疫病外显子环状RNA-EcircRNA45的特异qRT-PCR引物，减少了假阳性的存在。藉由本发明外显子环状RNA-EcircRNA45的过表达，可以实现对番茄晚疫病抗性基因的调控。
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公开(公告)号：CN119120504A
公开(公告)日：2024-12-13
申请号：CN202411516425.8
申请日：2024-10-29
Applicant: 大连理工大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/70 , C12N15/82 , A01N37/46 , A01P3/00 , A01G13/00 , A01G7/06 , A01H5/00 , A01H6/82 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供一种番茄抗晚疫病基因SlprePIP2的克隆及其与小肽SlPIP2的应用，番茄抗晚疫病基因SlprePIP2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的小肽SlPIP2前体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，小肽SlPIP2来源于SEQ ID NO.2的C末端，如SEQ ID NO.3所示。本发明筛选到响应晚疫病菌诱导显著上调的SlprePIP2基因，提供了该基因的克隆方法并构建了PBI121‑SlprePIP2过表达载体，SlprePIP2的过表达可以提高植株对晚疫病菌的抗性。此外，对番茄植株喷施小肽SlPIP2，可以通过提高抗病蛋白PR的转录水平，进一步增强植株的抗病性，这有助于挖掘新型植物抗病多肽的抗病基因，为开展防治晚疫病的工作提供新的思路。
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公开(公告)号：CN116640759A
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202310487941.1
申请日：2023-05-04
Applicant: 大连理工大学
Abstract: 本发明提供一种番茄抗晚疫病基因LTPg1的克隆方法与应用，克隆方法包括以番茄早粉2号的cDNA为模板进行PCR扩增，将得到的PCR产物与pMD‑19T克隆载体连接，转化大肠杆菌DH5α，挑取单菌落提取质粒，进行质粒PCR后将质粒送测序，与LTPg1一致的即为连接pMD‑19T正确的质粒；还提供了番茄抗晚疫病基因LTPg1在番茄抗晚疫病中的应用。本发明抗晚疫病基因LTPg1，将其过表达以后，可以增强番茄对晚疫病的抗性。此外，LTPg1的过表达还会上调其他PR基因的表达量，本发明为揭示nsLTPs参与番茄抗晚疫病的分子机制奠定了基础。
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公开(公告)号：CN108085318A
公开(公告)日：2018-05-29
申请号：CN201810057162.7
申请日：2018-01-22
Applicant: 大连理工大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/10 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/82
Abstract: 本发明提供了一种通过沉默miRNA482b来提高番茄晚疫病抗性的长链非编码RNA-lncRNA23468，其DNA分子序列如SEQ ID NO.1所示；提供了该长链非编码RNA的克隆方法：以野生型抗晚疫病番茄L3708的cDNA为模板进行PCR扩增，将得到的PCR产物与pMD-19T克隆载体连接，转化大肠杆菌DH5α，挑取单菌落进行测序；还提供了该长链非编码RNA的应用方法。本发明方法得到的长链非编码RNA在番茄中瞬时过表达后，番茄miR482b的表达量显著降低，对晚疫病的抗性显著提高；其用于沉默miR482b，对培育抗晚疫病番茄品种具有重要意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN1624146A
公开(公告)日：2005-06-08
申请号：CN200410155542.2
申请日：2004-12-17
Applicant: 大连理工大学
IPC: C12N15/87
Abstract: 一种通过子房滴注获得转基因植物的方法属于生物工程领域。涉及一种应用于有花植物，通过子房滴注获得转基因植物的方法，无需经过原生质体培养、细胞培养、组织培养以及再生植株等过程，属于生物工程领域。其特征是在植物授粉后花粉粒萌发、雄核通过花粉管通道进入胚囊后，完全切除花柱及0－1.0mm的子房，在切口处滴注外源DNA，使其通过子房进入胚囊，直接转化处于融合期无壁的生殖细胞或受精卵，达到遗传转化之目的，不同转化对象的转化效率可达到1－30％，安全、高效，可重复。
