公开(公告)号：CN105002195B

公开(公告)日：2018-08-10

申请号：CN201510462709.8

申请日：2015-08-01

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 李海燕 ,  李晓薇 ,  李玉 ,  王法微 ,  赵竟男 ,  李校堃 ,  王琦 ,  刘秀明 ,  姚娜 ,  孙天旭 ,  董园园 ,  王南 ,  王秀然 ,  卢天成 ,  王岩 ,  孙喆

IPC: C12N15/62 ,  C07K19/00 ,  C12N15/80 ,  A61K39/00 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了一种猪蓝耳病重组疫苗，将猪蓝耳病病毒ORF3基因和ORF5基因串联，构建了融合基因ORF3‑ORF5，插入真菌特异性双T‑DNA安全表达载体pCB130NG中，获得一种表达载体pCB130NG‑ORF3‑ORF5，利用PEG法、农杆菌介导法或电击法转化食药用真菌原生质体，经鉴定为阳性的菌丝体，培养获得T1代子实体，利用PCR筛选出只含目的基因而不含选择标记基因的子实体个体，培养至T2代，获得稳定表达猪蓝耳病病毒基因的转基因食药用真菌。通过转基因真菌菌丝的发酵培养，离心收集菌丝，烘干或冻干后，粉碎制备猪蓝耳病重组疫苗。利用本发明生产的猪蓝耳病疫苗各批次间质量差异小、产量大、成本低，且可以直接通过口服饲喂动物，具有广泛的社会效益和经济效益。

公开(公告)号：CN105002195A

公开(公告)日：2015-10-28

申请号：CN201510462709.8

申请日：2015-08-01

Applicant: 吉林农业大学

Inventor： 李海燕 ,  李晓薇 ,  李玉 ,  王法微 ,  赵竟男 ,  李校堃 ,  王琦 ,  刘秀明 ,  姚娜 ,  孙天旭 ,  董园园 ,  王南 ,  王秀然 ,  卢天成 ,  王岩 ,  孙喆

IPC: C12N15/62 ,  C07K19/00 ,  C12N15/80 ,  A61K39/00 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了一种猪蓝耳病重组疫苗，将猪蓝耳病病毒ORF3基因和ORF5基因串联，构建了融合基因ORF3-ORF5，插入真菌特异性双T-DNA安全表达载体pCB130NG中，获得一种表达载体pCB130NG-ORF3-ORF5，利用PEG法、农杆菌介导法或电击法转化食药用真菌原生质体，经鉴定为阳性的菌丝体，培养获得T1代子实体，利用PCR筛选出只含目的基因而不含选择标记基因的子实体个体，培养至T2代，获得稳定表达猪蓝耳病病毒基因的转基因食药用真菌。通过转基因真菌菌丝的发酵培养，离心收集菌丝，烘干或冻干后，粉碎制备猪蓝耳病重组疫苗。利用本发明生产的猪蓝耳病疫苗各批次间质量差异小、产量大、成本低，且可以直接通过口服饲喂动物，具有广泛的社会效益和经济效益。