公开(公告)号：CN104988217A

公开(公告)日：2015-10-21

申请号：CN201510350580.1

申请日：2015-06-24

Applicant: 吉林大学

Inventor： 于录 ,  王超 ,  杨志强 ,  郭娜 ,  汪杨 ,  唐旭东 ,  孟日增 ,  安雅男 ,  张巧丽 ,  施晓晨

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04

CPC classification number: C12Q1/6851 ,  C12Q2545/101 ,  C12Q2563/107 ,  C12Q2561/113

Abstract: 本发明公开了一种检测结核分枝杆菌生物被膜产膜能力的方法，它包括：1）提取结核分枝杆菌总RNA，反转录成cDNA；2）以cDNA为模板，用内参基因16SrRNA引物，检测基因Rv3519引物荧光定量PCR检测；最后由公式：Rv3519基因的相对表达量=2-ΔΔCt，计算结核分枝杆菌中Rv3519基因的相对含量。确定结核分枝杆菌中的Rv3519表达差异，通过对不同的结核分枝杆菌检测，结果表明Rv3519表达量越高，成膜能力越强，与对结核分枝杆菌培养后，再进行结晶紫染色法检测被膜的结果相符。时间短、操作简便、特异性好、灵敏度高、检测成本低，不需要对结核分枝杆菌进行培养，安全可靠。为研究结核分枝杆菌的耐药性提供可靠的实验基础。

公开(公告)号：CN104560795A

公开(公告)日：2015-04-29

申请号：CN201410788904.5

申请日：2014-12-19

Applicant: 吉林大学

Inventor： 于录 ,  杨志强 ,  郭娜 ,  唐旭东 ,  范君文 ,  汪杨 ,  孟日增 ,  宋宇 ,  张巧丽 ,  王超

IPC: C12N1/20 ,  C12R1/32

CPC classification number: C12N1/20

Abstract: 本发明公开了结核分枝杆菌生物被膜体外培养的培养基，它包括：天冬酰胺4g、枸橼酸2g、三水合磷酸氢二钾0.3-1g、七水合硫酸镁0.5-1g、无水柠檬酸铁铵0.05-1g、甘油60ml、加去离子水、氨水调节pH至7.0，定容至1000ml；采用该结核分枝杆菌生物被膜体外培养的培养基，用血清瓶体外培养结核分枝杆菌生物被膜，生物被膜生长时间缩短一周左右，比传统方法培养时间缩短一周左右，相同时间内被膜厚度高于传统方法，提高了被膜的产量。为研究结核分枝杆菌致病机制、耐药性以及药物筛选提供了有利条件。

公开(公告)号：CN104818315A

公开(公告)日：2015-08-05

申请号：CN201410780003.1

申请日：2014-12-17

Applicant: 吉林大学

Inventor： 于录 ,  杨志强 ,  孟日增 ,  唐旭东 ,  范君文 ,  汪杨 ,  宋宇 ,  郭娜 ,  张巧丽 ,  王超

IPC: C12Q1/06 ,  C12R1/32

Abstract: 本发明公开了一种结晶紫染色检测结核分枝杆菌生物被膜方法，它包括：洗涤生物被膜；50摄氏度干燥，在0.5-1.5%结晶紫溶液中孵育；洗涤后，50摄氏度干燥；加95%乙醇孵育，涡旋震荡，制备悬液；分光光度计测悬液A570nm的吸光度读数；测得的生长曲线具有良好的线型关系。可以对生物被膜进行更为精准地定量检测；利用结晶紫染色检测结核分枝杆菌生物被膜，其突出的优点是：检测方法步骤简单，对仪器的要求低；能在短时间内，条件简陋的情况下检测结核分枝杆菌生物被膜的生长情况，且较银染等其他染色方法更加经济，精准地定量检测生物被膜，对结核分枝杆菌治病机制、耐药性研究以及药物筛选具有重要的意义。

公开(公告)号：CN104819965A

公开(公告)日：2015-08-05

申请号：CN201410779996.0

申请日：2014-12-17

Applicant: 吉林大学

Inventor： 于录 ,  杨志强 ,  宾文 ,  范君文 ,  庞旭东 ,  汪杨 ,  申凤鸽 ,  张巧丽 ,  王超 ,  安雅男

IPC: G01N21/64 ,  G01N1/30

Abstract: 本发明提供了一种结核分枝杆菌生物被膜检测方法，采用Sytox green/Sytox orange荧光染色，用酶标仪检测悬液，进行结核分枝杆菌生物被膜检测，检测方法步骤简单，对仪器的要求低；能在短时间内，检测结核分枝杆菌生物被膜的生长情况，得到的生长曲线具有良好的线型关系。可以对生物被膜进行更为精准地定量检测，且较银染等其他染色方法更加快捷；有助于临床和药物研究人员筛选出有效的抗结核潜在药物，为结核分枝杆菌致病机制以及耐药性研究奠定基础。