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公开(公告)号：CN112195178B
公开(公告)日：2023-11-24
申请号：CN202010984101.2
申请日：2020-09-18
Applicant: 大连理工大学
Abstract: 本发明提供了一种通过沉默miR394来提高番茄晚疫病抗性的长链非编码RNA‑lncRNA40787，所述DNA分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；提供了该长链非编码RNA的克隆方法：以野生型感晚疫病番茄早粉2号的cDNA为模板进行PCR扩增，将得到的PCR产物与pMD‑18T克隆载体连接，转化大肠杆菌DH5α，挑取单菌落进行测序：还提供了该长链非编码RNA的应用方法，用于番茄抵御病原菌侵染，即在番茄中瞬时过表达所述番茄抗晚疫病的长链非编码RNA‑lncRNA40787。本发明得到的长链非编码RNA在番茄瞬时过表达后，番茄miR394的表达量显著降
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公开(公告)号：CN116947990A
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202310857702.0
申请日：2023-07-13
Applicant: 大连理工大学
IPC: C07K14/415 , C12N15/29 , C12N15/84 , C12N15/70 , A01H5/00 , A01H6/82 , A01N37/46 , A01P21/00 , A01P3/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供一种番茄抗晚疫病基因SlPROPEP的克隆及其与小肽SlPep的应用，番茄抗晚疫病基因SlPROPEP的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，其编码的小肽SlPep前体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，小肽SlPep来源于SEQ ID NO:3的C末端，如SEQ ID NO:1所示。本发明构建了SlPROPEP的重组表达载体，SlPep前体蛋白的编码基因SlPROPEP的过表达，可以实现对番茄晚疫病抗性基因的调控，SlPROPEP的过表达可以提高植物体内抗病蛋白PR的转录积累，PR蛋白可直接影响植株的抗病性。另外，小肽SlPep通过喷施番茄植株，可增强番茄免疫，提高番茄植株对致病疫霉的抗性，这有助于番茄抗药性的保护和番茄产业的发展。而且小肽SlPep可提高植物体内抗病蛋白PR的转录积累，PR蛋白可直接影响植株的抗病性。
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公开(公告)号：CN106916825B
公开(公告)日：2020-06-02
申请号：CN201710172194.7
申请日：2017-03-22
Applicant: 大连理工大学
Abstract: 本发明提供了一种番茄抗晚疫病基因SpNBS‑LRR，其DNA分子序列如SEQ ID NO.1所示；提供了该基因的克隆方法，以野生型抗晚疫病番茄L3708的cDNA为模板进行PCR扩增；将得到的PCR产物与pMD‑19T克隆载体连接，转化大肠杆菌DH5α，挑取单菌落进行测序；还提供了该基因的应用方法，培育抗晚疫病番茄植株。本发明方法得到的过表达植株中SpNBS‑LRR的表达量高于野生型植株，其抗晚疫病效果更优。本发明通过过表达SpNBS‑LRR基因使番茄对晚疫病的抗性增强，对培育抗晚疫病番茄品种具有重要意义。
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公开(公告)号：CN106916825A
公开(公告)日：2017-07-04
申请号：CN201710172194.7
申请日：2017-03-22
Applicant: 大连理工大学
Abstract: 本发明提供了一种番茄抗晚疫病基因SpNBS‑LRR，其DNA分子序列如SEQ ID NO.1所示；提供了该基因的克隆方法，以野生型抗晚疫病番茄L3708的cDNA为模板进行PCR扩增；将得到的PCR产物与pMD‑19T克隆载体连接，转化大肠杆菌DH5α，挑取单菌落进行测序；还提供了该基因的应用方法，培育抗晚疫病番茄植株。本发明方法得到的过表达植株中SpNBS‑LRR的表达量高于野生型植株，其抗晚疫病效果更优。本发明通过过表达SpNBS‑LRR基因使番茄对晚疫病的抗性增强，对培育抗晚疫病番茄品种具有重要意义。
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