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公开(公告)号：CN109652392B
公开(公告)日：2020-12-04
申请号：CN201910127543.2
申请日：2019-02-20
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种阿魏酸酯酶及其制备方法和应用，该来源于土壤宏基因文库的阿魏酸酯酶基因，其核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。该基因含有极为罕见的四肽SXXK基序，将该酯酶基因插入到质粒pET28a(+)后，转化至大肠杆菌BL21(DE3)中实现异源表达。纯化后的重组酶(DLFae4)分子量为38.3kDa。此外，本发明首次提出新型阿魏酸酯酶可以水解氨苄青霉素、青霉素和头孢唑林等多种内酰胺类抗生素。定点诱变实验表明DLFae4的催化三联体由丝氨酸(S11)，组氨酸(H74)和天冬氨酸(D302)组成，三者中任何氨基酸的突变都会导致DLFae4失去催化能力。DLFae4对阿魏酸甲酯具有高水解活性，且具有良好的热稳定性。在纤维素酶的存在下，DLFae4可明显提高从去淀粉麦麸中释放阿魏酸的量。本发明的新型阿魏酸酯酶，由于其特有的活性及酶学特性，使其可应用于饲料、造纸、食品、制药等领域。
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公开(公告)号：CN109652392A
公开(公告)日：2019-04-19
申请号：CN201910127543.2
申请日：2019-02-20
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12N9/18 , C12Y301/01073
Abstract: 本发明提供了一种阿魏酸酯酶及其制备方法和应用，该来源于土壤宏基因文库的阿魏酸酯酶基因，其核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。该基因含有极为罕见的四肽SXXK基序，将该酯酶基因插入到质粒pET28a(+)后，转化至大肠杆菌BL21(DE3)中实现异源表达。纯化后的重组酶(DLFae4)分子量为38.3kDa。此外，本发明首次提出新型阿魏酸酯酶可以水解氨苄青霉素、青霉素和头孢唑林等多种内酰胺类抗生素。定点诱变实验表明DLFae4的催化三联体由丝氨酸(S11)，组氨酸(H74)和天冬氨酸(D302)组成，三者中任何氨基酸的突变都会导致DLFae4失去催化能力。DLFae4对阿魏酸甲酯具有高水解活性，且具有良好的热稳定性。在纤维素酶的存在下，DLFae4可明显提高从去淀粉麦麸中释放阿魏酸的量。本发明的新型阿魏酸酯酶，由于其特有的活性及酶学特性，使其可应用于饲料、造纸、食品、制药等领域。
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公开(公告)号：CN108342371A
公开(公告)日：2018-07-31
申请号：CN201810324103.1
申请日：2018-04-12
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种来源于土壤的新型阿魏酸酯酶基因，其核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。将该酯酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达，纯化后的重组酶(FAE-Xuan)分子量大小为29kDa。FAE-Xuan对底物阿魏酸甲酯的催化活性最高，酶活为40U/mg，其最适温度为30℃，最适pH为5.0。在pH 3.0-10.0下反应4h后，该酶仍能保持75％以上的活性，显示出较强的pH稳定性。本新型阿魏酸酯酶FAE-Xuan对金属离子和有机溶剂的耐受性较好。底物利用偏好性及系统发育分析表明FAE-Xuan属于A型阿魏酸酯酶。本发明中FAE-Xuan的这些良好酶学性质，使其在食品、制药和饲料等领域的工业生产中具有广泛的应用前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108342371B
公开(公告)日：2022-06-24
申请号：CN201810324103.1
申请日：2018-04-12
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种来源于土壤的新型阿魏酸酯酶基因，其核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。将该酯酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达，纯化后的重组酶(FAE‑Xuan)分子量大小为29kDa。FAE‑Xuan对底物阿魏酸甲酯的催化活性最高，酶活为40U/mg，其最适温度为30℃，最适pH为5.0。在pH 3.0‑10.0下反应4h后，该酶仍能保持75％以上的活性，显示出较强的pH稳定性。本新型阿魏酸酯酶FAE‑Xuan对金属离子和有机溶剂的耐受性较好。底物利用偏好性及系统发育分析表明FAE‑Xuan属于A型阿魏酸酯酶。本发明中FAE‑Xuan的这些良好酶学性质，使其在食品、制药和饲料等领域的工业生产中具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN110982803B
公开(公告)日：2022-09-27
申请号：CN201911359278.7
申请日：2019-12-25
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种来源于土壤宏基因组文库的新型邻苯二甲酸酯水解酶基因，其核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.l和SEQ ID N0.2所示。将该酯酶基因连接到表达载体pET28a(+)后，转化至大肠杆菌BL21(DE3)中实现异源表达。纯化后的重组酶(EstJ6)分子量为33.31kDa。EstJ6对邻苯二甲酸酯具有广泛的底物特异性，EstJ6不仅可以水解具有简单侧链的邻苯二甲酸酯，而且可以水解具有复杂且较长侧链的邻苯二甲酸二乙基己酯和邻苯二甲酸单乙基己酯。此外，定点突变实验表明EstJ6的催化三联体残基为S146‑E240‑H270，三者中任何氨基酸的突变都会导致EstJ6失去催化能力。本发明中的新型邻苯二甲酸酯水解酶，由于其特有的活性及酶学特性，使其可应用于食品工业、农业及生物技术等领域。
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公开(公告)号：CN109402087B
公开(公告)日：2021-07-13
申请号：CN201811494573.9
申请日：2018-12-07
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N9/18 , C12N15/55 , C12N15/70 , A62D3/02 , A62D101/28
Abstract: 本发明提供了一种来源于土壤宏基因文库的阿魏酸酯酶基因，其核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。将该酯酶基因插入到质粒pET‑28a(+)后，转化至大肠杆菌BL21(DE3)中实现异源表达。纯化后的重组酶(BDS4)分子量为38.8kDa。此外，本发明首次提出新型阿魏酸酯酶可以水解邻苯二甲酸二甲酯，邻苯二甲酸二乙酯，邻苯二甲酸二丁酯等多种塑化剂。定点诱变实验表明BDS4的催化三联体由丝氨酸(S158)，天冬氨酸(D256)和组氨酸(H286)组成，三者中任何氨基酸的突变都会导致BDS4失去催化能力。在木聚糖酶的存在下，BDS4可明显提高从去淀粉麦麸中释放阿魏酸的量。本发明的新型阿魏酸酯酶，由于其特有的活性及酶学特性，使其可应用于饲料、造纸、食品、制药等领域。
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公开(公告)号：CN110982803A
公开(公告)日：2020-04-10
申请号：CN201911359278.7
申请日：2019-12-25
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种来源于土壤宏基因组文库的新型邻苯二甲酸酯水解酶基因，其核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.l和SEQ ID N0.2所示。将该酯酶基因连接到表达载体pET28a(+)后，转化至大肠杆菌BL21(DE3)中实现异源表达。纯化后的重组酶(EstJ6)分子量为33.31kDa。EstJ6对邻苯二甲酸酯具有广泛的底物特异性，EstJ6不仅可以水解具有简单侧链的邻苯二甲酸酯，而且可以水解具有复杂且较长侧链的邻苯二甲酸二乙基己酯和邻苯二甲酸单乙基己酯。此外，定点突变实验表明EstJ6的催化三联体残基为S146-E240-H270，三者中任何氨基酸的突变都会导致EstJ6失去催化能力。本发明中的新型邻苯二甲酸酯水解酶，由于其特有的活性及酶学特性，使其可应用于食品工业、农业及生物技术等领域。
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公开(公告)号：CN109402087A
公开(公告)日：2019-03-01
申请号：CN201811494573.9
申请日：2018-12-07
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N9/18 , C12N15/55 , C12N15/70 , A62D3/02 , A62D101/28
Abstract: 本发明提供了一种来源于土壤宏基因文库的阿魏酸酯酶基因，其核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。将该酯酶基因插入到质粒pET-28a(+)后，转化至大肠杆菌BL21(DE3)中实现异源表达。纯化后的重组酶(BDS4)分子量为38.8kDa。此外，本发明首次提出新型阿魏酸酯酶可以水解邻苯二甲酸二甲酯，邻苯二甲酸二乙酯，邻苯二甲酸二丁酯等多种塑化剂。定点诱变实验表明BDS4的催化三联体由丝氨酸(S158)，天冬氨酸(D256)和组氨酸(H286)组成，三者中任何氨基酸的突变都会导致BDS4失去催化能力。在木聚糖酶的存在下，BDS4可明显提高从去淀粉麦麸中释放阿魏酸的量。本发明的新型阿魏酸酯酶，由于其特有的活性及酶学特性，使其可应用于饲料、造纸、食品、制药等领域。
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